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एक स्वचालित खाद्य सेवन मॉनिटरिंग सिस्टम का उपयोग करके चूहों में सुक्रोज वरीयता और नवीनता-प्रेरित हाइपोफैगिया टेस्ट

Published: May 8, 2020 doi: 10.3791/60953
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1,2,3, 1,4, 1,3
1Charité Center for Internal Medicine and Dermatology, Department for Psychosomatic Medicine, Charité-Universitätsmedizin, Corporate Member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin and Berlin Institute of Health, 2Department of Internal Medicine, Helios Clinic, 3Department of Psychosomatic Medicine and Psychotherapy, University Hospital Tübingen, 4Department of Quantitative Health Sciences, University of Massachusetts Medical School
* These authors contributed equally

Summary

यहां प्रस्तुत चूहों में अवसाद की तरह और anhedonic व्यवहार का अध्ययन करने के लिए एक प्रोटोकॉल है । यह दो अच्छी तरह से स्थापित व्यवहार विधियों, सुक्रोज वरीयता और नवीनता-प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षणों को जोड़ती है, एक स्वचालित भोजन और तरल सेवन निगरानी प्रणाली के साथ, परोक्ष रूप से सरोगेट मापदंडों का उपयोग करके कृंतक व्यवहार की जांच करने के लिए।

Abstract

अवसादग्रस्तता विकारों की व्यापकता और घटनाएं दुनिया भर में बढ़ रही हैं, जो लगभग 322 मिलियन व्यक्तियों को प्रभावित करती हैं, जो पशु मॉडलों में व्यवहार अध्ययन की आवश्यकता को रेखांकित करती हैं। इस प्रोटोकॉल में, चूहों में अवसाद की तरह और एंहेडोनिक व्यवहार का अध्ययन करने के लिए, स्थापित सुक्रोज वरीयता और नवीनता-प्रेरित हाइपोफैजिया परीक्षणों को स्वचालित भोजन और तरल सेवन निगरानी प्रणाली के साथ जोड़ा जाता है। परीक्षण से पहले, सुक्रोज वरीयता प्रतिमान में, पुरुष चूहों को नल के पानी के अलावा सुक्रोज समाधान का उपभोग करने के लिए कम से कम 2 दिनों के लिए प्रशिक्षित किया जाता है। परीक्षण के दौरान, चूहों को फिर से पानी और सुक्रोज समाधान के संपर्क में आते हैं। खपत स्वचालित प्रणाली द्वारा हर सेकंड पंजीकृत है। कुल पानी के सेवन के लिए सुक्रोज का अनुपात (सुक्रोज वरीयता अनुपात) एंहेडोनिया के लिए एक सरोगेट पैरामीटर है। नवीनता-प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण में, पुरुष चूहों को एक प्रशिक्षण अवधि से गुजरना पड़ता है जिसमें वे एक स्वादिष्ट नाश्ते के संपर्क में आते हैं। प्रशिक्षण के दौरान, कृंतक एक स्थिर बेसलाइन स्नैक का सेवन दिखाते हैं। परीक्षण के दिन, जानवरों को घर के पिंजरों से एक ताजा, खाली पिंजरे में स्थानांतरित कर दिया जाता है जो ज्ञात स्वादिष्ट नाश्ते तक पहुंच के साथ एक उपन्यास अज्ञात वातावरण का प्रतिनिधित्व करता है। स्वचालित प्रणाली कुल सेवन और उसके अंतर्निहित माइक्रोस्ट्रक्चर (उदाहरण के लिए, नाश्ते के निकट आने के लिए विलंबता), anhedonic और उत्सुक व्यवहार में अंतर्दृष्टि प्रदान रिकॉर्ड करता है। एक स्वचालित मापने प्रणाली के साथ इन प्रतिमानों का संयोजन अधिक विस्तृत जानकारी प्रदान करता है, साथ ही मापने की त्रुटियों को कम करके उच्च सटीकता के साथ । हालांकि, परीक्षण सरोगेट मापदंडों का उपयोग करते हैं और केवल अवसाद और अनहेडोनिया को अप्रत्यक्ष तरीके से चित्रित करते हैं।

Introduction

औसतन, दुनिया की आबादी का ४.४% अवसाद से प्रभावित है । ये दुनिया भर में ३२२,०००,००० लोगों के लिए खाते, दस साल पहले 1 की तुलना में18%की वृद्धि हुई है । विश्व स्वास्थ्य संगठन के अनुमानों के अनुसार, अवसाद २०२०२में विकलांगता समायोजित जीवन वर्षों की रैंकिंग में दूसरे स्थान पर होगा । भावात्मक विकारों की बढ़ती व्यापकता को संबोधित करने और नई हस्तक्षेप रणनीतियों की स्थापना के लिए, इस व्यवहार का आगे अध्ययन करना आवश्यक है। मनुष्यों में परीक्षा से पहले और इसके अलावा, पशु अध्ययन आवश्यक हैं।

अवसादग्रस्तता व्यवहार के घटकों का अध्ययन करने के लिए कई मॉडल स्थापित किए गए हैं (यानी, जबरन तैरना परीक्षण, पूंछ निलंबन परीक्षण, सुक्रोज वरीयता परीक्षण, और नवीनता-प्रेरित हाइपोफैजिया)3,,4। सुक्रोज वरीयता परीक्षण (एसपीटी) और नवीनता से प्रेरित हाइपोफैगिया (एनआईएच) जानवरों में अवसाद जैसे व्यवहार का पता लगा सकते हैं। ये परीक्षण स्वयं कृंतक में अवसाद की स्थिति को प्रेरित नहीं करते हैं लेकिन व्यवहार में तीव्र परिवर्तनों को चित्रित करते हैं। एसपीटी और एनआईएच दोनों ही अवसाद की एक विशेषता विशेषता का आकलन करते हैं जिसे एहेडोनिया के रूप में जाना जाता है, जो निम्नलिखित में रुचि की हानि है: पुरस्कृत गतिविधियां, गतिविधियां जो एक बार व्यक्तिगत5द्वारा आनंद लिया गया था, और प्रसंस्करण की जटिल घटना का एक पहलू और इनाम6का जवाब देता है। दोनों परीक्षण स्वादिष्ट भोजन के रूप में एक पुरस्कृत उत्तेजना की प्रतिक्रिया का अध्ययन करते हैं। उपभोग की सीमा 7,8,,9के लिए एक किराए के पैरामीटर के रूपमेंकार्य करती है ।

न्हेडोनिया की जांच करने वाले परीक्षणों का मूल्य दृढ़ता से पदार्थ के वजन के सटीक माप के परिणामस्वरूप खपत के सटीक निर्धारण पर निर्भर करता है। परंपरागत रूप से, यह माप परीक्षण से पहले और एक बार मैन्युअल रूप से आयोजित किया जाता है। हालांकि, यह कई कारणों से गलत माप से ग्रस्त है। सबसे पहले, कृंतक भोजन का ढेर लगाते हैं, जिसका अर्थ है कि वे तुरंत इसका उपभोग किए बिना भोजन निकालते हैं फिर इसे सुरक्षित स्थान पर छिपाते हैं। इस प्रकार, भोजन की इस हानि को कुल खपत की गणना में शामिल किया जा सकता है। दूसरा, चूहे भोजन और पानी फैलते हैं, जिसके परिणामस्वरूप संबंधित खपत के बिना वजन कम होता है। तीसरा, तरल का गैरइरादतन नुकसान बोतलों को पिंजरों से डालने और हटाने के कारण होता है।

