שיטה אמינה ומתוכעת בקלות להכנת הפונקציונל, הקרוב-אינפרא-אדום פולט ננו אשכולות זהב והגילוי הישיר שלהם בתוך תאי הלה על ידי הזרמת cy, ומיקרוסקופ לייזר קונפוקלית וקד מתוארת.
במהלך העשור האחרון, ננואשכולות זהב פלורסנט (אונמcs) היו עדים הפופולריות גדל ביישומים ביולוגיים ומאמצים עצומים הוקדשה התפתחותם. בפרוטוקול זה, שיטה מפותחת, שפותחה לאחרונה להכנת מסיסים במים, מתאימות ביולית ויציבה כמעט באינפרא-אדום, הנמצאות בפירוט. זו טמפרטורה החדר, מלמטה למעלה סינתזה כימית מספק בקלות פונקציונל הכתיר עם חומצה thioctic ואת thiol שונה פוליאתילן גליקול הפתרון מימית. הגישה הסינתטית אינה מצריכה ממיסים אורגניים או ליגניות או החלפת ידע נרחבת בכימיה סינתטית להתרבות. כתוצאה ממנה מציעה החברה החופשית לפני השטח, אשר ניתן לתפקד באמצעות מולקולות ביולוגיות שונות הנושאות קבוצת אמין חופשית מבלי להשפיע לרעה על המאפיינים של האוטוליומינטונים. הליך מהיר ואמין לעיבוד הקוונאוטומטריות והדמיה של מיקרוסקופים של ספיגת AuNC על ידי תאי הלה גם כן תוארו. בשל השינוי הגדול סטוקס, הגדרה נכונה של מסננים באמצעות cy, מיקרוסקופ הזרימה הנדרשת לאיתור יעיל של photoluמיניואומיורפולוגיה ליד אינפרא אדום.
בעשור האחרון, ultrasmall (≤ 2 nm) פוטולומינטאוסטרים זהב ננואשכולות (PL) הופיעו כבדיקות מבטיחות עבור מחקר בסיסי ויישומים מעשיים1,2,3,4,5,6,7,8,9,10. המאפיינים הרצויים הרבים שלהם כוללים באיכות גבוהה של פוטויציבות, פליטת מעטה מקסימה, אורך חיים של פליטה ארוכה, שינויי סטוקס גדולים, רעילות נמוכה, biocompatibility טובה, סיווג כליות וביוקוניוגציה. הארגון יכול לספק פוטוטולוי מכחול לאזור הספקטרלי הקרוב לאינפרא-אדום (ניר), בהתאם למספר האטומים בתוך האשכול11 ולאופי המשטח של ליגאן ו-12. ניר (650-900 nm) פולט האוננים מבטיחים במיוחד לטווח ארוך בתוך מבחנה ובvivo הדמיה של תאים ורקמות, כפי שהם מציעים יחס אות לרעש גבוה עקב חפיפה מינימלית עם התאמה אוטומטית פנימית, פיזור חלש וקליטה, וחדירה רקמות גבוהות של ניר אור13,14.
בשנים האחרונות פותחו גישות שונות המנצלים את מגוון האינטראקציות הקוולניות של האו, כדי להכין את ניר-PL הכתיר במגוון רחב של ליגנדס13,15,16,17. עבור יישומים ביו-רפואיים, יש לתפקד באמצעות מרכיב ביולוגי כדי להקל על אינטראקציות מחייבות. לפיכך, האתר מהווה את היציבות הגבוהה ביותר הניתן לפונקציונליות של ממסים מימית. המטרה הכוללת של הפרוטוקול הנוכחי היא לתאר את ההכנה שדווחה בעבר ב-18 הכנות של הארגון עם מכלול של חומצה בעלת פונקציונליות של החברה הקיימת על פני השטח על-ידי שימוש בחומצה thioctic ו פוליאתילן גליקול (פג) בסביבה מימית בפירוט והקוניוגתן עם מולקולות הנושאות אמין ראשי בעקבות בגלל הקלות של סינתזה והתחנון גבוהה, פרוטוקול זה יכול לשמש ומותאם על ידי חוקרים מרקע שאינו כימיה.
