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Biology

Freshwater mussels के प्रजनन की स्थिति और लार्वा विकास की विशेषता के लिए एक गैर-घातक विधि का मानकीकरण (Bivalvia: Unionida)

Published: October 4, 2019 doi: 10.3791/60244
Automatic Translation
1, 2, 1
1Wetland and Aquatic Research Center, United States Geological Survey, 2Garcon Point Aquatic Research Center, Florida Fish and Wildlife Conservation Commission

Summary

मीठे पानी की मूसल संरक्षण प्रजनन पैटर्न और प्रजातियों की प्रक्रियाओं की निगरानी पर निर्भर है। यह अध्ययन गिल सामग्री के नमूने के लिए एक गैर घातक प्रोटोकॉल मानकीकृत करता है, लार्वा विकास की विशेषता है, और एकत्र डेटा के लिए एक डिजिटल भंडार प्रदान करता है। इस प्रोटोकॉल-डेटाबेस पैकेज अभेद्य प्रजातियों की वसूली में mussel शोधकर्ताओं के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण होगा.

Abstract

जनसंख्या वसूली के लिए प्रबंधन करते समय, लुप्तप्राय प्रजातियों के समय, विकास और प्रजनन पैटर्न की सक्रिय रूप से निगरानी करना महत्वपूर्ण है। मीठे पानी के mussels दुनिया में सबसे अभेद्य जीवों में से एक हैं, लेकिन जल्दी लार्वा (glochidial) विकास और विचार अवधि के बारे में जानकारी अभी भी कई प्रजातियों के लिए कमी है. पिछले अध्ययनों जटिल जीवन के इतिहास के मंच पर ध्यान केंद्रित किया है जब महिला mussels मेजबान मछली parasitize करने के लिए तैयार हैं, लेकिन कुछ अध्ययनों के विचार अवधि और लार्वा विकास के समय पर ध्यान केंद्रित किया है. यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं गैर घातक महिला mussels के लिए gravidity की स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए अनुमति देता है. इस अध्ययन के परिणाम बताते हैं कि इस विधि एक महिला mussel के लिए gravid रहने या नमूना प्रदर्शन किया गया है के बाद फिर से gravid बनने की क्षमता को प्रभावित नहीं करता है. इस विधि का लाभ संघीय धमकी दी या लुप्तप्राय प्रजातियों या उच्च संरक्षण चिंता के अन्य आबादी पर इसके उपयोग की अनुमति हो सकती है. इस प्रोटोकॉल दोनों संरक्षित या जीवित व्यक्तियों पर उपयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और mussel प्रजातियों की एक किस्म पर परीक्षण किया गया था. उपलब्ध कराए गए डेटाबेस प्रजनन आदतों के समय के बारे में जानकारी की एक चौड़ाई के लिए एक भंडार है और भविष्य मीठे पानी mussel अनुसंधान, संरक्षण, और वसूली के प्रयासों की सुविधा होगी.

Introduction

मीठे पानी की प्रणालियों में आबादी की दृढ़ता प्रजनन और भर्ती की सफलता पर निर्भर करता है। परजीवी जीवों के लिए, जीवन चक्र की जटिलताओं की पहचान (उदाहरण के लिए, लार्वा विकास और मेजबान आकर्षण रणनीतियों के चरणों) एक जीव की प्रजनन आदतों और महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं है कि भर्ती को प्रभावित करने में अंतर्दृष्टि दे सकते हैं. इस तरह की जानकारी महत्वपूर्ण हो जाता है जब प्रजातियों imperiled रहे हैं, और सफल भर्ती के लिए शेष आबादी को बनाए रखने की जरूरत है, या यदि वसूली extirpated आबादी को पुनर्स्थापित करने के लिए बंदी प्रचार के उपयोग की आवश्यकता है.

मीठे पानी के mussels (Bivalvia: Unionida) दुनिया भर में जीवों के सबसे अभेद्य समूहों में से एक माना जाता है और प्रजातियों के एक संकलन विशेष प्रजनन आदतों अनुसंधान प्रयासों में सहायता कर सकताहै 1,2,3 ,4,5. 800 से अधिक वर्तमान में मान्यता प्राप्त प्रजातियों दुनिया भर में वितरित के साथ, मीठे पानी mussels उत्तर और दक्षिण अमेरिका में विविधता के आकर्षण के केंद्र है, और दक्षिण पूर्वी एशिया लेकिन आवश्यक जीवन इतिहास की जानकारी कई प्रजातियों2के लिए अज्ञात है, 5,6,7. इस आदेश के भीतर परिवारों को परजीवी लार्वा चरणों कि एक मेजबान7,8 के लिए लगाव के दौरान मुक्त रहने वाले किशोरों में कायापलट पूरा होने की विशेषताहै. यह अनूठा जीवन इतिहास चरण मीठे पानी की प्रणालियों में जैव विविधता के लिए योगदान देता है, जो वर्तमान में संकट में हैं9. अभेद्यता के उच्च स्तर जलमार्ग के प्रदूषण, आवास परिवर्तन और विनाश, मेजबान मछलियों की बहुतायत और विविधता में कटौती, और आक्रामक प्रजातियों की शुरूआत1सहित कई मानवजनित खतरों के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है, 10| बेन्थिक फिल्टर फीडरों के रूप में, मसल्स सब्सट्रेट में बिल करते हैं और दूषित प्रदूषकों के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं जो जलसंभर11में फैलते हैं। मूसल प्रजातियों की वसूली उचित है क्योंकि वे कार्बन पृथक्करण, एक खाद्य स्रोत, और11खिला फिल्टर द्वारा जल शोधन सहित पारिस्थितिकी तंत्र सेवाओं की एक विस्तृत विविधता प्रदान करते हैं। इसके अलावा, mussels पारिस्थितिकी तंत्र के स्वास्थ्य को इंगित करने के लिए पाया गया है, जैव विविधता को बढ़ावा देने, और बदले में, एक पारिस्थितिकी तंत्र के रिसायलेंसी में वृद्धि12.