त्रुटि के इन स्रोतों को कम करने के लिए एक दृष्टिकोण में, हमने स्वचालित भोजन और तरल सेवन निगरानी प्रणाली का उपयोग करके भोजन और पानी के सेवन की माप के साथ अनेडोनिया (एसपीटी3,,4 और एनआईएच9)का आकलन करने वाले दो सामान्य परीक्षणों को संयुक्त किया। यह प्रक्रिया स्वादिष्ट पदार्थों की खपत की सटीक जांच की अनुमति देती है और साथ ही अवसाद जैसे व्यवहार की विशेषता के रूप में चूहों में खुशी के अनुभव के बारे में जानकारी प्रदान करती है। विभिन्न दृष्टिकोणों का उपयोग करके मैनुअल माप से जुड़ी उपरोक्त त्रुटियों को कम किया जाता है, जिन्हें बाद में अधिक विस्तार से दर्शाया जाता है।

माइक्रोस्ट्रक्चर के बारे में जानकारी देने के लिए, इस प्रोटोकॉल10 में उपयोग की जाने वाली स्वचालित सेवन मॉनिटरिंग प्रणाली का वजन हर सेकंड भोजन (±0.01 ग्राम) होता है। इस प्रकार, एक स्थिर वजन को "खाने नहीं" के रूप में प्रलेखित किया जाता है, और "खाने" के रूप में एक अस्थिर वजन। एक "मुक्केबाज़ी" से पहले और एक घटना के बाद स्थिर वजन में परिवर्तन के रूप में परिभाषित किया गया है । एक भोजन में एक या अधिक मुकाबले होते हैं और चूहों में इसका न्यूनतम आकार 0.01 ग्राम के रूप में परिभाषित किया गया था। एक भोजन चूहों में एक और भोजन से 15 मिनट (मानकीकृत मूल्य) से अलग हो जाता है। इस प्रकार, भोजन का सेवन एक भोजन माना जाता है जब मुकाबले 15 मिनट के भीतर हुए और वजन में परिवर्तन ०.०१ ग्राम के बराबर या उससे अधिक है । इस प्रोटोकॉल में मूल्यांकन किए गए भोजन मापदंडों में भोजन की अवधि, भोजन में बिताया गया समय, मुक्केबाज़ी का आकार, मुक्केबाज़ी अवधि, मुकाबलों में बिताया गया समय, पहले मुक्केबाज़ी के लिए विलंबता, और मुकाबलों की संख्या शामिल है।

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Protocol

पशु देखभाल और प्रायोगिक प्रक्रियाओं ने विशिष्ट संस्थागत नैतिकता दिशानिर्देशों का पालन किया और पशु अनुसंधान के लिए राज्य प्राधिकरण द्वारा अनुमोदित किया गया ।

1. स्वचालित निगरानी प्रणाली का संचालन

नोट: स्वचालित निगरानी प्रणाली का संचालन करते समय, कार्रवाई से तुरंत पहले सॉफ्टवेयर में शामिल कमेंट बॉक्स में हर कार्रवाई को दस्तावेज़ करना महत्वपूर्ण है। विवरण को टिप्पणी बॉक्स में टाइप किया जाना चाहिए, और सेवदबाकर, इसे एक विशिष्ट समय बिंदु के साथ सहेजा जाता है। डेटा का विश्लेषण करते समय टाइमपॉइंट महत्वपूर्ण होते हैं, क्योंकि सिस्टम लगातार रिकॉर्ड करता है, और विश्लेषण के लिए ब्याज की अवधि को इंगित किया जाना चाहिए।

  1. स्वचालित निगरानी प्रणाली को स्थापित करना, उपयोग करना और बनाए रखना
    नोट: यह प्रोटोकॉल वयस्क पुरुष स्प्राग डावले चूहों का उपयोग करता है जिसका वजन 250-300 ग्राम (~ 10 सप्ताह पुराना) है। अनुकूलन अवधि के दौरान समूहों में चूहों को घर देने की सिफारिश की जाती है। पर्यावरणीय स्थितियों को निम्नलिखित मापदंडों के साथ नियंत्रित किया जाना चाहिए: 12 एच/12 एच डार्क/लाइट चक्र जिसमें 6:00 ए.M पर रोशनी, 45%-65% की आर्द्रता, और 21-23 डिग्री सेल्सियस का तापमान, और विज्ञापन लिबिटम पानी और मानक कृंतक आहार तक पहुंच। दैनिक हैंडलिंग जानवरों को जांचकर्ताओं के आदी बनने में सक्षम बनाती है।
    1. चूहों को अलग करें ताकि हर जानवर में एक अलग पिंजरे हो। सुनिश्चित करें कि प्रोटोकॉल के दौरान हर चूहा अलग रहता है।
    2. 1-2 सेमी मोटी परत के साथ नियमित बिस्तर के साथ आवास पिंजरों को भरें। यह (कम) राशि फैलाव के साथ माइक्रोबैलेंस और हॉपर के संदूषण की संभावना को कम करती है, जिससे मापने वाली त्रुटियों को कम किया जाता है। प्लास्टिक ट्यूब (उदाहरण के लिए, 8 सेमी व्यास के साथ एक प्लास्टिक ड्रेनपाइप का 20 सेमी लंबा टुकड़ा) जोड़ें और लकड़ी को संवर्धन के रूप में पीसते हैं, जबकि मापने वाली त्रुटियों को कम करने के लिए कागज के ऊतकों को छोड़ देते हैं।
    3. पिंजरों के सामने की ओर कस्टम निर्मित छेद करने के लिए माइक्रोसैलेंस के साथ दो बंद पिंजरे माउंट संलग्न करके स्वचालित ठोस और तरल भोजन सेवन माप के लिए पिंजरों तैयार करें। पिंजरे माउंट पर दो खाली हॉपर रखें, एक चाउ के लिए और एक बोतल के लिए।
      नोट: माइक्रोबैलेंस केबल के माध्यम से एक कंप्यूटर से जुड़ी रिकॉर्डिंग प्रणाली से जुड़े होते हैं और संबंधित सॉफ्टवेयर कंप्यूटर पर स्थापित होता है।
    4. रिकॉर्डिंग शुरू करने के लिए,"मॉनिटर"खोलें और"स्टार्ट" दबाएं,फिर डेटा को बचाने के लिए एक जगह चुनें।
    5. स्वचालित सेवन मॉनिटरिंग सिस्टम के अंशांकन (प्रेस"कैलिब्रेट")कार्य का उपयोग करके, हॉपर को हटाकर और शेष के साथ पिंजरे पर दो अलग-अलग गेज किए गए वजन रखकर हर संतुलन को कैलिब्रेट करें। नियमित समय अंतराल पर ऐसा करें (साप्ताहिक सिफारिश की जाती है)।
    6. चाउ (~ 100 ग्राम) के साथ पूरी तरह से एक हॉपर भरें और चाउ टुकड़े और टूटने को हटा दें जो आकार में बहुत छोटे हैं। बोतल (~ 100 एमएल) में पानी भरें और इसे दूसरे हॉपर में रखें।
    7. भोजन और पानी की स्थिति दस्तावेज़ (उदाहरण के लिए, शेष 1: खाद्य पशु 1, शेष 2: पानी पशु 1) ।
    8. चूहे को पिंजरे में रखें और पिंजरे के सभी द्वार खोलें ताकि वह विज्ञापन लिबिटमखा और पी सके।
      नोट: एक सटीक माप के लिए, बिखराव से ब्रश के साथ धीरे-धीरे सफाई और खाद्य कंटेनर से छोटे खाद्य टुकड़ों को हटाकर संतुलन और हॉपर को दैनिक बनाए रखना आवश्यक है। इससे गलत माप में काफी कमी आएगी। रोजाना मेंटेनेंस के दौरान सभी गेट बंद कर देते हैं।
  2. प्रयोगों के बाद डेटा तक पहुंचना
    1. एक अवधि (जैसे, प्रशिक्षण, परीक्षण) की शुरुआत और अंत टाइमपॉइंट्स के लिए टिप्पणी बॉक्स में खोजें जिनका विश्लेषण करने की आवश्यकता है।
    2. डाटा व्यूअर खोलने के लिए सॉफ्टवेयर पर'व्यूडेटा' पर क्लिक करें।
    3. नीचे दिए गए बक्से में टाइमपॉइंट डालें"समय शुरू करें"और"अंत समय"। जानकारी दर्ज करने वाले शेष राशि का संकेत देते हुए बाएं ऊपरी कोने में वर्ग दबा दें।
    4. माइक्रोस्ट्रक्चर डेटा तक पहुंचने के लिए'पीएससी योग'पर क्लिक करें। डेटा निर्यात करने के लिए"एक्सपोर्ट पीएससी टेबल"बटन दबाएं।
      नोट: स्वचालित निगरानी का उपयोग करके व्यक्तिगत जानवरों (उदाहरण के लिए, अनस्ट्रेस्ट बनाम स्ट्रेस्ड) के माइक्रोस्ट्रक्चर की तुलना करने के लिए, व्यक्तिगत जानवरों को बाएं ऊपरी कोने में उपयुक्त वर्ग को दबाकर"डेटा दर्शक" में चुना जा सकता है। पीएससी योग चयनित जानवर के लिए केवल माइक्रोस्ट्रक्चर दिखाता है। सांख्यिकीय विश्लेषण प्रणाली के साथ नहीं किया जा सकता है। डेटा को स्प्रेडशीट प्रोग्राम/विश्लेषण सॉफ्टवेयर में निकालने की जरूरत है ।

