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Artigo de método

Privação Visual Monocular e Medição de Plasticidade de Dominação Ocular no Córtex Visual Primário do Camundongo

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DOI:

10.3791/60600

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8 de fevereiro de 2020

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* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos protocolos detalhados para privação visual monocular e análise de plasticidade de dominação ocular, que são métodos importantes para estudar os mecanismos neurais da plasticidade visual durante o período crítico e os efeitos de genes específicos em desenvolvimento visual.

Resumo

A privação visual monocular é um excelente paradigma experimental para induzir a plasticidade de resposta cortical visual primária. Em geral, a resposta do córtex ao olho contralateral a um estímulo é muito mais forte do que a resposta do olho ipsilateral no segmento binóculo do córtex visual primário do camundongo (V1). Durante o período crítico dos mamíferos, suturar o olho contralateral resultará em uma rápida perda de capacidade de resposta das células V1 para estimulação ocular contralateral. Com o desenvolvimento contínuo de tecnologias transgênicas, cada vez mais estudos estão usando camundongos transgênicos como modelos experimentais para examinar os efeitos de genes específicos na plasticidade de dominação ocular (OD). Neste estudo, introduzimos protocolos detalhados para privação visual monocular e calculamos a mudança na plasticidade od no mouse V1. Após a privação monocular (MD) por 4 dias durante o período crítico, as curvas de ajuste de orientação de cada neurônio são medidas, e as curvas de ajuste da camada quatro neurônios em V1 são comparadas entre a estimulação dos olhos ipsilaterais e contralaterais. O índice de viés contralateral (ICB) pode ser calculado usando o escore ocular de OD de cada célula para indicar o grau de plasticidade od. Esta técnica experimental é importante para estudar os mecanismos neurais da plasticidade da OD durante o período crítico e para o levantamento dos papéis de genes específicos no desenvolvimento neural. A maior limitação é que o estudo agudo não pode investigar a mudança na plasticidade neural do mesmo camundongo em um momento diferente.

Introdução

A privação visual monocular é um excelente paradigma experimental para examinar a plasticidade V1. Para estudar a importância da experiência visual no desenvolvimento neural, David Hubel e Torsten Wiesel1,2 gatinhos privados de visão normal em um olho em vários pontos de tempo e por períodos variados de tempo. Eles então observaram as mudanças na intensidade de resposta em V1 para os olhos privados e não privados. Seus resultados mostraram um número anormalmente baixo de neurônios reagindo ao olho que havia sido suturado fechado nos primeiros três meses. No entanto, as respostas dos neurônios nos gatinhos perm....

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Protocolo

Neste protocolo, camundongos C57Bl/6 masculinos foram obtidos do Instituto de Animais De Laboratório da Academia de Ciências Médicas de Sichuan e do Hospital Popular Provincial de Sichuan. Todos os cuidados com animais e procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais, Universidade de Ciência Eletrônica e Tecnologia da China.

1. Privação monocular (DM) no dia pós-natal 28 em camundongos

  1. Coloque as ferramentas cirúrgicas, a agulha de sutura (0,25 mm de diâmetro, diâmetro da corda 0,07 mm) e os cotonetes de algodão em uma caixa de alumínio e autoclave-los a 120 °C por 0,5 h. Estique....

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Resultados

Os resultados experimentais aqui descritos permitem medições bem sucedidas de plasticidade de MD e OD de um rato privado e não privado durante o período crítico (P19-P32). A Figura 1 mostra como realizar gravações de unidade única na camada 4 da V1 a zona binocular para comparar respostas no olho ipsilateral e contralateral 4 dias após o MD. A Figura 2 mostra as medidas de classificação e ajuste de orientação para estimular os olhos ipsilaterais e contralaterais.......

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Discussão

Apresentamos um protocolo detalhado para MD e medindo plasticidade od por gravação de unidade única. Este protocolo é amplamente utilizado na neurociência visual. Embora o protocolo de DM não seja complicado, existem alguns procedimentos cirúrgicos críticos que devem ser seguidos cuidadosamente. Primeiro, há dois detalhes importantes garantindo a qualidade da costura. A sutura é suficientemente estável se os pontos estiverem concentrados na porção medial da pálpebra. Além disso, 3 μL de cola é aplicado na cabeça do nó pa.......

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Divulgações

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Este estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de CiênciaNatural da China (81571770, 81771925, 81861128001).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
502 colaM & Fornecedor verificado - G Chenguang Stationery Co., Ltd.
Cartão de AquisiçãoNational InstumentPCI-6250
AgaroseBiowestG-10
Amplificador A-M SystemModelo 1800
AtropinaAladdin Bio-Chem Technology Co., LtdA135946-5
Aparelho Estereotáxico CerebralRWD Life Science Co., Ltd68001
Tesoura de mola Cohan-VannasFine Science Tools15000-02
Soluções de lentes de contatoBeijing Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.Cotonetes de
algodãoGM17064 Henan Guangderun Medical Instruments Co., Ltd
Porta-agulhas finasSuZhou Stronger Medical Instruments Co., LtdCZQ1370
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.53320A
Fórceps66 Vision Tech Co., Ltd.53072
Fórceps66 Tecnologia Co. da visão, Ltd.#5
Almofada de aquecimentoStrykerTP 700 T
IluminadorMotic China Group Co., Ltd.MLC-150C
IsofluranoRWD Life Science Co., LtdR510-22
Monitor LCDPhilips (China) Investment Co., Ltd.39PHF3251 / T3
MicroscópioSOPTOPSZMT1
de sinais vitais não invasivo MicromanipuladorMouseox
NARISHIGE International Ltd.PC-5N06022
Petrolatum Eye GelDezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.17C801
Spike2Cambridge Electronic Design, Cambridge, Reino UnidoSpike2 Versão 9
Tesoura cirúrgica66 Vision Tech Co., Ltd.54010
Tesoura cirúrgica66 Vision Tech Co., Ltd.54002
agulha de suturaNingbo Medical Co., Ltd3/8 arco 2.5 * 8
eletrodo de tungstênioFHC, IncL504-01B
XylocaineHuaqing
AWG97028 Monitor hidráulico de óleo

Referências

  1. Hubel, D. H., Wiesel, T. N. Effects of monocular deprivation in kittens. Naunyn-Schmiedebergs Archiv für experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).
  2. Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. Critical....

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