Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Standardisering en ikke-dødelig metode for karakteriserer den reproduktive status og larvestadiet utvikling av ferskvann blåskjell (muslinger: Unionida)

Published: October 4, 2019 doi: 10.3791/60244
Automatic Translation
1, 2, 1
1Wetland and Aquatic Research Center, United States Geological Survey, 2Garcon Point Aquatic Research Center, Florida Fish and Wildlife Conservation Commission

Summary

Ferskvann blåskjell bevaring er avhengig av overvåking reproduktive mønstre og prosesser av arter. Denne studien standardiserer en ikke-dødelig protokoll for prøvetaking Gill innhold, karakteriserer larvestadiet utvikling, og gir et digitalt oppbevaringssted for innsamlede data. Denne protokoll-databasepakken vil være et viktig verktøy for blåskjell forskere i utvinningen av imperiled arter.

Abstract

Aktivt overvåke timing, utvikling, og reproduktive mønstre av truede arter er avgjørende når du administrerer for befolkningen utvinning. Ferskvann blåskjell er blant de mest imperiled organismer i verden, men informasjon om tidlig larvestadiet (glochidial) utvikling og ruge perioder er fortsatt mangler for mange arter. Tidligere studier har fokusert på den komplekse livshistorie scenen når kvinnelige blåskjell er klar til å Ceratophyllidae vert fisk, men få studier har fokusert på ruge perioden og timing av larvestadiet utvikling. Protokollen som beskrives her, tillater forskerne å ikke-drepende evaluere tilstanden til svangerskap for kvinnelige blåskjell. Resultatene av denne studien viser at denne metoden ikke påvirker en kvinnelig musling evne til å holde gravid eller bli gravid igjen etter prøvetaking er utført. Fordelen med denne metoden kan tillate bruk på føderalt truet eller truede arter eller andre populasjoner av høy bevaring bekymring. Denne protokollen kan tilpasses for bruk på både bevarte og levende individer og ble testet på en rekke blåskjell arter. Databasen leveres er et oppbevaringssted for en bredde av informasjon om timing av reproduktive vaner og vil tilrettelegge fremtidige ferskvann blåskjell forskning, konservering, og utvinning innsats.

Introduction

Utholdenhet av populasjoner i ferskvann systemer avhenger av suksessen til reproduksjon og rekruttering. For parasitter organismer, identifisere vanskelighetene med livssyklusen (f. eks stadier av larvestadiet utvikling og vert attraksjon strategier) kan gi innsikt i kroppens reproduktive vaner og kritiske prosesser som påvirker rekruttering. Slik informasjon blir viktig når arten er imperiled, og vellykket rekruttering er nødvendig for å opprettholde gjenværende populasjoner, eller hvis utvinningen nødvendiggjør bruk av fange forplantning for gjenopprette fjernet populasjoner.

Ferskvann blåskjell (muslinger: Unionida) regnes som en av de mest imperiled grupper av organismer over hele verden og en samling av arter-spesifikke reproduktive vaner kan hjelpe i forskningsarbeid1,2,3 ,4,5. Med over 800 for tiden anerkjente arter fordelt over hele verden, ferskvann blåskjell har hotspots av mangfold i Nord-og Sør-Amerika, og Sørøst-Asia, men viktig livshistorie informasjon er ukjent for mange arter2, 5,6,7. Familier innenfor denne rekkefølgen er preget av å ha parasitt larvestadiet stadier som fullstendig forvandling til fritt levende yngel under vedlegg til en vert7,8. Denne unike livshistorie scenen bidrar til biologisk mangfold i ferskvannssystemer, som for tiden er i krise9. Høye nivåer av imperilment kan tilskrives mange menneskeskapte trusler inkludert forurensning av vassdrag, habitat endring og ødeleggelse, reduksjoner i overflod og mangfoldet av verts fisker, og innføring av invasiv Art1, 10i. Som bunn filter matere, graver blåskjell inn i underlaget og er mottakelige for forurensninger og forurensende stoffer som renner ut i vannskillet11. Gjenvinning av blåskjell arter er relevant ettersom de tilbyr et bredt utvalg av økosystemtjenester, inkludert karbonopptak, mat kilde, og vannrensing ved filter fôring11. I tillegg har blåskjell blitt funnet å indikere økosystem helse, fremme biologisk mangfold, og i sin tur øke toleransen av et økosystem12.

Mange studier av ferskvann blåskjell har fokusert på å undersøke tidlige livshistorie krav for å bedre informere arter status vurderinger og ledelses strategier. Den ferskvanns blåskjell familiene som er relevante for denne studien (f. eks Hyriidae, Margaritiferidae, Unionidae) har en unik livshistorie strategi der kvinner gruble larver (glochidia) i sine marsupial gjellene8. Gjennom en rekke strategier, expels den kvinnelige blåskjell modne glochidia fra marsupial gjellene å Ceratophyllidae en virveldyr vert med glochidia13. Forskning på glochidial utvikling innen gjellene ble modifisert fra en teknikk som utnytter sprøyte sprøyter for å prøve gonadal væske fra levende blåskjell og evaluere Kjønnscelle produksjon14,15,16. Som forskere validert denne ikke-dødelige metodikk for gonad prøvetaking, det var tilpasset marsupial Gill prøvetaking for å evaluere kull utvikling15,16. Kull utvikling kan brukes til å dechiffrere Fylogenetiske relasjoner som noen blåskjell arter kan gruble glochidia i bare de ytre to gjellene (ectobranchus), bare de indre to gjellene (endobranchus), eller i alle fire gjellene (tetrabranchus), men dette karakteristiske er ikke kjent for alle arter17. Ruge mønstre har tidligere blitt brukt til å klassifisere blåskjell arter av om kvinnelige blåskjell kull glochidia over vinteren (bradytictic) eller for en kort periode om sommeren (tachytictic)18. De over overvintring av blåskjell kull ble støttet da den reproduktive syklus av Anodonta ble studert19. Men, grunnleggende reproduksjons biologi ble studert grundigere gjennom årene og fant denne motsetningen var en grov generalisering og ruge perioder av noen arter er mye mer kompleks enn opprinnelig antatt20,21. For eksempel har arten av slekten Hyridella (familie Hyriidae), Glebula og Elliptio (familie Unionidae) blitt observert med i overkant av tre kull per avl sesong22,23, 24. Kompleksiteten av arter-spesifikke, og noen ganger også befolknings spesifikke20, reproduktive vaner har ført til et gap i kunnskap om timing og varighet av ruge, og antall kull en kvinnelig blåskjell kan produsere.