कई मीठे पानी mussel अध्ययन बेहतर प्रजातियों की स्थिति आकलन और प्रबंधन रणनीतियों को सूचित करने के लिए प्रारंभिक जीवन के इतिहास आवश्यकताओं की जांच पर ध्यान केंद्रित किया है. मीठे पानी के mussel परिवारों को इस अध्ययन के लिए प्रासंगिक (जैसे, Hyriide, Margaritiferide, Unionide) एक अद्वितीय जीवन इतिहास रणनीति है जहां महिलाओं के बच्चे लार्वा (ग्लोकिडिया) उनके marsupial gills8में . विभिन्न रणनीतियों के माध्यम से, मादा मूसल परिपक्व ग्लोचिडिया को मार्सूपियल गिल्स से निष्कासित कर के साथ एक कशेरुकी मेजबान को ग्लोचिडिया13के साथ परजीवी बना देती है। गिलों के भीतर ग्लोकिडियल विकास पर अनुसंधान को एक तकनीक से संशोधित किया गया था , जो जीवित मूसलों से गोनाडल तरल पदार्थ का नमूना लेने और युग्मक उत्पादन14,15,16 कामूल्यांकन करने के लिए हाइपोडर्मिक सीरिंज का उपयोग करता है . जैसा कि शोधकर्ताओं ने गोनाड नमूने के लिए इस गैर-घातक पद्धति को मान्य किया, इसे मार्सूपियल गिल नमूने के लिए अनुकूलित किया गया था ताकि अंड विकास15,16का मूल्यांकन किया जा सके . ब्रोड विकास का उपयोग जातिवृत् तीय संबंधों को समझने के लिए किया जा सकता है क्योंकि कुछ मूसल प्रजातियां केवल बाहरी दो गिल्स (इकोब्रैंकस) में ग्लोचिडिया को पैदा कर सकती हैं, केवल आंतरिक दो गिल्स (एंडोब्रैंकस) में, या सभी चार गिलों (टेट्राब्रैंकस) में, लेकिन यह विशेषता नहीं है हर प्रजाति के लिए जाना जाताहै 17. ब्रोडिंग पैटर्न का उपयोग पहले से ही मूसल प्रजातियों को वर्गीकृत करने के लिए किया गया है चाहे मादा मूसलों ने सर्दियों में (ब्राइडिकटिक) या गर्मियों में थोड़ी अवधि के लिए (टैकिटिक)18. जब अनोदोता के प्रजनन चक्र काअध्ययन 19वर्ष के लिए किया गया था , तब मूसलों के अधिक कालांतर का समर्थन किया गया था . तथापि, पिछले कुछ वर्षों में मूल प्रजनन जीव विज्ञान का अधिक अच्छी तरह से अध्ययन किया गया और पाया गया कि यह द्विभाजन एक सकल सामान्यीकरण था और कुछ प्रजातियों का विचार -काल मूल रूप से20,21की तुलना में अधिक जटिल है . उदाहरण के लिए, जीनस हाइरिडेला (परिवार हाइरिडी), ग्लेबुला, और एलिप्टियो (परिवार यूनियनिडी) की प्रजातियों को प्रजनन मौसम22,23के प्रति तीन अंडों के ऊपर के साथ देखा गया है, 24. प्रजातियों-विशिष्ट की जटिलता, और कभी-कभी भी जनसंख्या-विशिष्ट20,प्रजनन आदतों ने विचार के समय और अवधि के बारे में ज्ञान में अंतर पैदा किया है, और एक मादा मूसल की संख्या का उत्पादन हो सकता है।

हालांकि hypodermic सिरिंजों गिल सामग्री निकालने के लिए इस्तेमाल किया गया है, परिणाम रिपोर्टिंग मानकीकरण की कमी के कारण सभी अध्ययनों में तुलनीय परिणाम सुनिश्चित करने के लिए जटिल है. इससे पहले, ग्लोकिडिया के चार विकासात्मक चरणों (अर्थात, अंडा, भ्रूण, अपरिपक्व, पूर्ण रूप से विकसित) की पहचान संघी में की गई है लेकिन मानक प्रक्रिया16,25,26में नहीं अपनाई गई है। अन्य अध्ययन Margaritiferide के सदस्यों को देख 'परिपक्व glochidia' के वर्गीकरण के साथ प्रतिस्थापित किया है 'विकास glochidia', संभावित भ्रम27,28के लिए अग्रणी . विभिन्न लार्वा विकास चरणों की विशेषता में स्थिरता की कमी ने कई शोधकर्ताओं को आम तौर पर महिलाओं को 'ग्रेविड' के रूप में वर्णन करने के लिए छोड़ दिया है, जो लार्वा विकास की जटिलताओं को शामिल नहीं करता है। जीवन इतिहास अध्ययन मेजबान मछली परीक्षण का आयोजन पूरी तरह से विकसित glochidia के साथ gravid महिलाओं के लिए की जरूरत को प्राथमिकता दी है, लेकिन यह जानकारी प्रकाशित और अप्रकाशित साहित्य29,30भर में बिखरे हुए है. वर्तमान में, डेटा अंडे के बीच संक्रमण के समय सहित कई mussel प्रजातियों की प्रजनन आदतों के बारे में कमी कर रहे हैं, अपरिपक्व glochidia, और पूरी तरह से विकसित glochidia मेजबानों के लिए लगाव के लिए तैयार. अधिकांश प्रजातियों के लिए, यह स्पष्ट नहीं है कि कितनी देर तक मादाएं ग्लोकिडिया को नन्ही देती हैं और कितनी जल्दी निषेचित अंडे पूरी तरह से विकसित होती हैं। ज्ञान अंतराल अक्सर संरक्षण चिंता की प्रजातियों के लिए व्यापक हैं, जो गिल सामग्री है कि गैर घातक प्रभाव के लिए परीक्षण किया गया है निकालने की एक मानकीकृत विधि के लिए की जरूरत प्रस्तुत करता है और वैज्ञानिक समुदाय के लिए प्रोत्साहित किया जा सकता है पूरक मुख्यधारा के डेटा संग्रह के तरीके , संरक्षित आबादी के लिए खतरा पैदा किए बिना24,31,32.

इस अध्ययन के तीन उद्देश्य थे: 1) एक गिल नमूना तकनीक को औपचारिक रूप देने और सिटू में महिला mussels पर घातक और गैर घातक प्रभाव के लिए यह परीक्षण, 2) glochidial विकास के विभिन्न चरणों की विशेषता है और पहचान करने के लिए एक मानकीकृत विधि का वर्णन और विभिन्न लार्वा चरणों की रिपोर्ट करना, और 3) एकत्र किए गए डेटा के लिए एक सार्वजनिक भंडार बनाएँ. फील्ड सर्वेक्षण, दीर्घकालिक निगरानी परियोजनाओं, और संग्रहालय संग्रह सभी प्रोटोकॉल के लिए अवसरों का प्रतिनिधित्व करने के लिए यहाँ वर्णित लागू किया जा करने के लिए और अतिरिक्त डेटा ब्याज की एक व्यापक निकाय के लिए एकत्र किया जाएगा. औपचारिक प्रोटोकॉल में लार्वा विकास के प्रत्येक चरण को अलग करने के लिए दृश्य और चरित्र विवरण शामिल हैं। श्रेणियों के मानकीकरण करके, एकत्र परिणाम सभी घटनाओं और प्रजातियों के बीच तुलना की जा सकती है. एक बार डेटा एकत्र कर रहे हैं, सभी Freshwater Mussel Gravidity Almanac (FMGA), जो इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर एकत्र gravidity जानकारी के लिए एक डेटाबेस है प्रस्तुत किया जा सकता है. एक अंतिम उत्पाद की दुकान और सभी gravidity जानकारी एकत्र संकलन भविष्य अनुसंधान, संरक्षण, और वसूली के प्रयासों की सुविधा के लिए एक अनुसंधान उपकरण प्रदान करेगा. विभिन्न mussel परियोजनाओं में इस पद्धति का समावेश और FMGA के लिए डेटा प्रस्तुत करने के वर्ष भर में mussel प्रजातियों की gravidity स्थिति के विषय में ज्ञान की चौड़ाई पर विस्तार होगा. जीवों के एक अत्यधिक अभेद्य समूह के रूप में, इस प्रोटोकॉल और मीठे पानी mussels की प्रजनन आदतों पर जिसके परिणामस्वरूप डेटाबेस जनसंख्या गतिशीलता को समझने और इन प्रजातियों के संरक्षण को सुविधाजनक बनाने के लिए आवश्यक है.