2. सुक्रोज वरीयता परीक्षा का कार्यान्वयन

  1. प्रशिक्षण अवधि का आयोजन
    नोट: परीक्षण से पहले, जानवरों को फाटकों के माध्यम से हॉपर पर तरल पदार्थ के लिए तरल पदार्थ के लिए दो बोतलों की उपलब्धता के आदी होना चाहिए, जबकि भोजन पिंजरों के सबसे ऊपर से प्रदान किया जाना चाहिए (सेट-अप चित्रा 1में दिखाया गया है)। यह प्रशिक्षण अवधि कम से कम 2 दिनों तक होनी चाहिए। यह कमरे में घर के पिंजरों में किया जाता है जहां जानवरों को आयोजित किया जाता है।
    1. सभी गेट बंद कर दो। पानी की बोतल और खाद्य कंटेनर को माइक्रोबैलेंस से निकालें।
    2. पिंजरे के शीर्ष पर पूर्व-तौला भोजन (~ 50 ग्राम) रखें और दैनिक भोजन की खपत का आकलन करने के लिए नियमित रूप से संतुलन का उपयोग करके दैनिक अपने वजन को दस्तावेज करें। यदि आवश्यक हो तो फिर से भरें।
    3. साफ पानी के साथ एक बोतल साफ और पानी के लगभग 100 एमएल के साथ फिर से भरना। इसे वापस हॉपर पर रखें।
    4. हौसले से बने 1% सुक्रोज समाधान के 100 एमएल के साथ एक दूसरी साफ बोतल भरें। इसे हॉपर पर रखें।
      नोट: बोतलों को ध्यान से चिह्नित करें और उनके स्थानों को दस्तावेज़ करें (उदाहरण के लिए, शेष 1: जल पशु 1, शेष 2: सुक्रोज समाधान पशु 1)।
    5. सभी गेट खोलें। निगरानी प्रणाली में प्रशिक्षण की शुरुआत दस्तावेज़। फाटकों को 24 घंटे के लिए खुला छोड़ दें, जिसके परिणामस्वरूप दोनों बोतलों तक विज्ञापन लिबिटम पहुंच गया है। 24 घंटे के बाद, फाटक बंद करें और प्रशिक्षण के अंत का दस्तावेजीकरण करें। 24 घंटे के अंतराल के डेटा को"प्रारंभ समय"और"अंतसमय" डालने के द्वारा स्वचालित निगरानी प्रणाली का उपयोग करके मूल्यांकन किया जा सकता है। 1 एच परीक्षण अंतराल का आकलन किए जाने पर प्रक्रियाएं समान होती हैं।
    6. साफ करें और हर 24 घंटे बोतलों को फिर से भरें। रोजाना 1% सुक्रोज सॉल्यूशन फ्रेश तैयार करें। आदत प्रभाव से बचने के लिए पानी और सुक्रोज समाधान बोतल की स्थिति को दैनिक रूप से स्विच करें।
      नोट: वरीयता अनुपात ~ 1 तक पहुंचने तक कम से कम 48 घंटे में सभी जानवरों में प्रशिक्षण का संचालन करें। "डेटादर्शक"का उपयोग करके प्रशिक्षण के बाद सीधे सुक्रोज वरीयता अनुपात का मूल्यांकन किया जाता है। इसकी गणना समग्र सेवन (पानी से अधिक सुक्रोज सेवन) के लिए सुक्रोज सेवन के अनुपात के रूप में की जाती है।
    7. परीक्षण से पहले 24 घंटे, सुक्रोज समाधान के साथ बोतल को हटा दें ताकि चूहे में केवल मानक चाउ और पानी तक पहुंच हो।
    8. नल के पानी से भरी एक ताजा बोतल तैयार करें और 1% सुक्रोज समाधान से भरा एक ~ 100 एमएल के साथ।
    9. परीक्षण से पहले, सभी फाटकों को बंद करें।
    10. हॉपर से नल के पानी से भरी बोतल निकालें और दो ताजा बोतलें रखें, एक नल के पानी से भरा और एक 1% सुक्रोज समाधान से भरा, हॉपर पर।
    11. सभी गेट खोलें, निगरानी प्रणाली में परीक्षण की शुरुआत का दस्तावेजीकरण करें। गेट 60 मिनट के लिए खुला छोड़ दें। 60 मिनट के बाद फाटक बंद करें और परीक्षण के अंत को दस्तावेज़ करें।
    12. आंकड़ों का आकलन करें (उदाहरण के लिए, सुक्रोज/कुल तरल पदार्थ का सेवन अनुपात)।
      नोट: परीक्षण के बीच में प्रशिक्षण के अंतराल (कम से कम 2 दिन) के साथ कई बार दोहराया जा सकता है।

