यह प्रोटोकॉल अवशोषण वोल्टेज-संवेदनशील रंगों और एक फोटोडिओड सरणी का उपयोग करके गैर-ट्रांसजेनिक अकशेरुकी प्रजातियों में एकल-कोशिका संकल्प के साथ न्यूरोनल जनसंख्या गतिविधि इमेजिंग के लिए एक विधि प्रस्तुत करता है। यह दृष्टिकोण एक तेजी से कार्यप्रवाह को सक्षम बनाता है, जिसमें इमेजिंग और विश्लेषण को एक ही दिन के दौरान आगे बढ़ाया जा सकता है।
ट्रांसजेनिक अकशेरुकी तैयारी का विकास जिसमें न्यूरॉन्स के निर्दिष्ट सेट की गतिविधि को रिकॉर्ड किया जा सकता है और प्रकाश के साथ हेरफेर किया जा सकता है, व्यवहार के तंत्रिका आधार के अध्ययन के लिए एक क्रांतिकारी अग्रिम का प्रतिनिधित्व करता है। हालांकि, इस विकास का एक नकारात्मक पक्ष जांचकर्ताओं को “डिजाइनर” जीवों (जैसे, सी एलिगेंस और ड्रोसोफिला)की एक बहुत छोटी संख्या पर ध्यान केंद्रित करने की प्रवृत्ति है, संभावित रूप से कई प्रजातियों में तुलनात्मक अध्ययनों की खोज को नकारात्मक रूप से प्रभावित करता है, जो नेटवर्क फ़ंक्शन के सामान्य सिद्धांतों की पहचान करने के लिए आवश्यक है। वर्तमान लेख दिखाता है कि कैसे गैर-ट्रांसजेनिक गैस्ट्रोपॉड प्रजातियों के दिमाग में वोल्टेज-संवेदनशील रंगों के साथ ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग का उपयोग तेजी से किया जा सकता है (यानी, एकल प्रयोगों के समय पाठ्यक्रम के भीतर) एकल-सेल संकल्प के साथ उनके तंत्रिका नेटवर्क के कार्यात्मक संगठन की विशेषताओं को प्रकट करता है। हम कई गैस्ट्रोपोड प्रजातियों के सीएनएस में व्यवहार रूप से प्रासंगिक मोटर कार्यक्रमों के दौरान दर्जनों से ~ 150 न्यूरॉन्स तक कार्रवाई संभावित निशान प्राप्त करने के लिए हमारी प्रयोगशाला द्वारा उपयोग किए जाने वाले विच्छेदन, धुंधला और रिकॉर्डिंग विधियों को विस्तार से रेखांकित करते हैं, जिसमें न्यूरोसाइंस के लिए एक नया – न्यूडिब्रांच बर्गिया स्टेफनी। इमेजिंग अवशोषण वोल्टेज के प्रति संवेदनशील रंगों और एक 464-तत्व फोटोडिओड सरणी के साथ किया जाता है जो 1,600 फ्रेम/सेकंड पर नमूने, रिकॉर्ड किए गए न्यूरॉन्स द्वारा उत्पन्न सभी कार्रवाई क्षमताओं को पकड़ने के लिए पर्याप्त तेजी से। कई कई मिनट की रिकॉर्डिंग तैयारी के अनुसार प्राप्त किया जा सकता है जिसमें कोई सिग्नल ब्लीचिंग या फोटोटॉक्सीसिटी नहीं है। वर्णित तरीकों के माध्यम से एकत्र किए गए कच्चे ऑप्टिकल डेटा का बाद में विभिन्न सचित्र तरीकों के माध्यम से विश्लेषण किया जा सकता है। हमारे ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग दृष्टिकोण आसानी से गैर ट्रांसजेनिक प्रजातियों की एक किस्म में नेटवर्क गतिविधि की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, यह अच्छी तरह से कैसे दिमाग व्यवहार उत्पंन के तुलनात्मक अध्ययन के लिए अनुकूल बना रही है ।