Protocol

1. Gravid महिला संग्रह

नोट: संदर्भ मछली और वन्यजीव सेवा के Freshwater मुसल सर्वेक्षण प्रोटोकॉल33 कैसे पर्याप्त रूप से खतरे में या लुप्तप्राय प्रजातियों के लिए एक नमूना साइट सर्वेक्षण करने के लिए पर मार्गदर्शन के लिए. उचित संघीय परमिट संरक्षित प्रजातियों और सभी प्रजातियों मौजूद के लिए राज्य परमिट के क्षेत्र संग्रह से पहले प्राप्त किया जाना चाहिए.

  1. स्पर्श-दृश्य विधियों (चरण 1.2) का उपयोग कर क्षेत्र से लाइव mussels लीजिए या एक संग्रहालय से संरक्षित नमूनों का उपयोग (कदम 1.3).।
    नोट: यह शुष्कता को रोकने और तनाव को कम करने के लिए संग्रह के बाद लाइव mussels शांत और गीला रखने के लिए महत्वपूर्ण है, और gravid mussels की कम से कम हैंडलिंग महिलाओं से बचने के लिए समय से पहले गिल सामग्री34जारी करने के लिए महत्वपूर्ण है।
  2. संग्रह के दौरान दृश्य निरीक्षण द्वारा या तो महिला gravidity का मूल्यांकन (उदाहरण के लिए, मेंटल लालच की उपस्थिति, conglutinates, आदि) या संग्रह के बाद दृश्य निरीक्षण द्वारा (उदाहरण के लिए, धीरे खुले वाल्व prying पर्याप्त अंदर देखो और देखने के लिए कि क्या gills फुलाया जाता है, देखें चित्र 1) .
    नोट: प्रजातियों में भिन्नता है कि कैसे glochidia marsupial gills के भीतर brooded कर रहे हैं के रूप में कभी कभी केवल दो बाहरी gills (ectobranchus), केवल दो आंतरिक gills (endobranchus), या सभी चार gills (tetragenous) marsupial17हैं. प्रोटोकॉल यहाँ रोका जा सकता है, और gravid महिलाओं गिल नमूने के लिए प्रयोगशाला में वापस ले जाया जा सकता है.

Figure 1
चित्र 1: धीरे से व्यक्तियों को खोलने prying. एक जीवित mussel की gravidity की जांच करने के लिए, धीरे से अंगूठे के साथ वाल्व खोलने pry (ए) या सावधानी से एक speculum या रिवर्स प्लास का उपयोग करने के लिए वाल्व खोलने pry (बी) . इस विधि से संबद्ध चेतावनी के लिए प्रोटोकॉल में चरण 2.3 की समीक्षा करें। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

  1. वाल्वखोलकर तथा गिलों का निरीक्षण करके यह निर्धारित करके कि क्या व्यक्ति एक विकृत स्त्री है , संरक्षित नमूनों पर एक दृश्य निरीक्षण करें (चित्र 2)।

Figure 2
चित्र 2: कैसे एक gravid महिला की पहचान करने के लिए. मादा मूसल मार्सूपियल गलियां तब फुलाया हुई दिखाई देती हैं जब मादा ग्रेविड और विचार करती है। तस्वीरें ए और सी एक पार्श्व परिप्रेक्ष्य से gills दिखाने जबकि तस्वीरें बी और डी gills के एक वेंट्रल दृश्य प्रदान करते हैं. लाल बक्से एक ग्रेविड (ए/बी) और नहीं gravid (सी/ व्यक्तियों की कुल लंबाई 79 मिमी (ए/बी) और 88 मिमी (सी/डी) है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

2. गिल सामग्री नमूना

नोट: इस प्रोटोकॉल अनुकूलित किया जा सकता है कि क्या नमूना क्षेत्र और प्रयोगशाला में रहते mussels पर होता है, या संरक्षित नमूनों पर.

  1. एक 1.5 एमएल प्लास्टिक microcentrifuge संग्रह ट्यूब या तो बाँझ पानी के लगभग 1 एमएल के साथ तैयार अगर गिल सामग्री निष्कर्षण35 या इथेनॉल (EtOH) के 24 घंटे के भीतर मूल्यांकन किया जाएगा अगर नमूना मूल्यांकन संग्रह के 24 घंटे के भीतर नहीं हो सकता है या यदि गिल सामग्री EtOH में संरक्षित एक संग्रहालय नमूना से कर रहे हैं. यदि ग्लोकिडिया इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी (SEM) इमेजिंग स्कैनिंग के लिए इरादा कर रहे हैं, 70% EtOH का उपयोग करें, और यदि glochidia आनुवंशिक परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जाएगा, गैर denatured 95% EtOH36का उपयोग करें.
  2. एक 10 एमएल सिरिंज पर एक बाँझ 20 जी बेवल-टिप सुई के लिए कागज लपेटन निकालें। सुई को बेनकाब करने और गिल सामग्री संग्रह के लिए 1.5 एमएल प्लास्टिक ट्यूब तैयार करने के लिए टोपी खोलना। सिरिंज के हैंडल को सभी तरह से नीचे धकेलें ताकि ब्लैक डाट 0 एमएल/
    नोट: एक बाँझ सिरिंज हर बार गिल सामग्री नमूना रहे हैं इस्तेमाल किया जाना चाहिए. एक इस्तेमाल सिरिंज एक 10% ब्लीच समाधान में टिप सूई द्वारा क्षेत्र में बाँझ किया जा सकता है, तो यह बाँझ पानी के 1 एमएल के साथ भरने और प्लंजर को वापस करने के लिए निराशाजनक द्वारा सिरिंज rinsing 0 एमएल /
  3. gravid महिला उठाओ और धीरे से अंगूठे के सुझावों का उपयोग कर दो वाल्व खुला pry.
    चेतावनी: जानवर को नुकसान न पहुंचाने के लिए सावधान रहें। वाल्व खोलने बहुत व्यापक या बहुत तेजी से adductor मांसपेशियों overextend और मृत्यु का कारण बन सकता है. पतला-खोल वाले नमूने (उदा., एनोडोंटाकी प्रजातियां, लेप्टोदिया, उटरबैकिया,आदि) और युवा व्यक्ति इस चरण में विशेष रूप से कमजोर होते हैं। बलपूर्वक नाजुक-खोल वाली प्रजातियों को संभालने से गोले टूट सकते हैं और मृत्यु हो सकती है। कुछ मामलों में, पूर्वकाल और पीछे की सतह से पतली खोल जानवरों निचोड़, जबकि अधर सतह को देख, खोल फ्लेक्स और थोड़ा गैप करने के लिए कारण होगा, एक gills का निरीक्षण करने के लिए या pry गोले खोलने के लिए और नाजुक हानिकारक से बचने के लिए अनुमति देता है खोल मार्जिन.
    नोट: उपकरण इस कदम के साथ सहायता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन यह भी मृत्यु का कारण बन सकता है अगर देखभाल के साथ इस्तेमाल नहीं किया और जब भी संभव से बचा जाना चाहिए. उदाहरण के लिए, रिवर्स प्लास के एक speculum या संशोधित सेट व्यक्ति खुला pry मदद करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और एक कील वाल्व खुला सहारा मदद करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इन उपकरणों आवश्यक नहीं हो सकता है अगर एक अन्य व्यक्ति की सहायता के लिए उपलब्ध है (यानी, एक व्यक्ति जानवर खुला रखती है, जबकि एक और निकासी के लिए सिरिंज maneuvers). पेरिओस्ट्रेकम से मेंटल ऊतक को नुकसान पहुंचाना या अलग करना विकास विकृति और मृत्यु दर37का कारण बन सकता है ; इसलिए, मेंटल ऊतक और खोल के बाहरी मार्जिन के बीच संबंध को तोड़ने से बचने के लिए महत्वपूर्ण है।
  4. सिरिंज की सुई की नोक का प्रयोग धीरे फुलाया marsupial गिल के एक पानी की ट्यूब घुसना. इसके बाद, सुई के बेवेल्ड टिप का उपयोग करके गिल की सामग्री को धीरे से स्कूप करें।
    नोट: गिल सामग्री आमतौर पर एक दूधिया सफेद स्थिरता है, जो सुई के beveled टिप पर दिखाई जानी चाहिए.
    1. सिरिंज की सामग्री को सीधे पेट्री डिश में जमा करें यदि माइक्रोस्कोप आसानी से उपलब्ध हो। अन्यथा, एक 1.5 एमएल प्लास्टिक microcentrifuge ट्यूब में नामित तरल के साथ सामग्री की दुकान (चरण 2.1 देखें) बाद में मूल्यांकन के लिए.
      नोट: नुकसान और कम व्यवहार्यता से बचने के लिए परिवहन के दौरान glochidia नमूनों की अशांति और हैंडलिंग कम से कम32,35.
  5. जीनस-जाति पहचान, gravidity स्थिति, महिला की लंबाई (मिमी), कलेक्टर और संपर्क जानकारी, राज्य, काउंटी, जल निकासी, विशिष्ट संग्रहस्थान, अक्षांश और देशांतर, गिल के लिए एक अद्वितीय पहचानकर्ता पर रिकॉर्ड जानकारी नमूना, सर्वेक्षण साइट के लिए एक अद्वितीय पहचानकर्ता, और संग्रह की तारीख अगर गिल सामग्री निकाले गए थे (चित्र 3). परिवहन के दौरान सटीक डेटा रिकॉर्ड सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक संग्रह पोत पर एक अद्वितीय पहचानकर्ता रिकॉर्ड करें.
    1. पहचान सत्यापन के लिए mussel के बाहर सही वाल्व तस्वीर और चित्र में सुपाठ्य अद्वितीय के साथ लेबल ट्यूब शामिल हैं. वैकल्पिक रूप से, पर्यावरण और समुदाय के बारे में जानकारी के पूरक के लिए अन्य अजैविक और जैविक पैरामीटर एकत्र करें, जिसमें मुसल पाया गया था (सुझावों के लिए चित्र 3 देखें)।

