İşlevselleştirilebilir, yakın kızılötesi yayan fotolüminesan altın nanokümelerin hazırlanması ve bunların hela hücrelerinin içinde akış sitometrisi ve konfokal lazer tarama mikroskopisi ile doğrudan saptanması için güvenilir ve kolay tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.
Son on yılda, floresan altın nanokümeler (AuNcs) biyolojik uygulamalarda artan popülaritesi tanık olmuş ve büyük çabalar onların gelişimine ayrılmıştır. Bu protokolde, suda çözünür, biyouyumlu ve kolloid olarak kararlı yakın kızılötesi yayan AuNC’ların hazırlanması için yeni geliştirilmiş, kolaybir yöntem ayrıntılı olarak tanımlanmıştır. Bu oda sıcaklığı, aşağıdan yukarıya kimyasal sentez, sulu çözeltide tiyotik asit ve tiyol modifiye polietilen glikol ile kapatılan kolay işlevselauNC’lar sağlar. Sentetik yaklaşım ne organik çözücüler veya ek ligand değişimi ne de üremek için sentetik kimya geniş bilgi gerektirir. Ortaya çıkan AuNCs ücretsiz yüzey karboksilik asitler sunuyoruz, hangi auncs fotolüminesan özellikleri olumsuz etkilemeden serbest amin grubu taşıyan çeşitli biyolojik moleküller ile işlevsel olabilir. HeLa hücreleri tarafından AVuF alımının akış sitometrik nicelleştirme ve konfokal mikroskobik görüntüleme için hızlı ve güvenilir bir prosedür de tanımlanmıştır. Büyük Stokes kayması nedeniyle, AÜ’lerin yakın kızılötesi fotolüminesansının etkin bir şekilde saptanması için akış sitometrisi ve konfokal mikroskopideki filtrelerin doğru şekilde ayarlanması gereklidir.
Son on yılda, ultrasmall (≤ 2 nm) fotolüminesan altın nanokümeler (PL AuNCs) hem temel araştırma ve pratik,uygulamalar,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10için umut verici problar olarak ortaya çıkmıştır ., Onların birçok arzu özellikleri yüksek fotostabilite dahil, tunable emisyon maxima, uzun emisyon ömürleri, büyük Stokes vardiya, düşük toksisite, iyi biyouyumluluk, böbrek temizliği ve kolay biyokonjugasyon. PL AuNCs yakın kızılötesi (NIR) spektral bölgeye mavi fotolüminesans sağlayabilir, küme içindeki atomların sayısına bağlı olarak11 ve yüzey ligand12doğasına . NIR (650-900 nm) yayan AuNCs özellikle uzun vadeli in vitro ve hücre ve dokuların in vivo görüntüleme için umut verici, onlar içsel otofloresans ile minimum örtüşme nedeniyle yüksek sinyal-gürültü oranı sunuyoruz, zayıf saçılma ve emilimi, ve NIR ışık yüksek doku penetrasyonu13,14.
Son yıllarda, Au-S kovalent etkileşimleri yararlanmak çeşitli yaklaşımlar nir-PL AuNCs tiyol içeren ligands13,15,,16,17çeşitli ile kaplı hazırlamak için geliştirilmiştir. Biyomedikal uygulamalar için AuNC’ler bağlayıcı etkileşimleri kolaylaştırmak için biyolojik bir bileşenle işlevsel hale getirilmelidir. Bu nedenle, sulu çözücüde kolayca işlevsel hale getirilebilen yüksek kolloidal stabiliteye sahip AuNC’lar son derece arzu edilir. Mevcut protokolün genel amacı, tiyotik asit ve polietilen glikol (PEG) ayrıntılı olarak sulu bir ortamda istihdam ederek yüzeyde işlevselkarboksilik asit grubu ile AuNCs daha önce bildirilen18 hazırlık ve asit-amin kaplin yöntemi aşağıdaki birincil amin taşıyan moleküller ile bunların konjugasyon tanımlamaktır. Sentez kolaylığı ve yüksek tekrarlanabilirlik nedeniyle, bu protokol kimya dışı geçmişe sahip araştırmacılar tarafından kullanılabilir ve uyarlanabilir.