ड्रोसोफिला और सी एलिगेंस जैसे अकशेरुकी लाइनों की ट्रांसजेनिक लाइनों के विकास ने शक्तिशाली प्रणालियां प्रदान की हैं जिनमें व्यवहार के तंत्रिका ठिकानों को ऑप्टिकल रूप से पूछताछ और हेरफेर किया जा सकता है। हालांकि, इन विशेष तैयारियों में गैर-ट्रांसजेनिक प्रजातियों के तंत्रिका सर्किट अध्ययन के लिए उत्साह को कम करने का नकारात्मक पक्ष हो सकता है, विशेष रूप से तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान में नई प्रजातियों की शुरुआत के संबंध में। विशेष रूप से एक या दो मॉडल प्रणालियों पर ध्यान केंद्रित करना नेटवर्क फ़ंक्शन के सामान्य सिद्धांतों की खोज के लिए हानिकारक है, क्योंकि तुलनात्मक अध्ययन एक आवश्यक मार्ग का प्रतिनिधित्व करते हैं जिसके द्वारा ऐसे सिद्धांतों की खोज की जाती है1,2,3,4। यहां हमारा उद्देश्य तंत्रिका नेटवर्क समारोह के तुलनात्मक अध्ययन को सुविधाजनक बनाने के प्रयास में गैस्ट्रोपॉड तंत्रिका नेटवर्क की कार्यात्मक संरचना में तेजी से अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए बड़े पैमाने पर इमेजिंग दृष्टिकोण प्रदर्शित करना है।
एपलिसिया, लिमनिया, ट्राइटोनिया, प्लूरेब्रांचिया और अन्य जैसे गैस्ट्रोपॉड मोलस्क का उपयोग लंबे समय से तंत्रिका नेटवर्क फ़ंक्शन के सिद्धांतों की जांच करने के लिए किया जाता है, क्योंकि उनके व्यवहार बड़े, अक्सर व्यक्तिगत रूप से पहचाने जाने योग्य न्यूरॉन्स द्वारा मध्यस्थता किए जाते हैं, जिससे वे रिकॉर्डिंग तकनीकों के लिए आसानी से सुलभ हो जाते हैं5। 1 9 70 के दशक में, प्लाज्मा झिल्ली में एकीकृत कर सकने वाले वोल्टेज-संवेदनशील रंग (वीएसडी) विकसित किए गए थे जो जल्द ही कई न्यूरॉन्स6द्वारा उत्पन्न एक्शन क्षमता की पहली इलेक्ट्रोड-मुक्त रिकॉर्डिंग को सक्षम करते थे। यहां, हम गैस्ट्रोपोड्स की कई प्रजातियों में नेटवर्क गतिविधि की जांच करने के लिए वीएसडी के अपने उपयोग को प्रदर्शित करते हैं, जिसमें न्यूरोसाइंस के लिए एक नया, बर्गिया स्टेफनी शामिलहै। इमेजिंग डिवाइस एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध 464-तत्व फोटोडिओड सरणी (पीडीए) है जो 1,600 फ्रेम/सेकंड(चित्रा 1)पर नमूने है, जो तेजी से अवशोषित वीएसडी के साथ उपयोग किए जाने पर, सभी रिकॉर्ड किए गए न्यूरॉन्स7की कार्रवाई क्षमता का पता चलता है। सभी डायोड द्वारा दर्ज किए गए संकेतों को अधिग्रहण के तुरंत बाद प्रदर्शित किया जाता है और पीडीए अधिग्रहण सॉफ्टवेयर में गैंगलियन की छवि पर आरोपित किया जाता है, जिससे एक ही तैयारी8, 9में तेज इलेक्ट्रोड के साथ ब्याज के न्यूरॉन्स की जांच करना संभव होजाताहै।