Figure 3
चित्र 3: किसी फ़ील्ड gravidity डेटा पत्रक का उदाहरण. यदि विश्वसनीय जानकारी देने के लिए गिल का नमूना लिया जाता है तो सटीक डेटा रिपोर्टिंग आवश्यक है। यह न्यूनतम क्षेत्रों और प्रत्येक गिल नमूने के साथ एकत्र किया जा करने के लिए अतिरिक्त अजैविक पैरामीटर के साथ एक क्षेत्र डेटा पत्रक का एक उदाहरण है। अधिक व्यापक जानकारी के लिए, कृपया प्रोटोकॉल में चरण 4.1 देखें. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

3. गिल सामग्री की प्रयोगशाला मूल्यांकन

  1. यदि गिल सामग्री 1.5 एमएल ट्यूब में है, तो उन्हें पेट्री डिश में स्थानांतरित करें और पकवान के नीचे को पानी से भरें। नमूने के अधिक केंद्रित दृश्य के लिए डिश के केंद्र में सामग्री एकत्र करने के लिए एक परिपत्र गति में पेट्री डिश को धीरे से घुमाता है।
    नोट: 1.5 एमएल ट्यूब एक धार की बोतल का उपयोग कर बाहर निकाल दिया जा करने के लिए या गिल सामग्री ट्यूब दीवारों से चिपके हुए हैं, तो पानी से भरा पाइप्ट हस्तांतरण करने की आवश्यकता हो सकती है।
  2. नमूने का मूल्यांकन करने के लिए पेट्री डिश को विच्छेदन सूक्ष्मदर्शी के नीचे रखें। यदि संभव हो, माइक्रोस्कोप के तहत गिल नमूना की एक तस्वीर लेने के लिए और उस नमूने के लिए अद्वितीय पहचानकर्ता के साथ लेबल.
    1. अभिलेख परिणाम जिनके प्रत्येक गिल नमूने में विकासात्मक चरण मौजूद होते हैं। प्रत्येक विकासात्मक चरण की विशेषता के लिए एक मार्गदर्शिका के रूप में चित्र 4 का उपयोग करें। कुछ मामलों में, महिलाओं को कई विकासात्मक चरणों में लार्वा पैदा हो सकता है; इसलिए, किसी दिए गए नमूने में देखी गई प्रत्येक विकासात्मक अवस्था की रिपोर्ट करें (उदाहरण के लिए, 'ईजीजी/डीजी/आईएमजी/एफडीजी')। एक बार संरक्षित glochidia मूल्यांकन किया गया है, धारा 4 के लिए आगे बढ़ें. यदि पूरी तरह से विकसित ग्लोकिडिया की पहचान की जाती है और EtOH को परिरक्षण के लिए उपयोग नहीं किया गया था, तो चरण 3.3 पर आगे बढ़ें।
      नोट: EGG, अंडे जनता; महानिदेशक, ग्लोकिडिया का विकास; IMG, अपरिपक्व glochidia; FDG, पूरी तरह से विकसित glochidia.