AuNC’lerin biyomedikal araştırmalardaki uygulamaları için en önemli gerekli durumlardan biri, hücrelerin içindeki AuNC’leri gözlemleme ve ölçme yeteneğidir. Hücreler tarafından nanopartikül alımını izlemek için mevcut yöntemler arasında, akış sitometri (FCM) ve konfokal lazer tarama mikroskopisi (CLSM) hücrelerin çok sayıda floresan nanomalzemelerin içselleştirilmesi hızlı ölçümler sağlayan sağlam, yüksek iş sahibi yöntemleri sunuyoruz19. Burada, ek boyalara gerek kalmadan hücrelerin içindeki PL AuNC’lerin doğrudan ölçümü ve analizi için FCM ve CLSM yöntemi de sunulmuştur.
NIR yayan AuNCs altın öncül çözeltisi (HAuCl4)uygun tiyol ligands ile tedavi edildi bir aşağıdan yukarıya bir yaklaşım kullanılarak sentezlenmiş, Au3 azalmatakip . Sulu çözeltideki metal iyonlarının azaltılması, ultra küçük NC’ler21yerine büyük nano partiküller ile sonuçlanma eğilimindedir. Ultra küçük (≤2 nm) PL AuNC’ları hazırlamak için, sentetik koşullar büyük parçacıkların oluşumunu önlemek ve ultra küçük kümelerin oluşumunu…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar alzbeta Magdolenova akış sitometri ile ona yardım için minnettarız. Yazarlar GACR proje Nr. 18-12533S mali destek kabul. Mikroskopi, Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu ve Çek Cumhuriyeti’nin devlet bütçesi tarafından ortaklaşa finanse edilen Konfokal ve Floresan Mikroskopi Laboratuvarı’nda gerçekleştirildi. CZ.1.05/4.1.00/16.0347 ve CZ.2.16/3.1.00/21515 ve Çek-BioImaging büyük RI projesi LM2015062 tarafından desteklenmiştir.
1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride | TCI Chemicals | D1601 | https://www.tcichemicals.com/eshop/en/eu/commodity/D1601/;jsessionid=3AD046E5389206AAE33C8AAB5036CDD6?gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYrO69K6Np3tYeSsAouqGndUvzzsy1hStBPuHG-X3cpTIsAqq9z0cDBoC76MQAvD_BwE |
Bovine serum albumin | Sigma-Aldrich | A4161 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a4161?lang=en®ion=CZ |
Disodium hydrogen phosphate dihydrate | PENTA s.r.o. | 15130-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_281.pdf |
DL-Thioctic acid, 98% | Alfa Aesar | L04711 | https://www.alfa.com/en/catalog/L04711/ |
Hydrochloric acid 35% | PENTA s.r.o. | 19350-11000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_512.pdf |
Hydrogen tetrachloroaurate(III) trihydrate, ACS, 99.99% (metals basis), Au 49.0% min | Alfa Aesar | 36400 | https://www.alfa.com/en/catalog/036400/ |
O-(2-Mercaptoethyl)-O′-methylpolyethylene glycol 2000 | Sigma-Aldrich | 743127 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/743127?lang=en®ion=CZ |
Potassium chloride | PENTA s.r.o. | 16200-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_346.pdf |
Sodium borohydride | Sigma-Aldrich | 452882 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/452882?lang=en®ion=CZ&gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYuoZKvdK_fH24F1gGugG4pamF2FFZLd36YyZmRTdGgkbm5SbyGP0jBoCoo0QAvD_BwE |
Sodium chloride | PENTA s.r.o. | 16610-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_376.pdf |
Sodium dihydrogenphosphate dihydrate | PENTA s.r.o. | 12330-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_124.pdf |
Sodium hydroxide pellets | PENTA s.r.o. | 15740-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_307.pdf |
XTT (sodium 2, 3-bis (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)-carbonyl]-2H-tetrazolium inner salt) | Thermo Fisher Scientific | X12223 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/X12223#/X12223 |