कच्चे पीडीए डेटा में, कई डायोड अनावश्यक रूप से बड़े न्यूरॉन्स रिकॉर्ड करते हैं, और कई में कई न्यूरॉन्स से मिश्रित संकेत भी होते हैं। एक टर्निंग पॉइंट स्वतंत्र घटक विश्लेषण का उपयोग करके एक स्वचालित स्पाइक-छंटाई विधि का विकास था जो प्रत्येक कच्चे 464-चैनल पीडीए डेटा को तेजी से ट्रेस के एक नए सेट में सेट करता है, जिसमें हर दर्ज किए गए न्यूरॉन एक अलग ट्रेस में दिखाई देता है जिसमें सिर्फ इसकी कार्रवाई क्षमता10,11होती है।
इस लेख में हम एक फोटोडिओड सरणी और तेजी से अवशोषित वीएसडी के साथ गैस्ट्रोपॉड तंत्रिका तंत्र से बड़े पैमाने पर कार्रवाई संभावित रिकॉर्डिंग प्राप्त करने में शामिल आवश्यक कदमों की रूपरेखा तैयार करते हैं। इसके अलावा हम विश्लेषणात्मक तरीकों को चित्रित करते हैं जिन्हें उनके कार्यात्मक कलाकारों के संबंध में ऑप्टिकल रूप से दर्ज न्यूरॉन्स को क्लस्टर और मैपिंग के लिए नियोजित किया जा सकता है, और जनसंख्या-स्तर की विशेषताओं की विशेषता है जो अक्सर फायरिंग के सरल निरीक्षण के माध्यम से स्पष्ट नहीं होते हैं12,13।
हमारे बड़े पैमाने पर वीएसडी इमेजिंग दृष्टिकोण को लागू करने में सबसे महत्वपूर्ण विवरणों में से एक कंपन को कम करना है, जो डायोड में विपरीत किनारों के आंदोलनों का उत्पादन करता है, जिसके परिणामस्वरूप बड़े विरूपण साक्ष्य संकेत होते हैं। क्योंकि अवशोषण VSDs कार्रवाई क्षमता के साथ प्रकाश तीव्रता में बहुत छोटे प्रतिशत परिवर्तन का उत्पादन, कंपन कलाकृतियों, अगर रोका नहीं, ब्याज के न्यूरोनल संकेतों अस्पष्ट कर सकते हैं । हम कंपन कलाकृतियों को कम करने के लिए कई तरीकों को नियोजित करते हैं। सबसे पहले, हमारा इमेजिंग रूम भूतल पर स्थित है, जो हवा से निपटने के उपकरण और कई अन्य स्रोतों के निर्माण से संबंधित कंपन से तैयारी को अलग करता है। दूसरा, एक स्प्रिंग-आधारित आइसोलेशन टेबल का उपयोग किया गया था, जिसे अन्य पीडीए उपयोगकर्ताओं ने पुष्टि की है कि अधिक आम एयर टेबल16की तुलना में बेहतर कंपन गीला होता है। तीसरा, जल विसर्जन उद्देश्यों का उपयोग किया गया था, जो सतह की लहर से उत्पन्न छवि के उतार-चढ़ाव को समाप्त करते हैं। चौथा, तैयारी को चित्रित किया जा रहा है हल्के से चैंबर कवरस्लिप नीचे और एक कवरस्लिप टुकड़ा ऊपर से नीचे दबाया है कि सिलिकॉन प्लग या पेट्रोलियम जेली द्वारा जगह में आयोजित किया जाता है, आगे तैयारी को स्थिर के बीच दबाया गया था । यह गैंगलियन या गैंगलिया की उत्तल सतह को भी सपाट कर देता है, जिसके परिणामस्वरूप उद्देश्य के फोकस के विमान में अधिक न्यूरॉन्स होते हैं, जो दर्ज न्यूरॉन्स की संख्या को बढ़ाते हैं।