Selv om sprøyte sprøyter har blitt brukt til å trekke Gill innhold, rapportering resultatene er komplisert på grunn av mangel på standardisering å sikre sammenlignbare resultater på tvers av alle studier. Tidligere har fire utviklingsmessige stadier av glochidia (dvs. egg, embryo, umodne, fullt utviklet) er identifisert i Unionidae, men har ikke blitt vedtatt i standard prosedyre16,25,26. Andre studier observere medlemmer av Margaritiferidae har erstattet klassifisering av "umodne glochidia" med "utvikling glochidia", fører til potensielle forvirring27,28. Mangelen på konsistens i karakteriserer de ulike larvestadiet utviklings faser har etterlatt mange forskere til å generelt beskrive ruge kvinner som "gravid", som ikke omfatter vanskelighetene med larvestadiet utvikling. Livet historie studier gjennomfører vert-fisken rettssaker ha prioritet behovet for gravid kvinner med fullt ut-bebygget glochidia, bortsett fra denne beskjed er spredt helt gjennom offentliggjort og upublisert litteraturen29,30. For tiden mangler data om reproduksjons vanene til mange blåskjell arter, inkludert timing av overgangen mellom egg, umodne glochidia, og fullt utviklet glochidia klar for vedlegg til verter. For de fleste arter, er det uklart hvor lenge kvinner gruble glochidia og hvor raskt befruktet egg fullt utvikle. Kunnskapshullene er ofte bredere for arter av bevaring bekymring, som presenterer behovet for en standardisert metode for å utvinne Gill innhold som har blitt testet for ikke-dødelige effekter og kan fremmes til det vitenskapelige samfunnet for å supplere ordinære datainnsamlingsmetoder, uten å utgjøre en trussel mot beskyttede populasjoner24,31,32.

Denne studien hadde tre målsettinger: 1) formalisere en Gill prøvetaking teknikk og teste den for dødelige og ikke-dødelige effekter på kvinnelige blåskjell in situ, 2) karakterisere ulike stadier av glochidial utvikling og beskrive en standardisert metode for å identifisere og rapportere ulike larvestadiet stadier, og 3) opprette et offentlig oppbevaringssted for innsamlede data. Feltundersøkelser, langsiktige overvåknings prosjekter og Museums samlinger representerer alle muligheter for protokollen som beskrives her, som skal implementeres, og tilleggsdata som skal samles inn for en større interesse gruppe. Formalisert protokollen inkluderer grafikk og tegn beskrivelser for å skille hvert trinn i larvestadiet utvikling. Ved standardisering kategoriene, resultatene samlet kan sammenlignes blant alle forekomster og arter. Når data er samlet inn, kan alle sendes til ferskvanns blåskjell svangerskap almanakk (FMGA), som er en database for svangerskap informasjon som samles inn ved hjelp av denne protokollen. Et sluttprodukt til å lagre og kompilere alle svangerskap informasjon samlet vil gi et forskningsverktøy for å lette fremtidige forskning, bevaring, og utvinning innsats. Innlemmelse av denne metodikken i ulike blåskjell prosjekter og innlevering av data til FMGA ville ekspandere på bredden av kunnskap om svangerskap status for blåskjell arter gjennom hele året. Som en svært imperiled gruppe organismer, denne protokollen og resulterende databasen på reproduktive vaner av ferskvann blåskjell er avgjørende for å forstå befolkningen dynamikk og tilrettelegge for bevaring av disse artene.

Protocol

1. gravid kvinnelig samling

Merk: referanse til Fish and Wildlife Service ' s freshwater blåskjell Survey Protocol33 for veiledning om hvordan du adekvat kartlegge en prøvetaking nettsted for truet eller truede arter. Riktig føderale tillatelser må innhentes før felt samling av beskyttede arter og statlige tillatelser for alle arter til stede.

  1. Samle levende blåskjell fra feltet ved hjelp av taktile-visuelle metoder (trinn 1,2) eller bruk bevarte prøver fra et museum (trinn 1,3).
    Merk: det er viktig å holde levende blåskjell kjølige og våte etter samlingen for å hindre uttørking og redusere stress, og minimal håndtering av gravid blåskjell er viktig å unngå kvinner tidlig slippe Gill innholdet34.
  2. Evaluer kvinnelige svangerskap enten ved visuell inspeksjon under oppsamling (for eksempel ved tilstedeværelse av mantel lokke, conglutinates, etc.) eller ved visuell inspeksjon etter oppsamling (f.eks. forsiktig nysgjerrige åpne ventiler nok til å se inn og se om gjellene er oppblåst, se Figur 1).
    Merk: arter varierer i hvordan glochidia er grublet innenfor marsupial gjellene som noen ganger bare de to ytre gjellene (ectobranchus), bare de to indre gjellene (endobranchus), eller alle fire gjellene (tetragenous) er marsupial17. Protokollen kan stanses midlertidig her, og gravid hunner kan transporteres tilbake til laboratoriet for Gill prøvetaking.

Figure 1
Figur 1: forsiktig nysgjerrige individer åpne. For å sjekke svangerskap av et levende blåskjell, må du forsiktig åpne ventilene med tommelen (a) eller forsiktig bruke en eller omvendt tang for å åpne ventilene (B). Se gjennom trinn 2,3 i protokollen for advarsler som er knyttet til denne metoden. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

  1. Utfør en visuell inspeksjon av bevarte prøver ved å åpne ventilene og inspisere gjellene for å avgjøre om individet er en gravid kvinne (figur 2).

Figure 2
Figur 2: Hvordan identifisere en gravid kvinne. Marsupial gjellene for kvinnelige blåskjell vises oppblåst Når hunnen er gravid og ruge. Bilder A og C viser gjellene fra et side perspektiv, mens bilder B og D gir en ventrale visning av gjellene. Røde bokser skissere gjellene å markere forskjellene mellom en gravid (A/B) og ikke gravid (C/D) kvinnelige Lampsilis straminea blåskjell. Den totale lengder av individer er 79 mm (A/B) og 88 mm (C/D). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

2. Gill innhold prøvetaking

Merk: denne protokollen kan tilpasses om prøvetaking skjer på levende blåskjell i felten og laboratoriet, eller på bevarte prøver.