אחד הדרישות המרכזיות עבור יישומים של מחקר של ה-אונcs במחקר ביו-רפואי היא היכולת להתבונן ולמדוד את ה-אונcs בתאים. בין השיטות הזמינות כדי לפקח על ספיגת ננו-חלקיק על ידי תאים, זרימה cy try (fcm) ו קונפוקלית וקד לייזר סריקת מיקרוסקופ (clsm) להציע חזק, תפוקה גבוהה שיטות המאפשרות מדידות מהירות של הפנמה של ננו פלורסנט במספר גדול של תאים19. כאן, FCM ו-CLSM שיטה למדידה ישירה וניתוח של הכלא PL בתוך תאים, ללא צורך בצבעים נוספים, הוצגו גם.
ניר-פולט מסונתז באמצעות גישה מלמטה-למעלה שבה מטופלת התמיסה המקודבת הזהב (HAuCl4) עם ליגניות מתאימות, ולאחריה הפחתה של Au3 +. הפחתה של יוני מתכת בתמיסה מימית נוטים לצבור ותוצאות חלקיקים גדולים במקום באולטרסאונד NCs21. כדי להכין בדיקת אולטרה-סאונד (≤ 2 ננומטר) PL, התנאים הסינת…
The authors have nothing to disclose.
המחברים אסירי תודה על Alzbeta Magdolenova עבור עזרתה עם cy, הזרמת לזרום. המחברים מכירים בתמיכה הפיננסית מפרויקט GACR Nr. 18-12533S. המיקרוסקופיה בוצעה במעבדה של המיקרוסקופיה ומיקרוסקופית הפלואורסצנטית במימון הקרן האירופית לפיתוח האזור ותקציב המדינה של צ’כיה, פרויקטים לא. CZ. 1.05/4.1.00/16.0347 ו-CZ. 2.16/3.1.00/21515, ונתמך על-ידי הפרוייקט הצ-ביודמיה הגדולות של project LM2015062.
1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride | TCI Chemicals | D1601 | https://www.tcichemicals.com/eshop/en/eu/commodity/D1601/;jsessionid=3AD046E5389206AAE33C8AAB5036CDD6?gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYrO69K6Np3tYeSsAouqGndUvzzsy1hStBPuHG-X3cpTIsAqq9z0cDBoC76MQAvD_BwE |
Bovine serum albumin | Sigma-Aldrich | A4161 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a4161?lang=en®ion=CZ |
Disodium hydrogen phosphate dihydrate | PENTA s.r.o. | 15130-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_281.pdf |
DL-Thioctic acid, 98% | Alfa Aesar | L04711 | https://www.alfa.com/en/catalog/L04711/ |
Hydrochloric acid 35% | PENTA s.r.o. | 19350-11000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_512.pdf |
Hydrogen tetrachloroaurate(III) trihydrate, ACS, 99.99% (metals basis), Au 49.0% min | Alfa Aesar | 36400 | https://www.alfa.com/en/catalog/036400/ |
O-(2-Mercaptoethyl)-O′-methylpolyethylene glycol 2000 | Sigma-Aldrich | 743127 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/743127?lang=en®ion=CZ |
Potassium chloride | PENTA s.r.o. | 16200-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_346.pdf |
Sodium borohydride | Sigma-Aldrich | 452882 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/452882?lang=en®ion=CZ&gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYuoZKvdK_fH24F1gGugG4pamF2FFZLd36YyZmRTdGgkbm5SbyGP0jBoCoo0QAvD_BwE |
Sodium chloride | PENTA s.r.o. | 16610-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_376.pdf |
Sodium dihydrogenphosphate dihydrate | PENTA s.r.o. | 12330-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_124.pdf |
Sodium hydroxide pellets | PENTA s.r.o. | 15740-31000 | https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_307.pdf |
XTT (sodium 2, 3-bis (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)-carbonyl]-2H-tetrazolium inner salt) | Thermo Fisher Scientific | X12223 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/X12223#/X12223 |