एक कार्रवाई क्षमता के परिणामस्वरूप VSD प्रकाश अवशोषण की डिग्री में बहुत छोटे परिवर्तनों के लिए सिग्नल-टू-शोर अनुपात को अधिकतम करने के लिए, पीडीए को तैयारी के माध्यम से लगभग संतृप्त प्रकाश प्राप्त करना आवश्यक है, जबकि एक ही समय में डाई के फोटोब्लैचिंग को कम करना। इस उद्देश्य के लिए, हम आम तौर पर प्रकाश तीव्रता आराम के 3-4 वी पर काम करते हैं, जैसा कि 1x स्थिति में पीडीए नियंत्रण पैनल गेन स्विच के साथ मापा जाता है (पीडीए के 464 एम्पलीफायर प्रकाश के 10 वी पर संतृप्त होते हैं)। डेटा अधिग्रहण के दौरान यह लाभ कारक 100x में बदल जाता है। पीडीए द्वारा मापा गया 3-4 वी तक पहुंचने के लिए पर्याप्त प्रकाश प्राप्त करना कई तरीकों से पूरा किया जा सकता है। सबसे पहले, एक अल्ट्राब्राइट एलईडी प्रकाश स्रोत का उपयोग करें जो उपयोग में अवशोषण डाई के अवशोषण गुणों के लिए उपयुक्त तरंगदैर्ध्य प्रदान करता है। तदनुसार, 735-एनएम एलईडी कोलिमेटेड लैंप का उपयोग किया गया था, जो आरएच 155 और आरएच 482 के इष्टतम अवशोषण तरंगदैर्ध्य के साथ ओवरलैप होता है। दूसरा, यदि आवश्यक हो, तो एक फ्लिप-टॉप सबस्टेज कंडेनसर का उपयोग करें जो एलईडी प्रकाश स्रोत से प्रकाश को छोटे क्षेत्र में केंद्रित करता है। तीसरा, कोहलर रोशनी को प्राप्त करने के लिए कंडेनसर ऊंचाई को समायोजित करें, जो उच्च, यहां तक कि चमक और अधिकतम छवि गुणवत्ता सुनिश्चित करता है। चौथा, सुनिश्चित करें कि ऑप्टिकल पाथवे में कोई हीट फिल्टर नहीं है, जो एलईडी लैंप के 735-एनएम तरंगदैर्ध्य को कम कर सकता है। पांचवां, ऑप्टिकल पाथवे से, यदि अधिक प्रकाश की आवश्यकता है, तो डिफ्यूजर निकालें। छठा, उच्च-एनए उद्देश्यों का उपयोग करें, जो उच्च स्थानिक संकल्प प्रदान करते हैं, और कम दीपक तीव्रता पर पीडीए तक पहुंचने के लिए पर्याप्त स्तर की रोशनी की अनुमति देते हैं। इसने हमें इस हद तक फोटोब्लैचिंग को कम करने की अनुमति दी है कि हम सभी फाइलों में एक ही प्रकाश तीव्रता का उपयोग करके और सिग्नल आयाम के महत्वपूर्ण नुकसान या फिर से धुंधला करने की आवश्यकता के बिना तैयारी के प्रति 10-20 मिनट की अवधि की कई अधिग्रहण फाइलें प्राप्त कर सकते हैं। महत्वपूर्ण रूप से, यदि प्रयोगकर्ता इन लंबी फ़ाइलों में न्यूरॉन्स को ट्रैक करना चाहता है, तो यह सुनिश्चित करें कि फोकल प्लेन नहीं बदलता है, और तैयारी आगे नहीं बढ़ती है। अंत में, पीडीए के लिए पर्याप्त प्रकाश मार्ग करने के लिए एक अतिरिक्त तरीका छोटे जानवरों, जो पतले है, और इस तरह कम अपारदर्शी गैंगलिया का उपयोग करने के लिए है ।
समय-समय पर हम पाते हैं कि ऑप्टिकल संकेतों का सिग्नल-टू-शोर अनुपात खराब हो जाता है और/या मोटर प्रोग्राम लय उप-क्षातिमल (जैसे, धीमी या असामान्य) हैं । जब यह लगातार होना शुरू होता है, तो हम वीएसडी के ताजा समाधानों को मिलाते हैं। वीएसडी के अलीकोट आमतौर पर -20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में लगभग 6 महीने तक व्यवहार्य रहते हैं। संबंधित रूप से, यह ध्यान देने योग्य है कि बर्गियाके लिए, अब तक अवशोषण वीएसडी आरएच 482 के साथ सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त किए गए हैं। चूंकि आरएच 482 आरएच 155 की तुलना में अधिक लिपोफिलिक है, इसलिए यह बर्गियाके तुलनात्मक रूप से छोटे न्यूरॉन्स को बेहतर ढंग से दाग सकता है या इस उष्णकटिबंधीय प्रजातियों के लिए उपयोग किए जाने वाले उच्च रिकॉर्डिंग खारे तापमान पर अधिक प्रभावी ढंग से न्यूरोनल झिल्ली में रह सकता है।