  1. Forbered en 1,5 mL plast mikrosentrifugen med ca. 1 mL enten sterilt vann hvis Gill innhold vil bli evaluert innen 24 timer etter ekstraksjon35 eller etanol (EtOH) hvis prøve evaluering ikke kan forekomme innen 24 h av samlingen eller hvis Gill innholdet er fra et museum eksemplar bevart i EtOH. Hvis glochidia er ment for skanning av elektronmikroskop (SEM), bruk 70% EtOH, og hvis glochidia skal brukes til genetisk testing, bruk ikke-denaturert 95% EtOH36.
  2. Fjern papir emballasjen for en steril 20 G skråkant-spiss nål på en 10 mL sprøyte. Skru av hetten for å avdekke nålen og forberede en 1,5 mL plastrør for Gill innhold samling. Skyv håndtaket på sprøyten helt ned slik at den svarte proppen er på 0 mL/kopi-linjen.
    Merk: en steril sprøyte skal brukes hver gang innholdet i Gill blir samplet. En brukt sprøyte kan steriliseres i feltet ved å dyppe spissen i en 10% blekemiddel løsning, deretter skylle sprøyten ved å fylle den med 1 mL sterilt vann og deprimerende stempelet tilbake til 0 mL/CC, og til slutt tørker sprøyten med en ren klut.
  3. Plukk opp gravid kvinnelige og forsiktig snuse åpne de to ventiler ved hjelp av tips av tommelen.
    FORSIKTIG: Vær forsiktig så du ikke skader dyret. Åpning av ventiler for bred eller for fort kan overutstrekke adductor muskler og forårsake dødelighet. Tynne skall prøver (f.eks. arter av Anodonta, Leptodea, Utterbackiaosv.) og unge individer er spesielt sårbare i dette trinnet. Kraftig håndtering av skjøre skall arter kan knekke skjellene og forårsake dødelighet. I noen tilfeller, klemme tynne skalldyr fra fremre og bakre Shell marginer, mens du ser på ventrale overflate, vil føre til at skallet til å bøye og gape litt, slik at en å observere gjellene eller snuse åpne skjell og unngå å skade den skjøre skall margin.
    Merk: verktøy kan brukes til å bistå med dette trinnet, men kan også føre til dødelighet hvis det ikke brukes med forsiktighet og bør unngås når det er mulig. For eksempel kan en en-eller modifisert sett av omvendt tang brukes til å hjelpe til med å snuse den enkelte åpen, og en kile kan brukes til å hjelpe til med å åpne ventilene. Disse instrumentene er kanskje ikke nødvendig hvis en annen person er tilgjengelig for å bistå (dvs. en person holder dyret åpent mens en annen manøvrer sprøyten for ekstraksjon). Skade eller skille kappe vevet fra periostracum kan forårsake vekst misdannelser og dødelighet37; Derfor er det avgjørende å unngå severing forbindelsen mellom kappe vevet og yttermargen av skallet.
  4. Bruk nålen spissen av sprøyten for å forsiktig trenge inn i et enkelt vannrør av oppblåst marsupial Gill. Deretter forsiktig scoop det Gill innholdet ut ved å utnytte den skrå spissen av nålen.
    Merk: Gill innholdet har vanligvis en melkeaktig-hvit konsistens, som skal være synlig på skrå spissen av nålen.
    1. Sett innholdet av sprøyten direkte inn i en Petri rett hvis et mikroskop er lett tilgjengelig. Hvis ikke, lagrer du innholdet i et 1,5 mL plast mikrosentrifugen rør med angitt væske (se trinn 2,1) for senere evaluering.
      Merk: Minimer forstyrrelser og håndtering av glochidia prøver under transport for å unngå skade og redusert levedyktighet32,35.
  5. Record informasjon om slekten-arter identifikasjon, svangerskap status, lengde på kvinnelige (mm), samler og kontaktinformasjon, stat, fylke, drenering, bestemt samling plassering, breddegrad og lengdegrad, en unik identifikator for Gill eksempel, en unik identifikator for undersøkelsesområdet, og datoen for samlingen hvis Gill innholdet ble hentet (Figur 3). Registrer en unik identifikator for hvert oppsamlings fartøy for å sikre nøyaktige dataposter under transporten.
    1. Fotografere utsiden høyre ventil av blåskjell for identitetsvalidering og inkludere røret merket med den unike identifikatoren leselig i bildet. Eventuelt kan du samle inn andre abiotiske og biotiske parametre for å supplere informasjonen om miljøet og samfunnet som blåskjell ble funnet i (se Figur 3 for forslag).

Figure 3
Figur 3: eksempel på et felt svangerskap dataark. Nøyaktig datarapportering er nødvendig hvis en Gill prøven er tatt for å produsere pålitelig informasjon. Dette er et eksempel på et felt dataark med minimum felt og ekstra abiotiske parametere som skal samles sammen med hver Gill prøven. Hvis du vil ha mer omfattende informasjon, kan du se trinn 4,1 i protokollen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

3. laboratorie evaluering av Gill innhold

  1. Hvis Gill innholdet er i en 1,5 mL tube, overføre dem til en Petri parabol og fylle bunnen av fatet med vann. Forsiktig virvel Petri parabolen i en sirkulær bevegelse for å samle innholdet i midten av fatet for en mer konsentrert visning av prøven.
    Merk: den 1,5 mL røret må spyles ut ved hjelp av en sprut flaske eller overføre Pipet fylt med vann hvis Gill innholdet stikker til tube vegger.
  2. Plasser Petri parabolen under et dissekere mikroskop for å evaluere prøven. Hvis det er mulig, ta et bilde av Gill prøven under mikroskopet og merke den med den unike identifikatoren for dette utvalget.
    1. Record resultatene av hvilke utviklingsmessige stadier er til stede i hver Gill prøven. Bruk Figur 4 som en guide til å karakterisere hvert utviklingstrinn scenen. I noen tilfeller kan kvinner være ruge larver på flere utviklingstrinn; Derfor rapporterer alle utviklingstrinn observert innenfor et gitt utvalg (f. eks ' EGG/DG/IMG/FDG '). Når bevarte glochidia er evaluert, går du videre til del 4. Hvis fullt utviklede glochidia identifiseres og EtOH ikke ble brukt til bevaring, går du videre til trinn 3,3.
      Merk: EGG, egg massene; DG, utvikle glochidia; IMG, umodne glochidia; FDG, fullt utviklet glochidia.