3. नवीनता से प्रेरित हाइपोफैजिया परीक्षण का कार्यान्वयन

  1. प्रशिक्षण अवधि का आयोजन
    नोट: परीक्षण से पहले, 5 दिनों की दैनिक 30 मिनट की प्रशिक्षण अवधि की सिफारिश की जाती है (सेट-अप चित्रा 2में दिखाया गया है)। इसका उद्देश्य प्रयोग से पहले स्वादिष्ट नाश्ते के सेवन की एक स्थिर आधार रेखा प्राप्त करना है। यह कमरे में घर के पिंजरों में किया जाता है जहां जानवरों को आयोजित किया जाता है।
    1. सभी फाटकों को बंद करें और मानक चाउ के साथ हॉपर को हटा दें।
    2. स्वादिष्ट नाश्ते (~ 50 ग्राम) के साथ एक ताजा हॉपर भरें। टूटने से रोकने के लिए हॉपर में सावधानी से पटाखे डालें। माइक्रोबैलेंस के शीर्ष पर पिंजरे माउंट पर हॉपर रखें।
    3. 30 मिनट के लिए फाटक खोलें ताकि चूहे को नाश्ते और पानी तक विज्ञापन लिबिटम पहुंच हो। निगरानी प्रणाली में प्रशिक्षण की शुरुआत दस्तावेज़।
      नोट: चूहे प्रशिक्षण अवधि के दौरान मानक चाउ के लिए कोई उपयोग नहीं होना चाहिए ।
    4. 30 मिनट के बाद फाटक बंद करें और निगरानी प्रणाली में प्रशिक्षण के अंत दस्तावेज़। नाश्ते को मानक चाउ से बदलें।
    5. 1) स्थिर बेसलाइन स्वादिष्ट स्नैक का सेवन प्राप्त होने तक इसे दैनिक दोहराएं (उदाहरण के लिए, 1.5-2.0 ग्राम/30 मिनट) और 2) सेवन सांख्यिकीय रूप से प्रशिक्षण दिनों के बीच भिन्न नहीं होता है।
  2. नवीनता से प्रेरित हाइपोफैजिया परीक्षण का प्रदर्शन
    1. स्वचालित खाद्य सेवन निगरानी प्रणाली से जुड़े बिस्तर या संवर्धन के बिना एक खाली, हौसले से साफ पिंजरे तैयार करें। पिंजरे माउंट पर एक स्वादिष्ट नाश्ते के साथ नल के पानी और हॉपर की एक बोतल के साथ एक हॉपर रखें।
      नोट: उपन्यास पिंजरे को उसी कमरे में रखा जाना चाहिए जहां चूहों को आयोजित किया जाता है और प्रशिक्षण आयोजित किया जाता है। गेट बंद रखें।
    2. घर के पिंजरे से चूहा निकालें और उपन्यास पिंजरे में रखें।
    3. 30 मिनट के लिए सभी फाटक खोलें। निगरानी प्रणाली में परीक्षण की शुरुआत दस्तावेज़।
      नोट: नाश्ते तक पहुंच के 30 मिनट के दौरान, नाश्ते के सेवन और अंतर्निहित माइक्रोस्ट्रक्चर मापदंडों (जैसे, पहले भोजन के लिए विलंबता) का आकार स्वचालित भोजन सेवन निगरानी प्रणाली का उपयोग करके दर्ज किया जाता है।
    4. 30 मिनट के बाद फाटक बंद करें और परीक्षण के अंत को दस्तावेज़ करें। चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें।
      नोट: परीक्षण के बीच में प्रशिक्षण के अंतराल (कम से कम 5 दिन) के साथ कई बार दोहराया जा सकता है।

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Representative Results

डाटा डिस्ट्रीब्यूशन को परखने के लिए कोल्मोगोरोव-स्मिनोव टेस्ट का इस्तेमाल किया गया । टी-टेस्ट का इस्तेमाल तब किया गया जब डेटा को सामान्य रूप से वितरित किया गया और मान-व्हिटनी-यू टेस्ट का इस्तेमाल किया गया, अगर नहीं । एक तरह से ANOVA Tukey पोस्ट-हॉक परीक्षण के बाद आम तौर पर वितरित कई समूह तुलना के लिए इस्तेमाल किया गया था । एक तरह से ANOVA डन के कई तुलना परीक्षण के बाद गैर सामांय वितरण के मामलों में इस्तेमाल किया गया था । जब पी एंड एलटी; 0.05 में समूहों के बीच मतभेदों को महत्वपूर्ण माना गया था।

इस अध्ययन में भोले चूहों पर एसपीटी किया गया। सुक्रोज समाधान की खपत बढ़ गई और प्रशिक्षण अवधि(चित्र 3)में पानी का सेवन कम हो गया। प्रशिक्षण के पहले दिन चूहों ने 24.40 एमएल ± 3.48 एमएल सुक्रोज सॉल्यूशन(चित्रा 3ए)और 4.83 एमएल ± 0.89 एमएल नियमित पानी(चित्रा 3बी)पिया, जिससे 0.80 ± 0.06(चित्रा 3C)का सुक्रोज वरीयता अनुपात प्राप्त हुआ। प्रशिक्षण के दूसरे दिन, चूहों ने 4.49 एमएल ± 33.77 mL तक सुक्रोज समाधान की खपत में वृद्धि की (महत्वपूर्ण नहीं, पी = 0.17 बनामदिन 1) और 0.42 एमएल ± 0.13 एमएल(पी एंड एलटी; 0.001 बनामदिन 1) तक पानी का सेवन कम हुआ, जिसके परिणामस्वरूप 0.99 ± 0.004(पी एंड एलटी; 0.05 बनामदिन 1; चित्रा 3C)। यहां आठ चूहों का अध्ययन किया गया; इस प्रकार, प्रत्येक डेटापॉइंट आठ जानवरों से प्राप्त होता है। इसके माइक्रोस्ट्रक्चर सहित तरल पदार्थ का सेवन स्वचालित रूप से दर्ज किया गया था। डेटा दर्शक का उपयोग कर पीएससी योग से डेटानिकाला गया था ।

60 मिनट के परीक्षण के दौरान, जानवरों ने पानी का उपभोग किए बिना 0.99 ± 0.66 (एन =8) के मतलब मूल्य ± के साथ 0-6.18 एमएल सुक्रोज समाधान के बीच खपत की। परीक्षण के दौरान किसी भी तरल का उपभोग नहीं करने वाले जानवरों को विश्लेषण से बाहर रखा गया था। आठ चूहों का अध्ययन किया गया। तरल पदार्थ का सेवन स्वचालित रूप से दर्ज किया गया था।

स्वचालित सेवन मॉनिटरिंग सिस्टम ने परीक्षण के दौरान स्वचालित रूप से मूल्यांकन किए गए सुक्रोज सेवन माइक्रोस्ट्रक्चर के बारे में डेटा प्रदान किया, जो डेटा दर्शकका उपयोग करके पीएससी योग से निकाले गए थे। ये पैरामीटर थे भोजन का आकार(चित्रा 4A),भोजन की अवधि(चित्रा 4B),सेकंड में भोजन में बिताया गया समय(चित्रा 4C)और प्रतिशत(चित्रा 4D),भोजन आवृत्ति(चित्रा 4E),पहले भोजन के लिए विलंबता(चित्रा 4 एफ,इंटर-मील इंटर(चित्रा 4जी),पीने की दर(चित्रा 4H),मुक्केबाज़ी अवधि(चित्रा 4I),मुक्केबाज़ी का आकार(चित्रा 4J),और सेकंड में मुकाबलों में बिताया गया समय(चित्रा 4K)और प्रतिशत(चित्रा 4L)।

स्वचालित सेवन मॉनिटरिंग सिस्टम के फायदों का आगे अध्ययन करने के लिए, ऊपर दिए गए डेटा की तुलना पारंपरिक मैनुअल आकलन (प्रशिक्षण/परीक्षण अवधि, तालिका 1के पहले और बाद में मैन्युअल रूप से बोतलों का वजन) का उपयोग करके प्राप्त डेटा से की गई थी । प्रशिक्षण के पहले दिन, सुक्रोज(पी एंड एलटी; 0.01) और पानी का सेवन(पी एंड एलटी; 0.01) काफी अधिक था जब स्वचालित रूप से मैन्युअल रूप से मूल्यांकन किया गया था। प्रशिक्षण के दूसरे दिन, पानी का सेवन(पी एंड एलटी; 0.001) और सुक्रोज वरीयता अनुपात(पी एंड एलटी; 0.01) दोनों समूहों के बीच और परीक्षण के दौरान भिन्न था। सभी पैरामीटर, नामत सुक्रोज सेवन(पी एंड एलटी; 0.001), पानी का सेवन(पी एंड एलटी; 0.001), और सुक्रोज वरीयता अनुपात(पी एंड एलटी; 0.001) समूहों के बीच अलग थे, संभवतः गलती से उच्च माप या बिखराव के कारण जब मैन्युअल रूप से मूल्यांकन किया जाता है।