Figure 4
चित्र 4: मार्सूपियल गिल्स में ग्लोकिडिया विकास के विभिन्न चरणों के लिए प्रतिनिधित्व। (ए) अंडे के द्रव्यमानों में एक झिल्ली होती है जो अंडे को एक साथ झुरमुट बनाती है। प्रत्येक अंडे की झिल्ली के भीतर विभिन्न कोशिकाओं का एक अपारदर्शी गोलाकार द्रव्यमान होता है। अपारदर्शी गोलाकार द्रव्यमान प्रारंभिक कोशिका विभाजन के दौरान कई गोलाकार द्रव्यमानों में विभाजित हो सकता है लेकिन अभी भी एक विशिष्ट द्विवाल्व आकार मनाया जाता है जब तक EGG के रूप में दर्ज किया जाना चाहिए. (बी) अपरिपक्व ग्लोकिडिया (आईएमजी) में अंडे की झिल्ली के भीतर एक अलग द्विवाल्व आकार का द्रव्यमान होता है। (ग)ग्लोकिडिया (डीजी) के विकास में एक अलग द्विवाल्व आकार होता है, अंडे की झिल्ली नहीं होती है, और अंदर असंगठित ऊतक होते हैं, जो अक्सर दिखने में फजी होते हैं। जब डेटा रिकॉर्ड किया जाता है तो ग्लोकिडिया (डीजी) का विकास प्रतिक्रियाशील नहीं होता है और जब डेटा रिकॉर्ड किया जाता है तो इसे 'डीजी (टी)' के रूप में वर्गीकृत किया जाता है। (घ)पूर्ण रूप से विकसित ग्लोकिडिया (एफडीजी) में अलग-अलग द्विवाल्व आकार और स्पष्ट अभिवर्तनी मांसपेशी ऊतक होते हैं जो ग्लोकिडिया को बंद करने की अनुमति देते हैं। पूरी तरह से विकसित ग्लोकिडिया (एफडीजी) अक्सर संरक्षण के बाद दो खुले वाल्व के रूप में मनाया जाता है। दो खुले वाल्व आमतौर पर बंद तस्वीर, या खुला और बंद तस्वीर, जब NaCl को उजागर किया जाएगा और 'FDG (टी)' के रूप में वर्गीकृत कर रहे हैं. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

  1. गिल के नमूने35के सबसेट बूंद में नाक्ल का क्रिस्टल जोड़कर किसी पूर्ण विकसित ग्लोचिडिया की व्यवहार्यता का और मूल्यांकन करने के लिए सोडियम क्लोराइड (नासीएल) परीक्षण करें। व्यवहार्य glochidia एक खुली स्थिति से उनके वाल्व बंद करके NaCl का जवाब देंगे. डेटा रिकॉर्ड कर रहे हैं जब पदनाम के अंत में '(टी)' के साथ किसी भी नमक परीक्षण glochidia रिपोर्ट करें।
    नोट: पूरी तरह से विकसित glochidia भी सक्रिय रूप से खुला तड़क और NaCl के लिए जोखिम के बिना बंद देखा जा सकता है.

4. डेटाबेस के लिए रिपोर्ट

  1. प्रवेश FMGA वेब (http://arcg.is/089uee), जो ऑनलाइन सॉफ्टवेयर प्रोग्राम38,39,40का उपयोग कर विकसित किया गया था. थे FMGA पृष्ठ प्रोविडेंस a लिंक तो थे डेस्कटॉप डेटा प्रविष्टि फॉर्म एंड अं एप्लीकेशन डाउनलोड फॉर मोबाइल देवीकेस. मोबाइल एप्लिकेशन फ़ील्ड में डेटा प्रविष्टि और स्वचालित भू-संदर्भ41सक्षम बनाता है।
    नोट: gravidity कैलेंडर और मीठे पानी mussel प्रजातियों जीवन इतिहास की घटनाओं के साथ जुड़े अन्य ग्राफिक्स भी FMGA डैशबोर्ड पर पाया जा सकता है.
    1. ड्रॉप-डाउन मेनू और पाठ प्रविष्टि फ़ील्ड का उपयोग करके डेटा प्रविष्टि प्रपत्र में परिणाम रिकॉर्ड करने के लिए मोबाइल अनुप्रयोग या डेस्कटॉप साइट का उपयोग करें. बड़े, पहले से मौजूद डेटासेट के लिए, टेम्पलेट स्प्रेडशीट के लिए लेखकों से संपर्क करें. उचित स्तंभ शीर्षकों के अंतर्गत रिकॉर्ड किए गए डेटा को दर्ज करें, यह ध्यान में रखते हुए कि स्प्रेडशीट पर प्रत्येक रिकॉर्ड, या पंक्ति, एक ग्रेविड व्यक्ति से एक गिल नमूने की टिप्पणियों का प्रतिनिधित्व करता है.
    2. परिणाम सबमिट करें और वे अधिक जानकारी या तस्वीरें अनुरोध करने के लिए कलेक्टर से संपर्क कर सकते हैं, जो एक व्यवस्थापक द्वारा मान्य किया जा रहा है के बाद FMGA डेटाबेस में जोड़ दिया जाएगा.
      नोट: एक बार डेटा मान्य और FMGA डेटाबेस में संकलित कर रहे हैं, सभी gravidity कैलेंडर और अन्य इंटरैक्टिव ग्राफिक्स FMGA डैशबोर्ड पर प्रदर्शित अद्यतन किया जाएगा.

Representative Results

यह प्रोटोकॉल जनवरी 2015 से दिसंबर 2015 तक ब्रूस क्रीक (वाल्टन काउंटी, फ्लोरिडा) के 750 मीटर2 खंड के भीतर मीठे पानी के mussel समुदाय की निगरानी कि एक कब्जा-मार्क-पुनर्ग्रहण अध्ययन के दौरान लागू किया गया था। फ़ील्ड नमूना हर चार सप्ताह होने के लिए शेड्यूल किया गया था; हालांकि, उच्च प्रवाह की घटनाओं के कारण, 2015 के अप्रैल या सितंबर में नमूने नहीं लिए गए थे। अमेरिकी भूवैज्ञानिक सर्वेक्षण, अमेरिकी मछली और वन्यजीव सेवा, और फ्लोरिडा मछली और वन्यजीव संरक्षण आयोग सहित राज्य और संघीय एजेंसियों क्षेत्र सर्वेक्षण और गिल नमूना में सहायता प्रदान की. सर्वेक्षण के दौरान सामना करना पड़ा प्रत्येक gravid महिला ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग कर मैदान में गिल सामग्री नमूने के अधीन किया गया था, टैग (सामग्री की तालिकादेखें), और नदी सब्सट्रेट में वापस रखा. गिल के नमूनों को 95% EtOH में संग्रहीत किया गया और गिल सामग्री के मूल्यांकन के लिए अमेरिकी भूवैज्ञानिक सर्वेक्षण के वेटलैंड और एक्वाटिक अनुसंधान केंद्र की प्रयोगशाला में ले जाया गया।

महिलाओं को टैग करके और उन्हें साल भर में मासिक अंतराल पर recapturing द्वारा, हम 90 व्यक्तियों की कुल पर गिल नमूना प्रोटोकॉल के दोनों घातक और गैर घातक प्रभावों का मूल्यांकन किया. इस अध्ययन के दौरान निम्नलिखित सात प्रजातियों को फिर से कब्जा कर लिया गया: Elliptio pullata (n ] 5), Fusconaia burkei (n ] 1), Hamiota ऑस्ट्रेलिया (n ] 19), Obovaria choctawensis (n ] 1), Strophitus williamsi (n ] 1), विलोसा लीनोसा (एन $ 60), और विलोसा वाइबेक्स (द ] 3)। हमारे नमूने में कुल लंबाई में 24 मिमी से 80 मिमी तक के व्यक्ति शामिल थे और दो प्रजातियां (एफ. बुर्की और एच. ऑस्ट्रलिस) अमेरिकी लुप्तप्राय प्रजाति अधिनियम द्वारा संरक्षित हैं। इस अध्ययन में उपयोग किए गए सभी डेटा सार्वजनिक रूप से उपलब्ध हैं, हमने ScienceBase (https://doi.org/10.5066/P90VU8EN) 42 पर हमारे डेटासेट तक पहुंच प्रदानकी है।