Figure 4
Figur 4: representasjoner for ulike stadier av glochidia utvikling i marsupial gjellene. (A) egg MASSENE (egg) har en membran som gjør egg klump sammen. Innenfor hver egg membran er det en ugjennomsiktig sfærisk masse av differensiering celler. Den ugjennomsiktige sfæriske massen kan deles inn i flere sfæriske masser under tidlig celle divisjon, men bør fortsatt være registrert som EGG til en distinkt bivalve form er observert. (B) umodne GLOCHIDIA (img) har en distinkt bivalve masse inneholdt i egget membranen. (C) utvikle GLOCHIDIA (DG) har en distinkt bivalve form, ingen egg membran, og uorganisert vev inne, ofte fuzzy i utseende. Utvikling av glochidia (DG) er ikke reaktive når de utsettes for NaCl og klassifiseres som ' DG (T) ' når data registreres. (D) fullt utviklet GLOCHIDIA (FDG) har den distinkte bivalve form og åpenbare adductor muskel vev slik at glochidia å lukke. Fullt utviklede glochidia (FDG) er ofte observert som to åpne ventiler etter bevaring. To åpne ventiler vil vanligvis snap lukket, eller snap åpen og lukket, når de utsettes for NaCl og er klassifisert som ' FDG (T) '. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

  1. Utfør en natriumklorid (NaCl) test for ytterligere å evaluere levedyktigheten til ethvert fullt utviklet glochidia ved å legge til en krystall av NaCl til en delsett dråpe av Gill prøven35. Levedyktig glochidia vil svare på NaCl ved å lukke sine ventiler fra en åpen stilling. Rapporter eventuelle salt-testet glochidia med ' (T) ' på slutten av betegnelsen når data registreres.
    Merk: fullt utviklede glochidia kan også observeres aktivt knipser åpent og lukket uten eksponering for NaCl.

4. rapporter til database

  1. Få tilgang til FMGA Web (http://arcg.is/089uee), som ble utviklet ved hjelp av online programmer38,39,40. FMGA-siden gir en kobling til dataregistreringsskjemaet på skrivebordet og et program nedlasting for mobile enheter. Mobilappen gjør det mulig å skrive inn data i felten og automatiserte georeferencing41.
    Merk: den svangerskap kalenderen og annen grafikk knyttet til ferskvanns blåskjell arter livshistorie hendelser kan også bli funnet på FMGA Dashboard.
    1. Bruk mobilappen eller skrivebordsområdet til å registrere resultater i dataregistreringsskjemaet ved å bruke rullegardinmenyer og tekstoppføringsfelt. For store, pre-eksisterende datasett, kontakt forfatterne for malen regneark. Skriv inn registrerte data under de aktuelle kolonneoverskriftene, husk at hver post, eller rad på regnearket, representerer observasjoner av et Gill utvalg fra en gravid individ.
    2. Send inn resultatene, og de vil bli lagt til FMGA databasen etter å ha blitt validert av en administrator, som kan kontakte samleren for å be om ytterligere detaljer eller bilder.
      Merk: når data er validert og kompilert i FMGA-databasen, vil alle svangerskap kalendere og annen interaktiv grafikk som vises på FMGA-dashbordet bli oppdatert.

Representative Results

Denne protokollen ble brukt under en fangst-merke-gjenerobre studie som overvåket ferskvann blåskjell samfunnet innenfor en 750 m2 strekning av Bruce Creek (Walton County, Florida) fra januar 2015 til desember 2015. Det var planlagt at prøvetaking skulle skje hver fjerde uke. Imidlertid, på grunn av høy-flyte begivenheter, prøvetaking var ikke gjennomført inne April måned eller september av 2015. Statlige og føderale etater inkludert US Geological Survey, US Fish and Wildlife Service, og Florida Fish and Wildlife Conservation Commission assistert i feltet undersøkelser og Gill prøvetaking. Hver gravid kvinnelige møtte under undersøkelsen ble utsatt for in-Field Gill innhold prøvetaking ved hjelp av protokollen beskrevet ovenfor, merket (se tabell over materialer), og plassert tilbake i elva underlaget. Den Gill prøvene ble lagret i 95% EtOH og transportert til US Geological Survey ' s Wetland og Aquatic Research Center ' s laboratorium for evaluering av Gill innholdet.

Ved merking kvinner og tok tilbake dem med månedlige intervaller gjennom hele året, vurderte vi både dødelige og ikke-dødelige virkninger av Gill prøvetaking protokollen på totalt 90 individer. Følgende sju arter ble gjenerobret i løpet av denne studien : Elliptio pullata (n = 5), Fusconaia burkei (n = 1), Hamiota australis (n = 19), Obovaria Choctawensis (n = 1), Strophitus williamsi (n = 1), Villosa lienosa (n = 60) og villosa vibex (n = 3). Våre prøvetaking inkluderte individer fra 24 mm til 80 mm i total lengde og to arter (F. burkei og H. australis) beskyttet av den amerikanske truede arter loven. Alle data som benyttes i denne studien er offentlig tilgjengelige vi har gitt tilgang til datasettet vårt på ScienceBase (https://doi.org/10.5066/P90VU8EN)42.

Survivorship ble vurdert av hvor mange individer ble gjenerobret levende etter Gill sample samling. Vi observerte høye survivorship (97%) under studien med noen dødelighet, muligens contributable til predasjon, indikert av på stedet observasjoner. Resultatene viste rundt 51% av individer (46 av 90) ble funnet å bo gravid mellom påfølgende prøvetaking hendelser. Ytterligere 10% av individer (9 av 90) ble funnet gravid, gjenerobret ikke gravid, og fant gravid igjen. Om 39% av individer (35 av 90) i denne studien ble funnet gravid, en Gill prøven ble tatt, men da gjenerobret igjen gjennom hele året, ble de aldri funnet gravid en gang. Resultatene tyder på at protokollen som er beskrevet her er verken dødelig eller sub-dødelige og ikke vesentlig forstyrre den nåværende ruge perioden etter Gill ble samplet.