पीडीए की एक सीमा-तंत्रिका गतिविधि की इमेजिंग आधारित 100x प्रीएम्प्लिफिकेशन चरण से पहले हार्डवेयर में वोल्टेज संकेतों के एसी युग्मन से संबंधित है: हालांकि यह इस तकनीक के लिए आवश्यक उच्च आराम प्रकाश स्तर द्वारा उत्पादित बड़े डीसी ऑफसेट को हटाने के लिए एक आवश्यक सुविधा का प्रतिनिधित्व करता है, पीडीए के लिए आंतरिक एसी युग्मन झिल्ली क्षमता में धीमी गति से परिवर्तन के माप को रोकता है, जैसे सिनैप्टिक इनपुट से जुड़े। यदि धीमी या स्थिर-राज्य संभावित परिवर्तनों को रिकॉर्ड करना वांछित है, तो डीसी-युग्मित सीएमओएस कैमरा इमेजिंग सिस्टम का उपयोग उपथरहोल्ड गतिविधि को कैप्चर करने के लिए किया जा सकता है। बायर्न और उनके सहयोगियों ने हाल ही में आरएच155 के साथ इस तरह के सेटअप का उपयोग एपलिसिया17,18के बुक्कल गैंगलियन में न्यूरॉन्स की गतिविधि को चित्रित करने के लिए किया था। हम दोनों प्रणालियों का इस्तेमाल किया है और पाया कि CMOS कैमरा, डिटेक्टरों के अपने बहुत अधिक घनत्व (१२८ x १२८) के कारण, एक ही इमेजिंग समय7के लिए 50x बड़ा डेटा फ़ाइलें उत्पन्न करता है । पीडीए की छोटी फाइलें तेजी से प्रसंस्करण और विश्लेषण की सुविधा प्रदान करते हैं। यह विस्तारित एकल परीक्षण रिकॉर्डिंग(चित्रा 4)और सीखने के अध्ययन को भी सक्षम बनाता है, जिसमें कई परीक्षणों के डेटा को स्पाइक-सॉर्टिंग से पहले एक बड़ी फ़ाइल में परिवर्तित किया जाता है, जिससे नेटवर्क संगठन को ट्रैक किया जा सकता है क्योंकि सीखनेमें 19विकसित होता है।
अन्य कैमरा आधारित जांचों में, फ्लोरोसेंट वीएसडी का उपयोग क्रिस्टन और सहयोगियों द्वारा जोंक के सेगमेंटल गैंगलिया में नेटवर्क फंक्शन की जांच करने के लिए किया गया है । एक प्रभावशाली अध्ययन में इससे जानवर के तैरने या20क्रॉल करने के निर्णय में शामिल न्यूरॉन की पहचान हुई। एक अन्य अध्ययन में, क्रिस्टन एट अल ने जांच की कि जोंक की तैराकी और रेंगने वाले व्यवहार बहुआयामी बनाम समर्पित सर्किट21से प्रेरित हैं। हाल ही में, वैगननार और उनके सहयोगियों ने वोल्टेज इमेजिंग के लिए दो तरफा माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जो उन्हें एक जोंक सेगमेंटल गैंगलियन22में लगभग सभी न्यूरॉन्स से रिकॉर्ड करने की अनुमति देता है। कई कैमरा आधारित इमेजिंग विधियों के विपरीत, हमारे पीडीए-आधारित इमेजिंग विधि का एक लाभ आईसीए द्वारा तेजी से और निष्पक्ष स्पाइक-छंटाई है, जो अंधा स्रोत अलगाव का एक रूप है जिसमें परिणाम प्रसंस्करण के लिए न्यूरोनल सीमाओं के बारे में कोई निर्णय शामिल नहीं है।
