Deux approches cytométriques en flux de détection de surface de ligand NKG2D pour distinguer les cellules souches des sous-populations en vrac dans la leucémie myéloïde aiguë

Henrik Landerer; Marlon Arnone; Ronja Wieboldt; Elsa Goersch; Anna M. Paczulla Stanger; Martina Konantz; Claudia Lengerke

doi:10.3791/61803

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Article de méthode

Deux approches cytométriques en flux de détection de surface de ligand NKG2D pour distinguer les cellules souches des sous-populations en vrac dans la leucémie myéloïde aiguë

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DOI :

10.3791/61803

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21 février 2021

Henrik Landerer^*¹ , Marlon Arnone^*¹ , Ronja Wieboldt² , Elsa Goersch¹ , Anna M. Paczulla Stanger³ , Martina Konantz¹ , Claudia Lengerke¹^,²^,³

¹Department of Biomedicine, University Hospital Basel and University of Basel, ²Division for Hematology, University Hospital Basel and University of Basel, ³Department of Internal Medicine, Hematology and Oncology, University Hospital Tübingen

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous présentons deux protocoles de souillure différents pour la détection du ligand NKG2D (NKG2DL) dans les échantillons humains primaires de leucémie myéloïde aiguë (AML). La première approche est basée sur une protéine de fusion, capable de reconnaître tous les ligands connus et potentiellement encore inconnus, tandis que le second protocole repose sur l’ajout de plusieurs anticorps anti-NKG2DL.

Résumé

Dans le même patient, l’absence de l’expression de surface des ligands de NKG2D (NKG2DL) a été montrée pour distinguer des sous-populations leucémiques avec des propriétés de cellules souches (soi-disant cellules souches leucémiques, LSCs) des cellules leucémiques de contrepartie plus différenciées qui manquent de potentiel d’initiation de la maladie bien qu’elles portent des mutations génétiques spécifiques de leucémie semblables. Les NKG2DL sont des auto-molécules biochimiquement très diversifiées de type CMH de classe I. Les cellules saines dans des conditions homéostatiques n’expriment généralement pas NKG2DL à la surface cellulaire. Au lieu de cela, l’expression de ces ligands est induite lors de l’exposition au stress cellulaire (par exemple, transformation oncogène ou stimuli infectieux) pour déclencher l’élimination des cellules endommagées par la lyse par les cellules immunitaires exprimant les récepteurs NKG2D telles que les cellules tueuses naturelles (NK). Fait intéressant, l’expression de surface de NKG2DL est sélectivement supprimée dans les sous-populations de LSC, permettant à ces cellules d’échapper à la surveillance immunitaire médiée par NKG2D. Ici, nous présentons une analyse côte à côte de deux méthodes différentes de cytometry d’écoulement qui permettent la recherche sur l’expression de surface de NKG2DL sur des cellules cancéreuses c.-à-d., une méthode impliquant l’identification de pan-ligand et une méthode impliquant la souillure avec des anticorps multiples contre des ligands simples. Ces méthodes peuvent être utilisées pour séparer les sous-populations cellulaires négatives viables de NKG2DL ayant des propriétés putatives de cellules souches cancéreuses de NKG2DL non-LSC positives.

Introduction

Les cellules NK sont des effecteurs importants du système immunitaire inné qui peuvent reconnaître et éliminer les cellules malignes ou les cellules saines stressées (par exemple, par une infection virale) sans stimulation antigénique préalable¹. Ce processus est étroitement régulé par un répertoire complexe de récepteurs activants ( tels que les récepteurs de cytotoxicité naturelle (RCN), NKG2D et CD16 - et de récepteurs inhibiteurs qui sont largement représentés par des récepteurs tueurs de type immunoglobuline (KIRs)². La liaison des KIRs aux molécules humaines de classe I de l’antigène leucocytaire (HLA) sur les cell....