Selv om utvalgsstørrelsene i denne studien er ulike på tvers av arter, fremhever resultatene fra denne studien de gunstige og praktiske anvendelser av denne protokollen. Den svangerskap kalenderen for V. lienosa illustrerer gravid kvinner ruge FDG ble funnet i nesten hver måned i året unntatt august, da bare kvinner ruge egg ble funnet (figur 5a). Kvinne H. australis ble funnet ikke GRAVID (ng) i juli, august og desember. En større andel av kvinner ble ruge FDG i januar og februar, men ble også funnet i oktober og november (figur 5B). Ingen individer av E. pullata ble funnet ruge FDG selv om hunnene var ruge egg fra mai til juni, og en gravid kvinne registrert (GFR) i juni (figur 5c). Den eneste gravid F. burkei kvinne ble funnet GFR i juni og gjenerobret ng i juli. Den samme O. choctawensis person ble samlet FDG i februar og gjenerobret ng i juli. Bare én S. williamsi ble funnet og ble gjenerobret tre ganger. Denne kvinnen ble funnet FDG i mars, NG i mai, GFR i juni, og EGG i august (figur 5c). Gravid hunner av V. vibex ruge FDG ble funnet mellom februar og juni (figur 5c).

Figure 5
Figur 5: resultatene av studien i Bruce Creek, FL vises i et svangerskap kalenderformat. (A) svangerskap kalender for villosa lienosa fanger/recaptures. (B) svangerskap kalender for Hamiota australis fanger/recaptures. (C) svangerskap kalendere for alle arter med mindre enn 10 individer samplet. Y-aksen inneholder forkortelser for månedene januar (Ja), februar (F), mars (Mr), mai (min), juni (JN), juli (JL) august (A), oktober (O), november (N) og desember (D). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Discussion

Betydning

Bevaring av imperiled arter er avhengig av vellykket rekruttering i bevarte populasjoner. I noen tilfeller kan kunstig forplantning være nødvendig å forsterke rekrutteringen av disse i risikosonen populasjoner. Dette krever at forskerne blir informert om tidspunktet for aktiv reproduksjon for hver art og eventuelt anvende ulike metoder eller forvaltningspraksis for å redusere innvirkning på rekruttering. Som en imperiled gruppe organismer, er det viktig å etablere en standardisert og ikke-dødelig tilnærming for å studere reproduktive vaner, og å gi en plattform som å kompilere og visualisere data for å informere det vitenskapelige samfunn med den mest oppdaterte informasjon tilgjengelig. Denne studien gir en trinnvis protokoll for å sikre forholdsregler er tatt, og Gill innholdet kan være tilstrekkelig samplet og evalueres fra kvinnelige blåskjell. Denne protokollen ble testet for dødelige og ikke-dødelige effekter, slik at forskere og ledere til ansvarlig implementere denne metodikken. Vi har også utviklet en pakke med database administrasjonsverktøy og-programmer for å gjøre det enklere å samle svangerskap informasjon på et offentlig tilgjengelig, brukervennlig dashbord. Studier på epidemiologi, glochidia morfologi, livshistorie, phylogenetics, forplantning og translokasjoner kan alle ha nytte og utnytte dette depotet av timelig svangerskap informasjon for alle arter av ferskvann blåskjell.

Denne studien alene støttet tidligere studier ' funn av noen arter reproduktive vaner, men også avslørt romanen informasjon om andre. Selv om v. vibex ble samlet inn i færre tall enn v. lienosa, kan likheter bli funnet mellom de to basert på svangerskap data. Begge arter av villosa synes å gruble fullt utviklet glochidia under en stor del av året, som karakteriserer dem som en overvintring brooder. Dette er i overensstemmelse med tidligere studier på andre villosa arter43,44,45. Resultatene av denne studien tyder H. australis kan bli funnet gravid fra oktober og overvintring i juni, bortsett fra ingen fanger ble funnet gravid i desember. En tidligere publisert studie identifiserte congener H. altilis med en svangerskap periode på fire måneder, mars til juni46,47. Dette funnet illustrerer en lengre svangerskap periode enn tidligere antatt og generelt grupper H. australis som en overvintring brooder. Som føderalt beskyttede arter kunne varierende ruge perioder for h. altilis og h. australis påvirke Ledelsens beslutninger for å bedre beskytte befolkningen under reproductively aktive tider. Elliptio pullata ble bare funnet gravid med egg i mai og juni som tilsvarer deres karakterisering som en tachytictic arter med en svært kort ruge periode24,48,49, i 50. Som data er kompilert på Elliptio arter ved hjelp av denne protokollen, detaljert informasjon kan gjøre feltet innsats mer effektiv når visse glochidial utviklingstrinn er målrettet, siden glochidia er bare funnet et par måneder av året. Slutning fra de andre artene med lavere utvalgsstørrelser er begrenset, men etter hvert som dataene kompileres inn i databasen, vil de høyere utvalgsstørrelsene gi innsikt i reproduktive vaner med ytterligere blåskjell arter.

Prosessuelle kommentarer

Ferskvann blåskjell og deres glochidia er kjent for å være utsatt for menneskeskapte stressfaktorer10,35. Under svangerskap inspeksjon, kan blåskjell ventilene ikke være lett å åpne, og uforsiktig tvinge ventilene åpne kan forårsake utilsiktet skade og resultere i stress eller dødelighet. Noen skjøre skallet arter (f. eks arter av Anodonta, Leptodea, Utterbackia, etc.) og mindre størrelse individer kan ha svært skjøre skjell og svake adductor muskler som kan bryte og rive lett. Gill prøvetaking kan betraktes som en stressor hvis håndtering er ikke gjort ansvarlig og med forsiktighet. En tidligere studie fant at håndtering og antenne eksponering av blåskjell under reproductively aktive tider kan føre til ulike fysiologiske stress, inkludert prematur utgivelse av Gill innholdet34. Men en studie utnytte en lignende metodikk som beskrevet her, fant håndtering gravid kvinnelige blåskjell under Gill prøvetaking ikke avbryte den nåværende kull eller forårsake for tidlig utgivelse i både kort-og langsiktige ruge arter16. Videre må en steril sprøyte brukes under denne protokollen for å forhindre utilsiktet infeksjon eller krysskontaminering når punktering gjellene av flere individer. I tillegg er glochidia skjøre og kull kan bli modnet og stresset, men ikke utvist. Modne glochidia i dårlig helse kan resultere i færre individer reagerer på salt tester35. Når du gjør skillet mellom DG (T) og FDG (T) er det viktig å salt test med en stor utvalgsstørrelse, gjøre notater på observasjoner å nøye identifisere forskjeller mellom DG og FDG glochidia ved hjelp av beskrivelsene i denne studien. Når riktig behandling er tatt, kan minimal belastning indusert ved denne prosedyren tillate kvinnelige blåskjell å fortsette ruge glochidia naturlig og redusere virkninger på rekruttering i befolkningen.