प्रशिक्षण के दौरान स्वादिष्ट नाश्ते का कुल सेवन तेजी से बढ़ा: 0.48 ग्राम ± 0.14 ग्राम (दिन 1), 1.05 ग्राम ± 0.32 ग्राम (दिन 2), 1.48 ग्राम ± 0.56 ग्राम (दिन 3), 1.1 ग्राम ± 0.39 ग्राम (दिन 4), और 1.91 ग्राम ± 0.68 ग्राम (दिन 5), पहले 2-3 दिनों के दौरान अनुकूलन का संकेत देता है। इसी तरह, भोजन का आकार प्रशिक्षण के दिनों(चित्रा 5A, पी = 0.12) के बीच वृद्धि की ओर बढ़ा, जबकि भोजन की अवधि(चित्रा 5B)(पी और जीटी; 0.05) नहीं थी। इसी तरह, भोजन में बिताए गए समय(चित्रा 5C),पहले मुक्केबाज़ी के लिए विलंबता(चित्रा 5D),मुक्केबाज़ी का आकार(चित्रा 5E),मुक्केबाज़ी अवधि(चित्रा 5F),मुकाबलों में बिताए गए समय(चित्रा 5G)और मुकाबलों की संख्या(चित्रा 5H)जैसे अन्य सूक्ष्मसंरचना पैरामीटर इन दिनों(पी एंड जीटी; 0.05) के बीच काफी अलग नहीं थे । आठ चूहों का अध्ययन किया गया; इस प्रकार, प्रत्येक डेटापॉइंट आठ जानवरों से प्राप्त होता है। माइक्रोस्ट्रक्चर सहित नाश्ते का सेवन अपने आप दर्ज हो गया। डेटा दर्शक का उपयोग कर पीएससी योग से डेटानिकाला गया था ।

परीक्षण के दिन, भोले चूहों एक उपन्यास वातावरण में नाश्ते के संपर्क में ०.९८ ग्राम ± ०.३४ ग्राम(चित्रा 6A)के स्वादिष्ट नाश्ते का सेवन दिखाया । परीक्षण के दिन भोजन के सेवन माइक्रोस्ट्रक्चर के मापदंड, जिनमें भोजन की अवधि(चित्रा 6 बी),भोजन में बिताया गया समय(चित्रा 6 सी),पहले मुक्केबाज़ी के लिए विलंबता(चित्रा 6डी),मुक्केबाज़ी का आकार(चित्रा 6E),मुक्केबाज़ी अवधि(चित्रा 6F), मुकाबलों में बिताए गए समय(चित्रा 6G),और मुकाबलों की संख्या(चित्रा 6एच),स्वचालित रूप से मूल्यांकन किया गया और डेटा दर्शकका उपयोग कर पीएससी कुल से निकाला गया ।

नवीनता-प्रेरित हाइपोफेगिया परीक्षण की विशिष्टता का अध्ययन करने के लिए, भोले और अस्टेन्रेस्ड चूहों से ऊपर वर्णित डेटा की तुलना उन लोगों से की गई थी जिन्हें कॉर्टिकोट्रोपिन-रिलीजिंग फैक्टर का इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर इंजेक्शन प्राप्त हुआ था, जो हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-एड्रेनल स्ट्रेस एक्सिस को उत्तेजित करता है और तनाव और चिंता11को प्रेरित करता है। प्रोटोकॉल अनुभाग में वर्णित"डेटा दर्शक"और"पीएससी योग"का उपयोग करके प्रत्येक जानवर के लिए व्यक्तिगत डेटा प्राप्त किया गया था। व्यक्तिगत डेटा तो एक स्प्रेडशीट कार्यक्रम में समूहों के अनुसार इकट्ठा किया गया था और सांख्यिकीय मतभेदों के लिए विश्लेषण किया । दोनों समूहों(तालिका 2)के बीच भोजन के आकार(पी एंड एलटी; 0.01) और मुक्केबाज़ी आकार(पी एंड एलटी; 0.01) में एक महत्वपूर्ण अंतर का पता चला। मुक्केबाज़ी के आकार में अंतर मैनुअल मूल्यांकन का उपयोग कर पता लगाने योग्य नहीं होता ।

Figure 1
चित्रा 1: सुक्रोज वरीयता परीक्षण का सेट-अप। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: नवीनता से प्रेरित हाइपोफैजिया परीक्षण का सेट-अप। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्र 3: सुक्रोज वरीयता परीक्षण के लिए प्रशिक्षण अवधि। सुक्रोज घोल(ए)और पानी(बी)की खपत 2 दिनों के लिए 24 घंटे से अधिक आंकी गई थी। सुक्रोज वरीयता अनुपात(सी)की गणना तदनुसार की गई थी। डेटा को आठ चूहों (पी एंड एलटी; 0.05, ***पी एंड एलटी; 0.001) से मतलब ± एसईएम के रूप में प्रस्तुत किया जाता है।p कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: सुक्रोज वरीयता परीक्षण। परीक्षण के दिन, तरल सेवन माइक्रोस्ट्रक्चर (यहां, सुक्रोज सेवन के लिए दिखाया गया) शामिल भोजन के आकार(ए),भोजन अवधि(बी),भोजन में बिताए गए समय(सी),भोजन की संख्या(डी),भोजन की संख्या(ई),पहले भोजन के लिए विलंबता(एफ),अंतर-भोजन अंतराल(जी),पीने की दर(एच),मुक्केबाज़ी अवधि(मैं),मुक्केबाज़ी का आकार(जे),एस(कश्मीर)में मुकाबलों में बिताए गए समय के लिए 1 घंटे से अधिक का विश्लेषण किया गया था, और %(एल)में मुकाबलों में बिताए गए समय (एल) डेटा को मतलब ± एसईएम, एन = 8 चूहों के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्र 5: नवीनता प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण के लिए प्रशिक्षण अवधि। भोजन का आकार(ए),भोजन अवधि(बी),एस(सी)में भोजन में बिताए गए समय, पहले मुक्केबाज़ी के लिए विलंबता(डी),मुक्केबाज़ी का आकार(ई),मुक्केबाज़ी अवधि(एफ),मुकाबलों में बिताए गए समय(जी),और मुकाबलों की संख्या (एच) का आकलन 5 दिनों की अवधि में किया गया था । डेटा को मतलब ± एसईएम, एन = 8 चूहों के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6: नवीनता-प्रेरित हाइपोफैजिया परीक्षण। परीक्षण के दिन, भोजन का सेवन माइक्रोस्ट्रक्चर शामिल भोजन के आकार (ए), भोजन की अवधि (बी), भोजन में बिताए गए समय (सी), पहले मुक्केबाज़ी के लिए विलंबता (डी), मुक्केबाज़ी आकार (ई), मुक्केबाज़ी अवधि (एफ), मुकाबलों में बिताए गए समय (जी) और मुकाबलों की संख्या (एच) के लिए 1 घंटे से अधिक का विश्लेषण किया गया था । डेटा को मतलब ± एसईएम, एन = 8 चूहों के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

प्राचल मैन्युअल मूल्यांकन स्वचालित सेवन मॉनिटरिंग
प्रशिक्षण अवधि (दिन 1)
सुक्रोज सेवन (एमएल) 63.46 ± 10.2 24.4 ± 3.48 **
पानी का अकांव (एमएल) 12,07 ± 1,62 4.83 ± 0.89 **
सुक्रोज वरीयता अनुपात 0.83 ± 0,03 0.8 ± 0.06
प्रशिक्षण अवधि (दूसरा दिन)
सुक्रोज सेवन (एमएल) 45,49 ± 5,75 33.77 ± 4.49
पानी का अकांव (एमएल) 4.92 ± 0,80 0.42 ± 0.13 ***
सुक्रोज वरीयता अनुपात 0.89 ± 0.02 0.99 ± 0.004 **
सुक्रोज वरीयता परीक्षण
सुक्रोज सेवन (एमएल) 10.15 ± 0.53 2.91 ± 0.66 ****
पानी का अकांव (एमएल) 6.65 ± 0.68 0 ***
सुक्रोज वरीयता अनुपात 0.61 ± 0.04 0.99 ± 0.001 ***