जीवित बचे लोगों द्वारा यह आकलन किया गया था कि गिल नमूना संग्रह के बाद कितने व्यक्तियों को जीवित रखा गया था। हमने देखा कि उच्च जीवित बचेपन (97%) कुछ मृत्यु दर के साथ अध्ययन के दौरान, संभवतः predation के लिए योगदान, साइट पर टिप्पणियों द्वारा संकेत दिया. परिणाम व्यक्तियों के 51% के आसपास दिखाया (46 के 90) लगातार नमूना घटनाओं के बीच gravid रहने के लिए पाया गया. व्यक्तियों की एक और 10% (9 90 में से) gravid पाया गया, नहीं gravid recaptured, और फिर से gravid पाया. व्यक्तियों के बारे में 39% (35 90 में से) इस अध्ययन में gravid पाया गया, एक गिल नमूना लिया गया था, लेकिन जब साल भर में फिर से कब्जा कर लिया, वे एक दूसरी बार gravid कभी नहीं पाया गया. परिणामों से संकेत मिलता है कि यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल न तो घातक है और न ही उप घातक है और गिल के नमूने के बाद वर्तमान विचार अवधि को काफी परेशान नहीं करता है।

हालांकि इस अध्ययन में नमूना आकार प्रजातियों में असमान हैं, इस अध्ययन से परिणाम इस प्रोटोकॉल के लाभकारी और व्यावहारिक अनुप्रयोगों पर प्रकाश डाला. वी lienosa के लिए gravidity कैलेंडर दिखाता है gravid महिलाओं brooding FDG अगस्त को छोड़कर वर्ष के लगभग हर महीने में पाए गए, जब केवल महिलाओं EGG brooding पाया गया (चित्र 5A) . महिला एच ऑस्ट्रेलिया जुलाई, अगस्त और दिसंबर में gravid (एनजी) नहीं पाया गया. महिलाओं का एक बड़ा अनुपात जनवरी और फरवरी में एफडीजी का विचार कर रहा था लेकिन यह भी अक्टूबर और नवंबर में पाया गया (चित्र 5 बी) . ई. पुलेटा के किसी भी व्यक्ति को एफडीजी का विचार नहीं मिला, हालांकि महिलाएं मई से जून तक ईजीजी का पालन नहीं कर रही थीं, और जून में एक ग्रेविड मादा दर्ज (जीएफआर)(चित्र 5 C) थी। केवल gravid एफ burkei महिला जून में GFR पाया गया था और जुलाई में एनजी फिर से कब्जा कर लिया. वही ओ choctawensis व्यक्ति फरवरी में FDG एकत्र किया गया था और जुलाई में एनजी फिर से कब्जा कर लिया. केवल एक एस विलियम्सी पाया गया था और तीन बार फिर से कब्जा कर लिया गया था। इस महिला को मार्च में एफडीजी, मई में एनजी, जून में जीएफआर और अगस्त में ईजीजी (चित्र 5 C) पाया गया था। फरवरी और जून के बीच वी वाइबक्स की ग्रेविड मादाएं पाई गई (चित्र 5 सी) .

Figure 5
चित्र 5: ब्रूस क्रीक, FL में अध्ययन के परिणाम एक gravidity कैलेंडर प्रारूप में प्रदर्शित. (A) ग्राम्यता कैलेंडर के लिए विलोसा lienosa कब्जा / (B) हमीओटा ऑस्ट्रेलिया के लिए Gravidity कैलेंडर कब्जा / (सी) कम से कम 10 व्यक्तियों नमूना के साथ सभी प्रजातियों के लिए Gravidity कैलेंडर. y-अक्ष में जनवरी (Ja), फरवरी (F), मार्च (Mr), मई (मेरा), जून (Jn), जुलाई (Jl) अगस्त (A), अक्टूबर (O), नवंबर (N) और दिसंबर (D) के लिए संक्षिप्त नाम शामिल हैं। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Discussion

महत्व

अभेद्य प्रजातियों का संरक्षण वर्तमान आबादी के भीतर सफल भर्ती पर निर्भर करता है। कुछ मामलों में, इन जोखिम वाली आबादी की भर्ती बढ़ाने के लिए कृत्रिम प्रचार आवश्यक हो सकता है। इसके लिए शोधकर्ताओं को प्रत्येक प्रजाति के लिए सक्रिय प्रजनन के समय के बारे में सूचित किया जाना चाहिए और भर्ती पर प्रभाव को कम करने के लिए संभवतः विभिन्न तरीकों या प्रबंधन प्रथाओं को लागू करना होगा। जीवों के एक अभेद्य समूह के रूप में, प्रजनन आदतों का अध्ययन करने के लिए एक मानकीकृत और गैर घातक दृष्टिकोण स्थापित करना, और एक मंच प्रदान करना है जिस पर सबसे अप-टू-डेट के साथ वैज्ञानिक समुदाय को सूचित करने के लिए डेटा को संकलित और कल्पना करना है जानकारी उपलब्ध है. यह अध्ययन सावधानियों लिया जाता है सुनिश्चित करने के लिए एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल प्रदान करता है, और गिल सामग्री पर्याप्त रूप से नमूना और महिला mussels से मूल्यांकन किया जा सकता है. इस प्रोटोकॉल घातक और गैर घातक प्रभाव के लिए परीक्षण किया गया था, शोधकर्ताओं और प्रबंधकों को जिम्मेदारी से इस पद्धति को लागू करने की अनुमति. हम भी एक सार्वजनिक रूप से उपलब्ध है, उपयोगकर्ता के अनुकूल डैशबोर्ड पर gravidity जानकारी के संकलन की सुविधा के लिए डेटाबेस प्रबंधन उपकरण और अनुप्रयोगों का एक सूट विकसित की है। महामारी विज्ञान पर अध्ययन, glochidia आकृति विज्ञान, जीवन इतिहास, जातिवृत् तीय, प्रचार, और translocations सभी लाभ और मीठे पानी mussels के सभी प्रजातियों के लिए लौकिक gravidity जानकारी के इस भंडार का उपयोग कर सकते हैं.