Ytterligere data kan registreres for å supplere databasen og gi bred kontekst for reproduktive vaner av ferskvann blåskjell. Noen arter (f. eks, arter av Fusconaia), har blitt observert å ha gjellene av forskjellige farger basert på utviklingen stadium av glochidia51. Under en innledende svangerskap sjekk av den kvinnelige, en beskrivelse av Gill farge kan være inkludert i de rapporterte data for å muliggjøre fremtidige undersøkelser. Likeledes, på dette tidspunkt inne protokollen, forskning kanne note hvorvidt ruge kvinner var grunnlegge ruge glochidia inne det to ytre gjellene (ectobranchus), to indre gjellene (endobranchus), eller alle fire gjellene (tetragenous)17. Denne informasjonen kan legges til FMGA og bidra til å fylle inn data hullene om ruge for hver art undersøkt. Miljøforhold, spesielt vanntemperatur, kan samles og registreres i feltet for en mer helhetlig observasjon av svangerskap status og tidspunkt for arter på ulike bredde områder. Forskning viser at miljø parametre, slik som temperatur, photoperiod, strømningshastighet og mat tilgjengelighet, kan indusere reproduktive hendelser i ferskvann blåskjell52,53,54,55 ,56. Ytterligere felt kan legges til databasen som de er sendt for å fremme fremtidig forskning på abiotiske faktorer som påvirker svangerskap. A Capture-merke-gjenerobre modifikasjon modellert etter vår studie kan også legges til denne protokollen, som ville tillate forskere å overvåke en bestemt blåskjell ' s reproduktive vaner og avdekke informasjon om flere kull per år.

Nøyaktigheten av informasjonen i FMGA avhenger av kilden. For eksempel, forveksling av ferskvann blåskjell er vanlig på grunn av mange arter som har lignende ytre egenskaper som gjør det vanskelig å skille mellom arter57. En Gill prøve fra en feilidentifisert person kan skape forvirring og falsk informasjon for en Art ' ruge periode. Hvis en Gill prøven er tatt, bør fotografier tas på innsiden av begge ventiler (hvis enkelte ikke er i live), utenfor høyre ventil, og umbo (hengslene der to ventiler koble) og sendt med svangerskap data via skrivebordet nettstedet eller mobil applikasjon. Vi tar også bilder av innholdet i Gill. Innenfor innlevering skjemaene er det en rullegardinmeny slik at samleren å indikere deres nivå av tillit om arten identifikasjon. Før posten er validert, vil denne informasjonen bli tatt i betraktning når du sjekker Collector identifikasjon mot sannsynlig distribusjon, etc. På grunn av den høye graden av intraspesifikk morfologiske variasjon i arter av Unionidae, er innlevering av vevsprøver oppmuntret og kan være nødvendig for å lette molekylær identifisering.

Fremtidige implikasjoner

Som en ikke-dødelig metode, kan denne protokollen brukes på både vanlige og imperiled arter. Den svangerskap kalendere for imperiled arter kan bistå bevaring ledere involvert med truede arter lovgivning og utvinning planlegging ved å gi informasjon om tidsperioder når arter er reproductively aktive. Staten og føderale etater som forvalter i risikosonen arter kan bedre råd tillatelse bevilgninger for tider når arten ikke er sårbar og reproduksjon, og selv begrense innhøstingen av verten fisk i tider blåskjell er ruge fullt utviklet glochidia. I tillegg kan feltundersøkelser målrette arter i løpet av ikke-reproduktive perioder for å minimere innvirkningen på rekrutteringsprosesser. Den offentlig tilgjengelige databasen, FMGA, er et verktøy for forskere og ledere for å få viktig reproduksjons informasjon om alle mål typer av ferskvanns blåskjell. Databasen vil også fremheve data gap, oppmuntre til videre forskning på Art-spesifikke ruge mønstre. Siden forstå en art reproduktive mønster gjør det mulig for tilstrekkelig ledelse beslutninger skal gjennomføres, håper vi at vår protokoll og database tilrettelegge fremtidige ferskvanns blåskjell forskning, konservering og utvinning.