तालिका 1: मैनुअल मूल्यांकन बनाम स्वचालित सेवन मॉनिटरिंग सिस्टम का उपयोग करके भोले चूहों में सुक्रोज वरीयता परीक्षण।. डेटा का वितरण कोल्मोगोरोव-स्मिनोव परीक्षण का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। डेटा ± के वितरण के आधार पर टी-टेस्ट या मान-व्हिटनी यू परीक्षण (* पी< 0.05, **पी एंड एलटी; 0.01, ***पी एंड एलटी; 0.001 बनाममैनुअल मूल्यांकन) के वितरण के आधार पर टी-टेस्ट या मान-व्हिटनी यू परीक्षण का उपयोग करके डेटा को मतलब के रूप में व्यक्त किया जाता है।p 

प्राचल अडिग जोर दिया
(n=8) (n=11)
भोजन का आकार (जी/300ग्राम बीडब्ल्यू) 0.98 ± 0.29 0.35 ± 0.07 **
भोजन की अवधि (सेकंड) 998.29 ± 163.87 1209.11 ± 114.67
भोजन में बिताया गया समय (सेकंड) 998.29 ± 163.87 989.27 ± 174.73
भोजन में बिताया गया समय (%) 55.46± 9.10 54.96 ± 9.71
पहले मुक्केबाज़ी के लिए विलंबता (सेकंड) 241.25 ± 45.96 185.50 ± 57.52
मुक्केबाज़ी आकार (जी) 0.21 ± 0.03 0.08 ± 0.01 **
मुक्केबाज़ी अवधि (सेकंड) 70.70 ± 14.12 45.59 ± 4.20
मुकाबलों में बिताया गया समय (सेकंड) 439.75 ± 125.94 208.73 ± 45.01
मुकाबलों में बिताया गया समय (%) 24.43 ± 7.00 11.6 ± 2.50
मुकाबलों (संख्या) 5.63 ± 0.67 4.64 ± 0.80

तालिका 2: भोले अस्टेस्टेसेड और तनावग्रस्त (सीआरएफ-इंजेक्शन) चूहों में नवीनता-प्रेरित हाइपोफैजिया परीक्षण। तनाव समूह में, icv-cannulated चूहों ०.६ μg/5 μL CRF के साथ इंजेक्शन और नवीनता के अधीन बाद में हाइपोफैगिया प्रेरित किया गया । डेटा का वितरण कोल्मोगोरोव-स्मिनोव परीक्षण का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। डेटा के वितरण के आधार पर टी-टेस्ट या मान-व्हिटनी यू टेस्ट का उपयोग करके मतभेदों का विश्लेषण किया गया । बेहतर तुलनीयता के लिए, सभी डेटा को एसईएम (**पी एंड एलटी; 0.01 बनाम अनस्ट्रेस्ट) के± के रूप में व्यक्त किया जाता है।

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Discussion

सुक्रोज वरीयता और नवीनता से प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण चूहों में एंहेडोनिया के मूल्यांकन के लिए दो स्थापित तकनीक हैं। स्वचालित खाद्य सेवन निगरानी प्रणाली के साथ उनका संयोजन अव्यवस्थित चूहों में अधिक विस्तृत विश्लेषण के लिए अनुमति देता है और गलत माप को कम करता है।

त्रुटियों की घटनाओं को विभिन्न दृष्टिकोणों से कम कर दिया जाता है । सबसे पहले, बिखराव के कारण होने वाली त्रुटि को संबोधित करने के लिए, खाद्य हॉपर और गेट के बीच अंतर एकीकृत ट्रे पर गिरने के लिए पीसने के दौरान उत्पन्न टुकड़ों की अनुमति देता है । पिंजरे माउंट पर इस बिखराव को इकट्ठा करके, उन्हें माप में शामिल किया जाता है (चूंकि बिखराव अभी भी शेष पर है, इसलिए यह माप को प्रभावित नहीं करता है)। दूसरा, होर्डिंग को रोकने के लिए, चूहा पिंजरे माउंट खोलने के लिए काफी बड़ा है जानवर खोलने के अंदर अपने सिर के साथ भोजन हॉपर से खाने के लिए अनुमति देते हैं, लेकिन काफी छोटे जानवर के लिए अपने हाथों का उपयोग करते हुए खाने की क्षमता को सीमित करने के लिए । यह भोजन को हटाने और पिंजरे में लाने की उनकी क्षमता को सीमित करता है।

तीसरा, प्रणाली तरल के गैरइरादतन नुकसान को कम कर देती है क्योंकि तरल बोतल, भड़काना के बाद, रिसाव नहीं होता है, और वाष्पीकरण सटीक स्टेनलेस स्टील की गेंद/सिपर ट्यूब इंटरफेस पर केवल धीरे से (लगभग & 10 मिलीग्राम/एच) होता है । इसके अतिरिक्त, क्योंकि सिस्टम बोतलों को स्वचालित रूप से तौलता है, रिकॉर्डिंग के दौरान बोतलों की हैंडलिंग आवश्यक नहीं है, जो त्रुटियों का एक आम कारण है। मैन्युअल और स्वचालित माप(तालिका 1) के बीच तुलना में देखे गए अंतर बोतलों की मैन्युअल हैंडलिंग के दौरान गैरइरादतन हानि के कारण होने की आशंका है।

स्वचालित खाद्य सेवन निगरानी प्रणाली का उपयोग कई फायदे प्रदान करता है, जैसे ठोस और तरल भोजन के सेवन का विस्तृत विश्लेषण और अंतर्निहित भोजन सेवन माइक्रोस्ट्रक्चर10का आकलन। "माइक्रोस्ट्रक्चर" शब्द अधिक विस्तार से भोजन या तरल पदार्थ के सेवन के पैटर्न का वर्णन करता है। एक स्वचालित सेवन निगरानी प्रणाली के बिना अध्ययनों में, सेवन ब्याज की एक समय बिंदु की शुरुआत और अंत में भोजन/तरल पदार्थ वजन द्वारा मापा जाता है । इस दृष्टिकोण से प्राप्त एकमात्र जानकारी एक निश्चित अवधि में कुल खपत है।

इसके विपरीत, स्वचालित निगरानी प्रणाली इस अवधि के दौरान खपत के बारे में अधिक जानकारी प्रदान करती है, क्योंकि यह हर सेकंड माइक्रोबैलेंस के वजन में परिवर्तन रिकॉर्ड करता है। रिकॉर्डिंग विस्तार कर सकते हैं जब कृंतक खाने लगता है, यह कितनी बार खाता है, यह कितनी देर तक खाता है, यह कितना खाता है, खाने के बीच ब्रेक कितनी देर तक होता है, आदि। मैनुअल माप का उपयोग कर स्वचालित प्रणाली के समान डेटा प्राप्त करने के लिए, उपयोगकर्ताओं को परीक्षण/प्रशिक्षण के दौरान अक्सर सामग्री को मापने के लिए और इस तरह काफी जानवरों को परेशान करना होगा । स्वचालित प्रणाली के साथ, कृंतक प्रशिक्षण सत्रों और परीक्षण के दौरान अशान्त रहते हैं।