अकेले इस अध्ययन में कुछ प्रजातियों प्रजनन आदतों के पिछले अध्ययन के निष्कर्षों का समर्थन किया, लेकिन यह भी दूसरों पर उपन्यास जानकारी का पता चला. हालांकि वी वाइबेक्स वी lienosaकी तुलना में कम संख्या में एकत्र किया गया था, समानताएं gravidity डेटा के आधार पर दोनों के बीच पाया जा सकता है. विलोसा की दोनों प्रजातियां वर्ष के एक बड़े हिस्से के दौरान पूरी तरह से विकसित ग्लोचिडिया को विकसित करती हैं, जो उन्हें एक अतिवद्तेज ी णुकी के रूप में पहचानती है। यह अन्य विलोसा प्रजातियों43,44,45पर पिछले अध्ययनों के अनुरूप है . इस अध्ययन के परिणामों से पता चलता है कि एच ऑस्ट्रेलिया अक्टूबर से gravid पाया जा सकता है और जून में overwintering, सिवाय कोई कब्जा दिसंबर में gravid पाया गया. पहले प्रकाशित एक अध्ययन में46जून,47जून तक चार महीने की ग्रेविडिटी अवधि के साथ जन्मजात एच अल्टिलिस की पहचान की गई थी . यह निष्कर्ष पहले से सोचा था और आम तौर पर एक overwintering brother के रूप में एच ऑस्ट्रेलिया समूहों की तुलना में एक लंबे समय तक gravidity अवधि दिखाता है. संघीय रूप से संरक्षित प्रजातियों के रूप में, एच altilis और एच ऑस्ट्रेलिया के लिए अलग-अलग विचार अवधि प्रजनन सक्रिय समय के दौरान आबादी की बेहतर रक्षा करने के लिए प्रबंधन के फैसले को प्रभावित कर सकता है। Elliptio pullata केवल मई और जून में EGG के साथ gravid पाया गया जो एक बहुत ही कम विचार अवधि24,48,49के साथ एक tachytic प्रजातियों के रूप में उनके लक्षण से मेल खाती है, 50| के रूप में डेटा इस प्रोटोकॉल का उपयोग Elliptio प्रजातियों पर संकलित कर रहे हैं, विस्तृत जानकारी क्षेत्र के प्रयासों को और अधिक कुशल बना सकते हैं जब कुछ glochidial विकास चरणों को लक्षित कर रहे हैं, के बाद से glochidia केवल वर्ष से बाहर कुछ महीने पाए जाते हैं. कम नमूना आकार के साथ अन्य प्रजातियों से अनुमान सीमित है, लेकिन डेटा डेटाबेस में संकलित कर रहे हैं के रूप में, उच्च नमूना आकार अतिरिक्त mussel प्रजातियों की प्रजनन आदतों में अंतर्दृष्टि दे देंगे.

प्रक्रियात्मक टिप्पणियाँ

मीठे पानी की मूसलऔर ग्लोकिडिया मानवजनित तनावके प्रति संवेदनशील माने जाते हैं. gravidity निरीक्षण के दौरान, mussel वाल्व खोलने के लिए आसान नहीं हो सकता है, और लापरवाही से खुला वाल्व मजबूर अनजाने नुकसान का कारण बन सकता है और तनाव या मृत्यु में परिणाम. कुछ नाजुक खोल प्रजातियों (उदा., Anodontaकी प्रजातियों, Leptodea, Utterbackia, आदि) और छोटे आकार के व्यक्तियों बहुत नाजुक गोले और कमजोर adductor मांसपेशियों है कि तोड़ सकते हैं और आसानी से आंसू हो सकता है. गिल नमूना एक तनाव माना जा सकता है अगर हैंडलिंग जिम्मेदारी से और सावधानी के साथ नहीं किया जाता है. एक पिछले अध्ययन में पाया गया कि प्रजनन के समय में mussels के हैंडलिंग और हवाई जोखिम विभिन्न शारीरिक तनाव का कारण हो सकता है, गिल सामग्री के समय से पहले जारी सहित34. हालांकि, एक इसी तरह की पद्धति का उपयोग करते हुए एक अध्ययन जैसा कि यहां वर्णित है, गिल नमूने के दौरान ग्रेविड मादा mussels हैंडलिंग वर्तमान अंडाणु बाधा नहीं था या दोनों अल्पकालिक और लंबी अवधि के brooding प्रजातियों16में समय से पहले रिहाई का कारण. इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल के दौरान एक बाँझ सिरिंज का उपयोग करने की आवश्यकता होती है ताकि कई व्यक्तियों के गिल्स को सजाते समय किसी भी अवांछित संक्रमण या क्रॉस संदूषण को रोका जा सके। इसके अतिरिक्त, ग्लोकिडिया नाजुक होते हैं और बच्चे परिपक्व और तनावग्रस्त हो सकते हैं लेकिन निष्कासित नहीं किए जा सकते हैं। खराब स्वास्थ्य में परिपक्व ग्लोकिडिया के परिणामस्वरूप नमक परीक्षण35के लिए प्रतिक्रिया कम व्यक्ति हो सकते हैं . जब डीजी (टी) और FDG (टी) के बीच अंतर कर यह एक बड़े नमूना आकार के साथ नमक परीक्षण करने के लिए महत्वपूर्ण है, टिप्पणियों पर नोट बनाने के लिए ध्यान से इस अध्ययन में दिए गए विवरण का उपयोग कर डीजी और FDG glochidia के बीच भेद की पहचान. जब उचित देखभाल की जाती है, तो इस प्रक्रिया द्वारा प्रेरित न्यूनतम तनाव महिला mussels स्वाभाविक रूप से brooding glochidia जारी रखने के लिए और जनसंख्या में भर्ती पर प्रभावों को कम करने के लिए अनुमति दे सकते हैं।

अतिरिक्त डेटा डेटाबेस के पूरक और मीठे पानी mussels की प्रजनन आदतों के लिए व्यापक संदर्भ प्रदान करने के लिए दर्ज किया जा सकता है. कुछ प्रजातियों (उदा., फुस्कोनायाकी प्रजातियां ) को ग्लोचिडिया51के विकास चरण के आधार पर विभिन्न रंगों की गलियां देखी गई हैं। महिला की प्रारंभिक gravidity जांच के दौरान, गिल रंग का विवरण रिपोर्ट किए गए डेटा में शामिल किया जा सकता है ताकि भविष्य की जांच के लिए अनुमति दी जा सके। इसके अलावा, प्रोटोकॉल में इस बिंदु पर, शोधकर्ताओं ने ध्यान दिया जा सकता है कि क्या brooding महिला दो बाहरी gills (ectobranchus), दो आंतरिक gills (endobranchus), या सभी चार gills (tetragenous)17में brooding glochidia पाया गया था. यह जानकारी FMGA करने के लिए जोड़ा जा सकता है और प्रत्येक प्रजातियों की जांच के लिए brooding के बारे में डेटा अंतराल को भरने में मदद. पर्यावरण की स्थिति, विशेष रूप से पानी के तापमान, एकत्र किया जा सकता है और विभिन्न latitudinal पर्वतमाला में प्रजातियों की gravidity स्थिति और समय की एक अधिक व्यापक अवलोकन के लिए क्षेत्र में दर्ज की गई. अनुसंधान से पता चलता है कि पर्यावरण मानकों, जैसे तापमान, फोटोअवधि, प्रवाह दर, और भोजन की उपलब्धता, मीठे पानी के mussels52,53,54,55 में प्रजनन घटनाओं को प्रेरित कर सकते हैं ,56. अतिरिक्त क्षेत्रों डेटाबेस के लिए जोड़ा जा सकता है के रूप में वे abiotic gravidity को प्रभावित कारकों पर भविष्य के अनुसंधान को बढ़ावा देने के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं. हमारे अध्ययन के बाद मॉडलिंग की एक कब्जा-मार्क-पुनः कब्जा संशोधन भी इस प्रोटोकॉल में जोड़ा जा सकता है, जो शोधकर्ताओं को एक विशिष्ट mussel प्रजनन आदतों पर नजर रखने और प्रति वर्ष कई broods पर जानकारी प्रकट करने की अनुमति होगी.