वीएसडी की पसंद के संबंध में, अवशोषित रंगों का एक लाभ आरएच 155 और आरएच 482 उनके साथ23, 24से जुड़ा थोड़ा-से-कोई फोटोटॉक्सीसिटी है, जो फ्लोरोसेंटवीएसडीकी तुलना में लंबे समय तक रिकॉर्डिंग समय को सक्षम करता है। इसके अलावा, हमारे द्वारा उपयोग किए जाने वाले तेजी से अवशोषित वीएसडी गैस्ट्रोपॉड तैयारी में ओवरशूटिंग दैहिक कार्रवाई क्षमता को रिकॉर्ड करने के लिए अच्छी तरह से अनुकूल हैं, जो आमतौर पर आयाम में 80 एमवी होते हैं। जैसा कि चित्र 3जीमें दिखाया गया है, हमारी ऑप्टिकल विधि कार्रवाई क्षमता अंडरशूट रिकॉर्ड कर सकती है (हमारी कोई भी रिकॉर्डिंग ट्रेस-औसत नहीं है): इससे पता चलता है कि हम जिन वीएसडी का उपयोग करते हैं, वे अन्य मॉडल प्रणालियों में कार्रवाई क्षमता को समझने में सक्षम होना चाहिए जो कुछ हद तक क्षीण होते हैं और इस प्रकार वे सोमा तक पहुंचने के समय तक ओवरशूटिंग नहीं करते हैं। फिर भी, हमारा ऑप्टिकल दृष्टिकोण उन प्रजातियों के लिए आदर्श नहीं हो सकता है जो सोमा में दर्ज होने पर अत्यधिक तनु वाली कार्रवाई क्षमता प्रदर्शित करने के लिए जानी जाती हैं।
तंत्रिका नेटवर्क पर बहुत वर्तमान अनुसंधान डिजाइनर ट्रांसजेनिक प्रजातियों की एक छोटी संख्या पर ध्यान केंद्रित किया जा रहा है । हालांकि, तंत्रिका विज्ञान को विभिन्न प्रकार की फाइटो आनुवंशिक रूप से अलग प्रजातियों के अध्ययन से लाभ होता है। कई अलग – अलग प्रजातियों का अध्ययन करने से यह जानकारी होती है कि सर्किट25,26कैसे विकसित होते हैं और नेटवर्क कार्य के सिद्धांतों को रोशन करते हैं जो फिला 1 ,2,3 ,4,27में आम हो सकते हैं । हमने अब तक कई गैस्ट्रोपोड प्रजातियों के लिए अपनी इमेजिंग विधि लागू की है, जिनमें एपलिसिया कैलिफोर्निका8,11,12, 13,14,28, ट्राइटोनिया डायोमेडिया8,9,11,14,19,28, ट्रिटोनिया फेस्टिवा28, Pleurobranchaea californica (अप्रकाशित डेटा), और सबसे हाल ही में Berghia stephanieae (चित्रा 5)। इस दृष्टिकोण की एक अपील यह है कि इसे कई प्रजातियों पर आसानी से लागू किया जा सकता है, जिसमें ट्रांसजेनिक जानवरों की कोई आवश्यकता नहीं है। हम यह स्वीकार करना चाहते हैं कि तेजी से अवशोषित रंगों और पीडीए के साथ वीएसडी इमेजिंग का हमारा उपयोग अग्रणी कार्य के नक्शेकदम पर चलता है जिसने इसे अर्ध-अक्षुण्ण, नवांक्स29 और एपलिसिया30 तैयारी का व्यवहार किया। हमारे दृष्टिकोण की तेजी पर हमारा जोर चिंताओं का जवाब है कि कई जांचकर्ता इस आशंका के कारण नई प्रजातियों में नेटवर्क अध्ययन शुरू करने में तेजी से अनिच्छुक हो सकते हैं कि तंत्रिका विज्ञानकेलिए व्यापक रुचि के वैज्ञानिक प्रश्नों का पता लगाने में सक्षम होने से पहले बुनियादी नेटवर्क संगठन की विशेषता के लिए अध्ययन के वर्षों के लिए आवश्यक होगा । तदनुसार, हमारा लक्ष्य यहां एक तकनीक प्रदर्शित करना है जो प्रक्रिया को बहुत गति देता है – इस बिंदु पर कि नेटवर्क संगठन में महत्वपूर्ण समान-दिन की अंतर्दृष्टि एकल तैयारी से प्राप्त की जा सकती है।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को एनएसएफ 1257923 और एनआईएच 1U01NS10837 ने सपोर्ट किया । लेखक प्रयोगशाला में जीन वांग की सहायता को स्वीकार करना चाहते हैं ।