कृंतक के लिए उपलब्ध स्वचालित सेवन प्रणालियों की बड़ी संख्या को ध्यान में रखते हुए, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि यहां वर्णित प्रोटोकॉल के लिए किसी निर्दिष्ट मॉडल की आवश्यकता नहीं है। हालांकि यह व्यवस्था काफी संवेदनशील है। पर्यावरण शोर (निम्न स्तर कंपन या पैमाने पर द्रव्यमान के झटकों) के कारण त्रुटियों से बचने के लिए, सिस्टम का एल्गोरिदम दूसरे-दूसरे आधार पर एकत्र किए गए मूल्यों का मूल्यांकन करता है, और यह केवल उन लोगों को स्वीकार करता है जो औसत 10 मूल्यों के लिए "शोर" के लिए एक निर्धारित बिंदु से नीचे हैं। यदि सिस्टम इस शोर सीमा से अधिक है, तो मूल्यों का उपयोग स्थिर वजन की गणना करने के लिए नहीं किया जाता है, जिसका उपयोग भोजन के मुकाबलों की गणना करने के लिए किया जाता है।

परीक्षणों के निष्पादन के संबंध में, कई महत्वपूर्ण बिंदुओं को ध्यान में रखा जाना चाहिए । सभी व्यवहार परीक्षण दिन के एक ही समय में किए जाने चाहिए, क्योंकि सर्कैडियन परिवर्तन जानवरों के व्यवहार को प्रभावित कर सकते हैं12,,13। अधिकांश अध्ययन प्रकाश चरण के दौरान व्यवहार परीक्षण करते हैं, जबकि यहां, अंधेरे चरण के दौरान सभी परीक्षण किए गए थे। कृंतक रात्रिभोज जानवर होते हैं और इसलिए अंधेरे चरण में सक्रिय होते हैं, जबकि वे प्रकाश चरण के दौरान कम अन्वेषणात्मक गतिविधि13 के साथ सोते हैं या कम सक्रिय12 होते हैं। इस प्रकार, अंधेरे फोटो अवधि के दौरान व्यवहार परीक्षण अधिक शारीरिक रूप से प्रमाणित होता है।

यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि सुक्रोज वरीयता परीक्षण के लिए, सुक्रोज समाधान की विभिन्न सांद्रता का उपयोग किया गया है, जिसमें 0.5%-10%4,,7,,14से लेकर। वे मुख्य रूप से प्रजातियों, तनाव, लिंग, और उंर के आधार पर चुना जाता है, लेकिन विशेष रूप से प्रशिक्षण के दौरान मनाया पीने के व्यवहार के आधार पर (सभी जानवरों के उपचार से पहले लगभग एक ही राशि पीना चाहिए/ हालांकि, उच्च सांद्रता (जैसे, 10%) एंहेडोनिया ओवरराइड कर सकते हैं, क्योंकि अवसाद जैसे व्यवहार वाले जानवर भी अभी भी बहुत मीठे तरल पदार्थ पीते हैं4.

इसके अतिरिक्त, उच्च सांद्रता के कारण उच्च गरमी सामग्री सुक्रोज समाधान के लिए वरीयता को अधिक प्रमुखता से प्रभावित कर सकती है। इसलिए, इस प्रोटोकॉल के लिए 1% सुक्रोज समाधान चुना गया था। कुछ अध्ययन किसी भी गरमी प्रभाव से बचने के लिए सुक्रोज15 के बजाय सैकरिन के उपयोग की सलाह देते हैं। हालांकि,% सुक्रोज समाधान की खपत की मात्रा की औसत गरमी सामग्री (1% सुक्रोज समाधान के 2 ग्राम में 0.08 किलो कैलोरी शामिल है) मानक चाउ (2 ग्राम में 7.8 किलो कैलोरी शामिल है) की समान मात्रा की तुलना में काफी कम है। इस प्रकार, यह बिंदु गौण लगता है।

यह भी ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि स्वचालित खाद्य सेवन निगरानी प्रणाली का उपयोग करके यहां मूल्यांकन किया गया बेसलाइन सुक्रोज वरीयता अनुपात पिछले अध्ययनों की तुलना में अधिक है (चूहों में 0.7 के साथ8,युवा वयस्क चूहों में 0.8, 0.6 वृद्ध पुरुष स्प्राग डावले चूहों में16)। यह बोतलों की हैंडलिंग के कारण हो सकता है, क्योंकि पारंपरिक वजन की संभावना पिंजरों से डालने और हटाने के दौरान तरल पदार्थ की हानि का कारण बनती है। यह तालिका 1 में दिखाए गए परिणामों से और अधिक प्रमाणित होता है। इसलिए, स्वचालित निगरानी प्रणाली का उपयोग एंहेडोनिया का पता लगाने के लिए अधिक अनुकूल हो सकता है, जबकि भोजन के सेवन के भोजन के अनुदोनिक पहलुओं की आगे उत्तेजना छत प्रभाव के कारण याद किया जा सकता है ।

नवीनता-प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण के संबंध में, चूहों को परीक्षण करने से पहले स्वादिष्ट नाश्ते के सेवन के लिए एक स्थिर आधार रेखा विकसित करने की अनुमति देना महत्वपूर्ण है। केवल जब चूहों के भीतर और बीच में एक स्थिर आधार रेखा तक पहुंच जाता है तो वास्तविक परीक्षण किया जाना चाहिए। अन्यथा, हस्तक्षेप (यानी दवा, तनाव, आदि) के प्रभाव छूट सकते हैं, या बेसलाइन के उतार-चढ़ाव का गलत अर्थ निकाला जा सकता है। यह सुनिश्चित करना भी महत्वपूर्ण है कि उपन्यास पिंजरे में एक नवीनता तनाव पैदा होता है जिसके परिणामस्वरूप हाइपोफैगिया होता है। हालांकि कई प्रोटोकॉल का सुझाव है कि एक नए पिंजरे का उपयोग अपने आप में पर्याप्त है, हमने देखा है कि पिंजरों से पहले इस्तेमाल नहीं किया, लेकिन बिस्तर और संवर्धन युक्त तनाव प्रेरित करने में विफल हो सकता है, क्योंकि चूहों अक्सर साप्ताहिक पिंजरे की सफाई के लिए उपयोग किया जाता है/ इसलिए, एक खाली, नए पिंजरे का उपयोग किया जाना चाहिए। चूंकि प्री-टेस्ट फूड के सेवन से भी परिणाम प्रभावित हो सकते हैं, इसलिए टेस्ट से पहले खाने के सेवन पर नजर रखी जानी चाहिए । इसे आसानी से ऑटोमेटेड तरीके से किया जा सकता है।

साहित्य में, अवसाद जैसे व्यवहार के विभिन्न पहलुओं का आकलन करने के लिए विभिन्न वैकल्पिक परीक्षणों का उपयोग किया जाता है (अक्सर अनहेडोनिया के बजाय निराशा); हालांकि, इस पांडुलिपि के भीतर सचित्र तरीकों के कई फायदे हैं। अवसाद की तरह व्यवहार के हिस्से के रूप में व्यवहार निराशा का आकलन करने के लिए आमतौर पर उपयोग की जाने वाली एक वैकल्पिक विधि4जबरन तैरना परीक्षण है। इसके द्वारा, किसी भी भोजन की खपत का मूल्यांकन नहीं किया जाता है; इस प्रकार, अशुद्धि को मापने का कोई खतरा नहीं है।

इस प्रोटोकॉल में कई अन्य नुकसान हैं। हाल ही में एक समीक्षा में निष्कर्ष निकाला गया कि मजबूर तैरना परीक्षण एक परीक्षण है जो वास्तव में तनाव का मुकाबला करने की रणनीतियों को मापता है और अवसाद की तरह व्यवहार नहीं करता है17। इसके अलावा, यदि पशु कल्याण के "तीन आर" के अनुसार जानवरों की संख्या को कम करने के लिए एक क्रॉसओवर डिजाइन को प्राथमिकता दी जाती है, तो जबरन तैरने का परीक्षण लागू नहीं किया जा सकता है, क्योंकि यह परीक्षण किए गए जानवरों के व्यवहार पर लंबे समय तक चलने वाला (आघात) प्रभाव डाल सकता है18।