FMGA में जानकारी की सटीकता स्रोत पर निर्भर करता है. उदाहरण के लिए, मीठे पानी के mussels की गलत पहचान कई प्रजातियों के समान बाहरी विशेषताओं है कि यह मुश्किल प्रजातियों57के बीच अंतर करने के लिए बनाने के कारण आम है. एक गलत पहचान व्यक्ति से एक गिल नमूना भ्रम पैदा कर सकता है और एक प्रजाति 'विचार अवधि के लिए झूठी जानकारी. यदि एक गिल नमूना लिया जाता है, तस्वीरें दोनों वाल्व के अंदर लिया जाना चाहिए (यदि व्यक्ति जीवित नहीं है), सही वाल्व के बाहर, और umbo (हिंग जहां दो वाल्व कनेक्ट) और डेस्कटॉप साइट या मोबाइल आवेदन के माध्यम से gravidity डेटा के साथ प्रस्तुत किया. हम भी गिल सामग्री की तस्वीरें स्वागत करते हैं. प्रस्तुत फार्मों के भीतर वहाँ एक ड्रॉप डाउन मेनू कलेक्टर प्रजातियों की पहचान के बारे में विश्वास के अपने स्तर को इंगित करने के लिए सक्षम है. इससे पहले कि रिकॉर्ड मान्य है, इस जानकारी को ध्यान में रखा जाएगा जब विश्वसनीय वितरण के खिलाफ कलेक्टर पहचान की जाँच, आदि. यूनियनिडकी की प्रजातियों में अंतरजातीय रूपात्मक भिन्नता के उच्च स्तर के कारण, ऊतक नमूनों को प्रस्तुत करने को प्रोत्साहित किया जाता है और आणविक पहचान को सुविधाजनक बनाने के लिए आवश्यक हो सकता है।

भविष्य के निहितार्थ

एक गैर घातक विधि के रूप में, इस प्रोटोकॉल दोनों आम और अभेद्य प्रजातियों के लिए लागू किया जा सकता है. अभेद्य प्रजातियों के लिए gravidity कैलेंडर समय अवधि पर जानकारी प्रदान करके लुप्तप्राय प्रजातियों कानून और वसूली योजना के साथ शामिल संरक्षण प्रबंधकों की सहायता कर सकते हैं जब प्रजातियों प्रजनन सक्रिय हैं. राज्य और संघीय एजेंसियों है कि जोखिम पर प्रजातियों का प्रबंधन बेहतर समय के लिए अनुमति आवंटन की सलाह कर सकते हैं जब प्रजातियों कमजोर और प्रजनन नहीं है, और यहां तक कि समय के दौरान मेजबान मछली की फसल को सीमित mussels पूरी तरह से विकसित glochidia brooding हैं. इसके अतिरिक्त, फील्ड सर्वेक्षण भर्ती प्रक्रियाओं के प्रभाव को कम करने के लिए गैर-उत्पादक अवधियों के दौरान प्रजातियों को लक्षित कर सकते हैं। सार्वजनिक रूप से सुलभ डेटाबेस, FMGA, शोधकर्ताओं और प्रबंधकों के लिए एक उपकरण प्रदान करता है किसी भी लक्ष्य मीठे पानी mussel प्रजातियों पर महत्वपूर्ण प्रजनन जानकारी प्राप्त करने के लिए. डेटाबेस डेटा अंतराल को भी उजागर करेगा, प्रजातियों-विशिष्ट विचार पैटर्न पर आगे अनुसंधान को प्रोत्साहित करेगा। एक प्रजाति प्रजनन पैटर्न को समझने के बाद से पर्याप्त प्रबंधन निर्णय लागू करने के लिए अनुमति देता है, हम आशा करते हैं कि हमारे प्रोटोकॉल और डेटाबेस भविष्य मीठे पानी mussel अनुसंधान, संरक्षण, और वसूली की सुविधा.

Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

लेखकों के लिए धन स्रोतों का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं: अमेरिकी मछली और वन्यजीव सेवा और अमेरिकी भूवैज्ञानिक सर्वेक्षण. एंड्रयू Hartzog और सैंड्रा Pursifull के लिए एक विशेष धन्यवाद क्षेत्र के कर्मचारियों और डेटा संग्रह के आयोजन के लिए, लॉरेन पैटरसन और क्रिस एंडरसन के साथ डेटाबेस के विकास के लिए अपने बहुमूल्य योगदान के लिए. हम भी हर कोई है जो क्षेत्र और शेरी Bostick, मार्क कैंटरेल, Sahale Casebolt, जॉर्डन Holcomb, हावर्ड Jelks, गैरी Mahon, जॉन McLeod, केली चंद्रमा, Cayla मॉर्निंगस्टार, एम्मा Pistole, मैट Rowe, Channing सेंट सहित प्रयोगशाला में मदद का शुक्रिया अदा करना चाहूँगा. Aubin, और जिम विलियम्स. व्यापार, फर्म, या उत्पाद के नाम का कोई भी उपयोग वर्णनात्मक प्रयोजनों के लिए ही है और अमेरिकी सरकार द्वारा समर्थन मतलब नहीं है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL snap cap centrifuge tubes USA Scientific 1615-5510 Snap cap tubes are important in the field so the loose screw cap is not lost.
20 G needle on 10 mL disposable syringe Exelint International 26255 sterile 10 mL disposable syringe with needle Model: 10ml Luer Lock Tip W/20G X 1 1/2"
Dissecting Microscope any any
Marking Pen Fisher Scientific 13-379-4 This is what we used but any marker that can write on small plastic tubes will do. This one is fairly ethanol and water proof.
Molecular grade ethanol any any Needed if preserving gill contents. Non-denatured 95% is needed for genetic work, 70% is needed for SEM imaging work.
Paper any any Needed to record information on samples collected.
Pen/pencil any any If in the field, better to write on waterproof paper with pencil so it doesn't smear. If in the museum/lab, any writing utensil is fine.
Petri dish DWK Life Sciences (Kimble) 23000-9050 This is what we used but any petri dish available is fine. It is nicer to have the taller walls in case too much water is used.
Sodium Chloride any any Needed for NaCl test for reactive glochidia. Preserved samples do not need this.
Speculum any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.
Sterile water any any Added to gill samples to be evaluated for reactivity within 24 hours of collection.
Super glue Gorilla Gorilla super glue gel Used to apply tags and only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Tags Hallprint FPN 8x4 Only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Transfer Pipet Thermo Scientific Samco 225 This is what we use but any transfer pipet or squirt bottle is applicable.
Tweezers any any Needed to move crystals of NaCl for salt test. Preserved samples do not need this.
Waterproof paper RainWriter any Only needed if conducting work in the field. This allows you to record information on each individual gill contents are extracted from.
Wooden pick any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.

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References

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Freshwater mussels के प्रजनन की स्थिति और लार्वा विकास की विशेषता के लिए एक गैर-घातक विधि का मानकीकरण (Bivalvia: Unionida)
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Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, … More

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, N. A. Standardizing a Non-Lethal Method for Characterizing the Reproductive Status and Larval Development of Freshwater Mussels (Bivalvia: Unionida). J. Vis. Exp. (152), e60244, doi:10.3791/60244 (2019).

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