Disclosures

Forfatterne har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Forfatterne vil gjerne takke finansieringen kilder: US Fish and Wildlife Service og US Geological Survey. En spesiell takk til Andrew Goodman og Sandra Pursifull for organisering feltet mannskaper og datainnsamling, sammen med Lauren Patterson og Chris Anderson for sine verdifulle bidrag til database utvikling. Vi vil også gjerne takke alle som hjalp i felten og laboratoriet med Sherry Bostick, Markus Cantrell, Sahale Casebolt, Jordan Holcomb, Howard Jelks, Gary Mahon, John McLeod, Kyle Moon, Cayla Morningstar, Emma ligaer, Matt Rowe, Channing St. Aubin, og Jim Williams. All bruk av handels-, firma-eller produktnavn er kun ment som beskrivende, og innebærer ikke godkjennelse fra amerikanske myndigheter.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL snap cap centrifuge tubes USA Scientific 1615-5510 Snap cap tubes are important in the field so the loose screw cap is not lost.
20 G needle on 10 mL disposable syringe Exelint International 26255 sterile 10 mL disposable syringe with needle Model: 10ml Luer Lock Tip W/20G X 1 1/2"
Dissecting Microscope any any
Marking Pen Fisher Scientific 13-379-4 This is what we used but any marker that can write on small plastic tubes will do. This one is fairly ethanol and water proof.
Molecular grade ethanol any any Needed if preserving gill contents. Non-denatured 95% is needed for genetic work, 70% is needed for SEM imaging work.
Paper any any Needed to record information on samples collected.
Pen/pencil any any If in the field, better to write on waterproof paper with pencil so it doesn't smear. If in the museum/lab, any writing utensil is fine.
Petri dish DWK Life Sciences (Kimble) 23000-9050 This is what we used but any petri dish available is fine. It is nicer to have the taller walls in case too much water is used.
Sodium Chloride any any Needed for NaCl test for reactive glochidia. Preserved samples do not need this.
Speculum any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.
Sterile water any any Added to gill samples to be evaluated for reactivity within 24 hours of collection.
Super glue Gorilla Gorilla super glue gel Used to apply tags and only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Tags Hallprint FPN 8x4 Only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Transfer Pipet Thermo Scientific Samco 225 This is what we use but any transfer pipet or squirt bottle is applicable.
Tweezers any any Needed to move crystals of NaCl for salt test. Preserved samples do not need this.
Waterproof paper RainWriter any Only needed if conducting work in the field. This allows you to record information on each individual gill contents are extracted from.
Wooden pick any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Williams, J. D., Warren, M. L., Cummings, K. S., Harris, J. L., Neves, R. J. Conservation status of freshwater mussels of the United States and Canada. Fisheries. 18 (9), 6-22 (1993).
  2. Lopes-Lima, M., et al. Conservation status of freshwater mussels in Europe: state of the art and future challenges. Biological Reviews. 92 (1), 572-607 (2017).
  3. Zieritz, A., et al. Diversity, biogeography and conservation of freshwater mussels (Bivalvia: Unionida) in East and Southeast Asia. Hydrobiologia. 810 (1), 29-44 (2018).
  4. Haag, W. R., Williams, J. D. Biodiversity on the brink: an assessment of conservation strategies for North American freshwater mussels. Hydrobiologia. 735 (1), 45-60 (2014).
  5. Ferreira-Rodríguez, N., et al. Research priorities for freshwater mussel conservation assessment. Biological Conservation. 231, 77-87 (2019).
  6. Graf, D. L., Cummings, K. S. Review of the systematics and global diversity of freshwater mussel species (Bivalvia: Unionoida). Journal of Molluscan Studies. 73 (4), 291-314 (2007).
  7. Lydeard, C., Cummings, K. Freshwater mollusks of the world: a distribution atlas. , Johns Hopkins University Press. Baltimore, MD. (2019).
  8. Wächtler, K., Dreher-Mansur, M. C., Richter, T. Larval types and early postlarval biology in naiads (Unionoida). Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. Bauer, G., Wächtler, K. , Springer. Berlin, Heidelberg. 93-125 (2001).
  9. Dudgeon, D., et al. Freshwater biodiversity: importance, threats, status and conservation challenges. Biological Reviews. 81 (2), 163-182 (2006).
  10. Downing, J. A., Van Meter, P., Woolnough, D. A. Suspects and evidence: a review of the causes of extirpation and decline in freshwater mussels. Animal biodiversity and Conservation. 33 (2), 151-185 (2010).
  11. Vaughn, C. C. Ecosystem services provided by freshwater mussels. Hydrobiologia. 810 (1), 15-27 (2018).
  12. Aldridge, D. C., Fayle, T. M., Jackson, N. Freshwater mussel abundance predicts biodiversity in UK lowland rivers. Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 17 (6), 554-564 (2007).
  13. Barnhart, M. C., Haag, W. R., Roston, W. N. Adaptations to host infection and larval parasitism in Unionoida. Journal of the North American Benthological Society. 27 (2), 370-394 (2008).
  14. Saha, S., Layzer, J. B. Evaluation of a nonlethal technique for determining sex of freshwater mussels. Journal of the North American Benthological Society. 27 (1), 84-89 (2008).
  15. Tsakiris, E. T., Randklev, C. R., Conway, K. W. Effectiveness of a nonlethal method to quantify gamete production in freshwater mussels. Freshwater Science. 35 (3), 958-973 (2016).
  16. Gascho, L., Andrew, M., Stoeckel, J. A. Multi-stage disruption of freshwater mussel reproduction by high suspended solids in short-and long-term brooders. Freshwater Biology. 61 (2), 229-238 (2016).
  17. Bauer, G., Wächtler, K. Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. , Springer Science and Business Media. Berlin, Germany. (2012).
  18. Ortmann, A. E. Notes upon the families and genera of the najades. Annals of the Carnegie Museum. 8 (2), 222 (1912).
  19. Heard, W. H. Sexuality and other aspects of reproduction in Anodonta (Pelecypoda: Unionidae). Malacologia. 15, 81-103 (1975).
  20. Heard, W. H. Brooding patterns in freshwater mussels. Malacological Review. 7, Supplement 7: Bivalvia 105-121 (1998).
  21. Watters, G. T., O'Dee, S. H. Glochidial release as a function of water temperature: beyond bradyticty and tachyticty. Proceedings of the Conservation, Captive Care, and Propagation of Freshwater Mussels Symposium. , 135-140 (1998).
  22. Parker, R. S., Hackney, C. T., Vidrine, M. F. Ecology and Reproductive Strategy of a South Louisiana Freshwater Mussel, Glebula Rotundata (Lamarck) (Unionidae: Lampsilini). Freshwater Invertebrate Biology. 3 (2), 53-58 (1984).
  23. Jones, H. A., Simpson, R. D., Humphrey, C. L. The reproductive cycles and glochidia of fresh-water mussels (Bivalvia: Hyriidae) of the Macleay River, Northern New South Wales, Australia. Malacologia. 27 (1), 185-202 (1986).
  24. Price, J. E., Eads, C. B. Brooding patterns in three freshwater mussels of the genus Elliptio in the Broad River in South Carolina. American Malacological Bulletin. 29 (1), 121-126 (2011).
  25. Haag, W. R., Staton, J. L. Variation in fecundity and other reproductive traits in freshwater mussels. Freshwater Biology. 48 (12), 2118-2130 (2003).