Achromat 0.9 NA swing condenser | Nikon | N/A | |
Bipolar temperature controller | Warner Instruments | CL-100 with SC-20 | Controls perfusion saline temperature |
Chamber thermometer | Physitemp | BAT-12 with IT-18 microprobe | |
Digital camera | Optronics | S97808 | |
Dissecting forceps | Dumont | #5 | |
Dissecting scissors | American Diagnostic Corp. | ADC-3410Q | |
Imaging microscope | Olympus | BX51WIF | |
Imaging perfusion chamber | Siskiyou | PC-H | |
Instant Ocean | Instant Ocean | SS6-25 | Makes 25 gallons at a time |
Master-8 pulse stimulator | A.M.P.I. | Master-8 | |
Microdispenser | Drummond Scientific | 3-000-752 | Dye applicator for pressure staining |
Microdissection scissors | Moria | 15371-92 | |
Minutien pins (0.1 mm) | Fine Science Tools | NC9677548 | For positioning and stabilizing CNS |
Motorized microscope platform | Thorlabs | GHB-BX | Gibraltar platform |
NeuroPlex imaging software | RedShirtImaging | NeuroPlex | Compatible with the WuTech photodiode array |
Objective lenses | Olympus | XLPLN10XSVMP, XLUMPLFLN20XW, LUMPLFLN40XW, UAPON40XW340 | |
PE-100 polyethylene tubing | VWR | 63018-726 | Tubing to make suction electrodes |
Perfusion pump | Instech | P720 with DBS062SDBSU tube set | |
Petroleum jelly | Equate | NDC 49035-038-54 | |
Photodiode array with control panel | WuTech Instruments | 469-IV photodiode array | Contact jianwu2nd@gmail.com for ordering information |
RH155 | Santa Cruz Biotechnology | sc-499432 | Voltage-sensitive dye |
RH482 | Univ of Conn. Health Center | JPW-1132 | Voltage-sensitive dye; special order from Leslie Leow |
Silicone earplugs | Mack's | Model 7 | To be use for preparation compression |
Staining PE tubing | VWR | 63018-xxx | Different sizes depending on fit |
Sylgard 184 silicone elastomer kit | Dow Corning | Sylgard 184 silicone elastomer kit | |
Thorlabs LED and driver | Thorlabs | M735L2-C1, DC2100 | LED lamp and driver |
Tygon tubing | Fisher Scientific | 14-171-xxx | |
Vibration isolation table | Kinetic Systems | MK26 | Spring-based |