इसके विपरीत, एसपीटी और एनआईएच दोनों के पास कोई आघात पहलू नहीं है और इसे दोहराया जा सकता है। इसके अलावा, ध्यान दें, एसपीटी और NIH से पहले प्रशिक्षण चरण खपत के लिए एक आदत स्थापित; इसलिए, प्रोटोकॉल को दोहराना संभव है। परीक्षण के बाद, स्वादिष्ट भोजन (सुक्रोज समाधान या नाश्ता) हटा दिया जाता है, और परीक्षण के बाद प्रशिक्षण लगभग 24 घंटे फिर से शुरू किया जाता है; इस प्रकार, कृंतक के पास स्वादिष्ट उत्तेजना तक पहुंच के बिना एक ब्रेक होता है। यह माना जाता है कि ब्रेक के बाद, अनुकूलन के साथ एक नई प्रशिक्षण अवधि लगभग 1 की वरीयता अनुपात सुनिश्चित करने के लिए होनी चाहिए या परीक्षणों को दोहराने से पहले एक स्थिर बेसलाइन स्नैक का सेवन हासिल किया जाता है।

मजबूर तैरना परीक्षण के समान एक परीक्षण पूंछ निलंबन परीक्षण, एक अल्पकालिक और अपरिहार्य तनाव अवधि है जिसमें जानवरों को उनकी पूंछ से निलंबित कर दिया जाता है और अवसाद की तरह व्यवहार19के संकेत के रूप में व्याख्या की एक स्थिर आसन विकसित करता है । इस परीक्षण का उपयोग केवल चूहों में किया जा सकता है, क्योंकि चूहों को उच्च औसत वजन20के कारण उनकी पूंछ से निलंबित नहीं किया जाना चाहिए, जबकि एसपीटी और एनआईएच का उपयोग चूहों और चूहों दोनों में किया जा सकता है।

इस पांडुलिपि में प्रस्तुत परीक्षणों के आगे के फायदे यह हैं कि नवीनता-प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण अच्छी निर्माण वैधता प्रदर्शित करता है; इसलिए, यह अपने दावों को अच्छी तरह सेउपाय 21,22. नतीजतन, उपभोग किए गए स्वादिष्ट पदार्थ की मात्रा एंहेडोनिया की तीव्रता से संबंधित है, जो अन्य व्यवहार परीक्षणों के साथ एसपीटी और एनआईएच परिणामों के अनुरूप पुष्टि करता है12। इसके अतिरिक्त, दोनों सुक्रोज वरीयता परीक्षण और नवीनता प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण में अच्छे चेहरे की वैधता है। उन्हें व्यक्तिपरक रूप से मापने के रूप में देखा जाता है कि क्या इरादा है (यहां, न्हेडोनिया को स्वादिष्ट पदार्थों के कम सेवन के रूप में मूल्यांकन किया गया है)21,,22।

स्वचालित सेवन निगरानी प्रणाली की प्रमुख सीमाएं उचित प्रशिक्षण और दैनिक रखरखाव/प्रणाली की सफाई के लिए आवश्यकताएं हैं, जो इसे मैनुअल प्रोटोकॉल की तुलना में श्रम-प्रधान बनाती है । पिछले प्रयोगों10में, यह देखा गया है कि हालांकि युवा चूहे स्वचालित प्रणाली के अनुकूल होते हैं, लेकिन पुराने चूहे कभी-कभी नहीं होते हैं। उन जानवरों को स्पष्ट रूप से प्रयोग से बाहर रखा जाना चाहिए ।

व्यवहार परीक्षण की सीमाओं के बारे में, यह उल्लेख किया जाना चाहिए कि प्रशिक्षण भी समय लेने वाली है, विशेष रूप से NIH । इसके अतिरिक्त, प्रोटोकॉल दोनों अल्पकालिक हैं, और दीर्घकालिक आवेदन कुपोषण का कारण बन सकता है। इस प्रकार अब तक, साहित्य भुखमरी के राज्यों में इन परीक्षणों के उपयोग की रिपोर्ट नहीं करता है (उदाहरण के लिए, एनोरेक्सिया नर्वोसा के लिए एक मॉडल, आमतौर पर अवसाद के लक्षणों से जुड़े एक भोजन विकार), इसलिए भुखमरी के राज्यों के लिए उनके उपयोग की कोई सिफारिश नहीं है।

इस प्रोटोकॉल के साथ, यह पता लगाना संभव है कि क्या एहेडोनिया (तरल पदार्थ/नाश्ते का कम सेवन) है या नहीं। हालांकि, यह विशेष रूप से अनेदोनिया की डिग्री की मात्रा निर्धारित करने में सक्षम नहीं है। भविष्य में, विभिन्न सुक्रोज सांद्रता के साथ कई बोतलों की शुरूआत anhedonia को और अधिक मात्रा में निर्धारित करने के लिए एक संभावित इसके अतिरिक्त हो सकता है। कुल मिलाकर, स्वचालित सेवन निगरानी का उपयोग किसी भी प्रयोग में उपयोगी हो सकता है जहां सेवन का सटीक पता लगाना आवश्यक है, जैसे दवा अध्ययन के लिए पीने के पानी में भंग दवा के मौखिक सेवन की निगरानी करके।

संक्षेप में, सुक्रोज वरीयता परीक्षण और नवीनता-प्रेरित हाइपोफैगिया परीक्षण कृंतक में अवसाद जैसे व्यवहार के एक हिस्से के रूप में एंहेडोनिया का आकलन करने के लिए अच्छी तरह से स्थापित प्रोटोकॉल हैं। जब स्वचालित खाद्य सेवन निगरानी प्रणाली के साथ संयुक्त, यहां तक कि सूक्ष्म मतभेदों को एक विश्वसनीय और दोहराने योग्य फैशन में पता लगाया जा सकता है ।

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Disclosures

एएस ए एंड आर बर्लिन, बोहरिंगर-इंगलहेम, टेकडा और श्वाबे के लिए सलाहकार हैं। हितों का कोई टकराव मौजूद नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (STE 1765/3-2) और Charité विश्वविद्यालय धन (UFF 89/441-176, एएस) के वित्तपोषण द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Assembly LH Cage Mount - RAT-FOOD - includes Stainless cage mount, hopper, blocker, coupling Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BCMPRF01
Assembly LH Cage Mount unplugged - RAT - FOOD includes stainless steel cage mount, hopper, blocker, unplugged adapter, coupling Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BCMUPRF01
cage w/ 2 openings - RAT - costum modified cage - includes cage top and standard water bottle Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BCR02 single housing
Data collection Laptop Windows - Configured w/ BioDAQ Software Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BLT003
enrichment (plastic tubes, gnawing wood) distributed by the animal facility
HoneyMaid Graham Cracker Crumbs Nabisco, East Hanover, NJ, USA ASIN: B01COWTA98 palatable snack for NIH test
low vibration polymer rack Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BRACKR
male Sprague Dawley rats Envigo Order Code: 002
Model #2210 32x Port BioDAQ Central Controller - includes cables, and calibration kit Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BCC32_03
Peripheral sensor Controller - includes cable Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BPSC01
SigmaStat 3.1 Systat Software, San Jose, CA, USA statistical analysis
Stainless steel blocker Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA BBLKR
standard rodent diet with 10 kcal% fat Research Diets, Inc., Jules Lane, New Brunswick, NJ, USA D12450B
sucrose powder Roth 4621.1 for SPT

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References

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Schalla, M. A., Kühne, S. G., Friedrich, T., Hanel, V., Kobelt, P., Goebel-Stengel, M., Rose, M., Stengel, A. Sucrose Preference and Novelty-Induced Hypophagia Tests in Rats using an Automated Food Intake Monitoring System. J. Vis. Exp. (159), e60953, doi:10.3791/60953 (2020).

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