  26. Soler, J., Wantzen, K. M., Jugé, P., Araujo, R. Brooding and glochidia release in Margaritifera auricularia (Spengler, 1793) (Unionoida: Margaritiferidae). Journal of Molluscan Studies. 84 (2), 182-189 (2018).
  27. Smith, D. G. Notes on the biology of Margaritifera margaritifera margaritifera (Lin.) in Central Massachusetts. American Midland Naturalist. , 252-256 (1976).
  28. O'Brien, C., Nez, D., Wolf, D., Box, J. B. Reproductive biology of Anodonta californiensis, Gonidea angulata, and Margaritifera falcata (Bivalvia: Unionoida) in the Middle Fork John Day River, Oregon. Northwest Science. 87 (1), 59-73 (2013).
  29. Haag, W. R., Warren, M. L. Host fishes and reproductive biology of 6 freshwater mussel species from the Mobile Basin, USA. Journal of the North American Benthological Society. 16 (3), 576-585 (1997).
  30. O'Dee, S. H., Watters, G. T. New or confirmed host identifications for ten freshwater mussels. Proceedings of the Conservation, Captive Care, and Propagation of Freshwater Mussels Symposium. , 77-82 (1998).
  31. Johnson, N. A., McLeod, J. M., Holcomb, J., Rowe, M., Williams, J. D. Early life history and spatiotemporal changes in distribution of the rediscovered Suwannee moccasinshell Medionidus walkeri (Bivalvia: Unionidae). Endangered Species Research. 31, 163-175 (2016).
  32. McLeod, J. M., Jelks, H. L., Pursifull, S., Johnson, N. A. Characterizing the early life history of an imperiled freshwater mussel (Ptychobranchus jonesi) with host-fish determination and fecundity estimation. Freshwater Science. 36 (2), 338-350 (2017).
  33. Carlson, S., Lawrence, A., Blalock-Herod, H., McCafferty, K., Abbott, S. Freshwater mussel survey protocol for the Southeastern Atlantic Slope and Northeastern Gulf drainages in Florida and Georgia. US Fish and Wildlife Service, Ecological Services and Fisheries Resources Offices and Georgia Department of Transportation, Office of Environment and Location. , Atlanta, Georgia. (2008).
  34. Waller, D. L., Rach, J. J., Cope, G. W., Miller, G. A. Effects of handling and aerial exposure on the survival of unionid mussels. Journal of Freshwater Ecology. 10 (3), 199-207 (1995).
  35. Fritts, A. K., et al. Assessment of toxicity test endpoints for freshwater mussel larvae (glochidia). Environmental Toxicology and Chemistry. 33 (1), 199-207 (2014).
  36. Christian, A. D., Monroe, E. M., Asher, A. M., Loutsch, J. M., Berg, D. J. Methods of DNA extraction and PCR amplification for individual freshwater mussel (Bivalvia: Unionidae) glochidia, with the first report of multiple paternity in these organisms. Molecular Ecology Notes. 7 (4), 570-573 (2007).
  37. Henley, W. F., Grobler, P. J., Neves, R. J. Non-invasive method to obtain DNA from freshwater mussels (Bivalvia: Unionidae). Journal of Shellfish Research. 25 (3), 975-978 (2006).
  38. ESRI. ArcGIS Desktop 10.6.1.9270. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2017).
  39. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Survey123 Field Application for ArcGIS 3.3.64. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  40. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Survey123 Connect for ArcGIS 3.3.51. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  41. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Operations Dashboard for ArcGIS. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  42. Johnson, N. A., Beaver, C. E. Empirical data supporting a non-lethal method for characterizing the reproductive status and larval development of freshwater mussels (Bivalvia: Unionida). U.S. Geological Survey data release. , (2019).
  43. Ortmann, A. E. A monograph of the naides of Pennsylvania. Memoirs of the Carnegie Museum. 8, (1919).
  44. Posey, W. R. Life History and Population Biology of the State Special Concern Ouachita Creekshell, Villosa arkansasensis (I. Lea 1862). Arkansas Game and Fish Commission. , (2007).
  45. Asher, A. M., Christian, A. D. Population characteristics of the mussel Villosa iris (Lea) (rainbow shell) in the Spring River watershed, Arkansas. Southeastern Naturalist. 11 (2), 219-239 (2012).
  46. Haag, W. R., Warren, M. L., Shillingsford, M. Host fishes and host-attracting behavior of Lampsilis altilis and Villosa vibex (Bivalvia: Unionidae). The American Midland Naturalist. 141 (1), 149-158 (1999).
  47. Roe, K. J., Hartfield, P. D. Ham,iota a new genus of freshwater mussel (Bivalvia: Unionidae) from the Gulf of Mexico drainages of the southeastern United States. Nautilus-Sanibel. 119 (1), 1-10 (2005).
  48. Williams, J. D., Butler, R. S., Warren, G. L., Johnson, N. A. Freshwater mussels of Florida. , University of Alabama Press. Tuscaloosa, AL. (2014).
  49. Jirka, K. J., Neves, R. J. Reproductive biology of four species of freshwater mussels (Molluscs: Unionidae) in the New River, Virginia and West Virginia. Journal of Freshwater Ecology. 7 (1), 35-44 (1992).
  50. Watters, G. T., O'Dee, S. H., Chordas, S. Patterns of vertical migration in freshwater mussels (Bivalvia: Unionoida). Journal of Freshwater Ecology. 16 (4), 541-549 (2001).
  51. Richardson, F., Martínez, P. Anodonta propagation studies: determination of mussel sexual maturity and Glochidia release agents. Proceedings of the Gulf and Caribbean Fisheries Institute. 48, 535-538 (2004).
  52. Heinricher, J. R., Layzer, J. B. Reproduction by individuals of a nonreproducing population of Megalonaias nervosa (Mollusca: Unionidae) following translocation. The American Midland Naturalist. 141 (1), 140-148 (1999).
  53. Watters, G. T., O'Dee, S. H. Glochidia of the freshwater mussel Lampsilis overwintering on fish hosts. Journal of Molluscan Studies. 65 (4), 453-459 (1999).
  54. Hastie, L. C., Young, M. R. Timing of spawning and glochidial release in Scottish freshwater pearl mussel (Margaritifera margaritifera) populations. Freshwater Biology. 48 (12), 2107-2117 (2003).
  55. Galbraith, H. S., Vaughn, C. C. Temperature and food interact to influence gamete development in freshwater mussels. Hydrobiologia. 636 (1), 35-47 (2009).
  56. Kobayashi, O., Kondo, T. Reproductive ecology of the freshwater pearl mussel Margaritifera togakushiensis (Bivalvia: Margaritiferidae) in Japan. Venus (Japan). 67 (3-4), 189-197 (2009).
  57. Shea, C. P., Peterson, J. T., Wisniewski, J. M., Johnson, N. A. Misidentification of freshwater mussel species (Bivalvia: Unionidae): contributing factors, management implications, and potential solutions. Journal of the North American Benthological Society. 30 (2), 446-458 (2011).

Tags

Biologi imperiled arter truede arter bevaring livshistorie glochidia gravid reproduksjon
Standardisering en ikke-dødelig metode for karakteriserer den reproduktive status og larvestadiet utvikling av ferskvann blåskjell (muslinger: Unionida)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, … More

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, N. A. Standardizing a Non-Lethal Method for Characterizing the Reproductive Status and Larval Development of Freshwater Mussels (Bivalvia: Unionida). J. Vis. Exp. (152), e60244, doi:10.3791/60244 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter