इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य एक कृत्रिम झिल्ली फीडर के माध्यम से एडीज एजिप्टी मच्छरों को पशु-व्युत्पन्न और कृत्रिम रक्त भोजन वितरित करना है और भोजन की मात्रा को ठीक से निर्धारित करना है।
कुछ मच्छर प्रजातियों की मादाएं अंडे के विकास के लिए आवश्यक प्रोटीन युक्त रक्त भोजन प्राप्त करने के लिए कशेरुकी मेजबानों को काटने के दौरान बीमारियों को फैला सकती हैं। प्रयोगशाला में, शोधकर्ता झिल्ली फीडर के माध्यम से मच्छरों को पशु-व्युत्पन्न और कृत्रिम रक्त भोजन वितरित कर सकते हैं, जो भोजन संरचना में हेरफेर के लिए अनुमति देते हैं। यहां, हम एडीज एजिप्टी मच्छरों को रक्त और कृत्रिम रक्त भोजन खिलाने और व्यक्तिगत महिलाओं द्वारा उपभोग की मात्रा की मात्रा निर्धारित करने के तरीके प्रस्तुत करते हैं।
कृत्रिम/रक्त भोजन के लक्षित भोजन और मात्राकरण में व्यापक उपयोग होते हैं, जिनमें मच्छर व्यवहार और शरीर विज्ञान पर भोजन घटकों के प्रभावों का परीक्षण करना, इंजेक्शन के बिना औषधीय यौगिकों को वितरित करना और विशिष्ट रोगजनकों के साथ मच्छरों को संक्रमित करना शामिल है । भोजन से पहले भोजन में फ्लोरोसेसिन डाई जोड़ना बाद के भोजन के आकार की मात्राकरण के लिए अनुमति देता है। मच्छरों द्वारा उपभोग किए जाने वाले भोजन की मात्रा को वजन से मापा जा सकता है, यदि मादाओं का उपयोग बाद में व्यवहार प्रयोगों के लिए किया जाना है, या 96-अच्छी प्लेटों में व्यक्तिगत महिलाओं को समरूप बनाकर और प्लेट रीडर का उपयोग करके फ्लोरेसेंस स्तर को अंतिम बिंदु परख के रूप में मापता है। भोजन के आकार की मात्रा का उपयोग यह निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है कि भोजन के घटकों को बदलने से भोजन की मात्रा में परिवर्तन होता है या यदि भोजन की खपत मच्छरों के उपभेदों के बीच अलग होती है। सटीक भोजन आकार मात्रा भी बहाव परख के लिए महत्वपूर्ण है, जैसे मेजबान आकर्षण या fecundity पर प्रभाव को मापने के रूप में । यहां प्रस्तुत किए गए तरीकों को दिनों के दौरान भोजन पाचन को ट्रैक करने के लिए या एक मच्छर द्वारा प्रत्येक भोजन की खपत को निर्धारित करने के लिए विभिन्न भोजन (अमृत और रक्त की तरह) में जोड़े गए कई विशिष्ट मार्कर शामिल करने के लिए और अनुकूलित किया जा सकता है।
ये तरीके शोधकर्ताओं को सैकड़ों व्यक्तिगत मच्छरों द्वारा उपभोग किए गए भोजन की मात्रा की तुलना करने के लिए उच्च थ्रूपुट माप करने की अनुमति देते हैं। इसलिए ये उपकरण विविध जैविक सवालों का जवाब देने के लिए मच्छर शोधकर्ताओं के समुदाय के लिए मोटे तौर पर उपयोगी होंगे।
हम एक कृत्रिम झिल्ली फीडर का उपयोग करके एडीज एजिप्टी मच्छरों को संशोधित रक्त भोजन खिलाने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं और प्रत्येक व्यक्ति मच्छर द्वारा उपभोग किए जाने वाले भोजन की मात्रा को ठीक से मापते हैं। इस प्रोटोकॉल को भोजन की सामग्री को बदलने या मच्छरों के विभिन्न प्रयोगात्मक समूहों द्वारा उपभोग किए गए भोजन की मात्रा की तुलना करने के लिए लचीले ढंग से अनुकूलित किया जा सकता है।
एई एजिप्टी मच्छर रोगजनकों को फैलने से वैश्विक स्वास्थ्य को खतरा है जो पीले बुखार, डेंगू बुखार, चिकनगुनिया और ज़िका1,2,3,4, 5सहित बीमारियों का कारणबनताहै। एई. एजिप्टी मादाएं रक्त-फीडरों को बाध्य करती हैं; उन्हें अंडे के विकास के लिए आवश्यक प्रोटीन प्राप्त करने के लिए कशेरुकी रक्त का उपभोग करना चाहिए, और अंडे के प्रत्येक क्लच को कम से कम एक मेजबान6,7,8से पूर्ण रक्त भोजन की आवश्यकता होती है । मादा मच्छर पहले त्वचा को उसके स्टाइल के साथ छेदकर और लार का इंजेक्शन देकर काटती है, जिसमें यौगिक होते हैं जो मेजबान की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया9को ट्रिगर करते हैं। वह तो उसे मिडगिट में उसके स्टाइल के माध्यम से रक्त पंप द्वारा खिलाती है । संक्रमित मेजबान से रक्त भोजन का उपभोग करते समय, वह रक्त जनित रोगजनकों6,8को निगल सकती है, जो मच्छर के मिडगुट से उसकी लार ग्रंथियों10में स्थानांतरित हो जाता है। इस तरीके से संक्रमित मादा मच्छर11,12के बाद के मेजबानों को काटने पर लार के साथ रोगजनकों को इंजेक्शन देकर बीमारी फैला सकते हैं । मच्छर जनित रोगों के संचरण को नियंत्रित करने में रक्त-आहार व्यवहार के तंत्र को समझना और मात्रा निर्धारित करना महत्वपूर्ण कदम हैं।
मच्छर पालन और प्रयोग के लिए कई प्रयोगशाला प्रोटोकॉल चूहों, गिनी सूअरों या मनुष्यों सहित जीवित जानवरों का उपयोग रक्त स्रोत के रूप में13,14,15, 16करतेहैं। जीवित जानवरों का उपयोग नैतिक चिंताओं के साथ-साथ कार्मिक प्रशिक्षण, पशु आवास और देखभाल, और संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) नीतियों के अनुपालन के लिए जटिल आवश्यकताओं को लगाता है । यह मच्छरों को वितरित किए जा सकने वाले यौगिकों के प्रकारों को भी सीमित करता है, जो17किए जा सकने वाले अध्ययनों को बाधित करता है।
कृत्रिम रक्त-आहार उपकरण, जो आम तौर पर मेजबान त्वचा का अनुकरण करने के लिए झिल्ली प्रणाली का उपयोग करते हैं, रक्त-भोजन व्यवहार का अध्ययन करने के लिए उपयोगी उपकरण हैं जो लाइव मेजबानों के रखरखाव की आवश्यकता को दरकिनार करते हैं। पूरे रक्त को कई विक्रेताओं से खरीदा जा सकता है और गर्म, पानी-जैकेट वाले कृत्रिम झिल्ली फीडर या इसी तरह के उपकरणों18, 19का उपयोग करके मच्छरों को खिलाया जासकताहै। इस प्रोटोकॉल में, हम छोटे, डिस्पोजेबल झिल्ली फीडरों के उपयोग को प्रदर्शित करते हैं जिसे “ग्लीट्यूब” कहा जाता है। इस झिल्ली फीडर, पहले कोस्टा-दा-सिल्वा एट अल द्वारा प्रकाशित ( २०१३)20,आसानी से मानक प्रयोगशाला उपकरणों से इकट्ठा किया जा सकता है, यह मच्छरों की मध्यम संख्या के लिए रक्त भोजन देने के लिए आदर्श बनाने और बड़े समूहों या कई भोजन योगों के परीक्षण के लिए पैमाने पर सीधा । ग्लीट्यूब अन्य वाणिज्यिक कृत्रिम फीडरों के लिए एक सस्ता और कुशल विकल्प है, जिसके लिए बड़े भोजन की मात्रा की आवश्यकता हो सकती है और एक ही भोजन निर्माण21पर मच्छरों के बड़े समूहों को खिलाने के लिए अधिक उपयुक्त हैं।
इस प्रोटोकॉल में दो खंड शामिल हैं: कृत्रिम भोजन तैयार करना/वितरित करना और खपत की मात्रा बताना । पहले खंड में, ग्लीट्यूब का उपयोग हेरफेर आहार देने के लिए एक कुशल साधन के रूप में किया जाता है। पूरे रक्त को रक्त भोजन के बदले रक्त विकल्प के प्रभावों की तुलना करने के लिए पूरी तरह से कृत्रिम भोजन के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता है। कोगन (1 99 0)22 से अनुकूलित एक नुस्खा यहां प्रस्तुत किया गया है, हालांकि कई कृत्रिम भोजन योगों को23,24विकसित किया गया है। इसके अलावा, इंजेक्शन की तुलना में औषधीय यौगिकों को पेश करने के लिए भोजन एक कम आक्रामक और कम श्रमसाध्य विधि है। प्रत्येक भोजन (1-2 एमसीएल) के लिए आवश्यक कम कुल मात्रा के कारण, यह प्रोटोकॉल महंगे अभिकर् म की मात्रा को कम करने के लिए एक आकर्षक वितरण विधि प्रदान करता है। एई एजिप्टी मादाएं आसानी से एडेनोसाइन 5′-ट्रिप्होस्फेट (एटीपी)25, 26के साथ नमकीन समाधान के प्रोटीन-मुक्त भोजन का उपभोग करती हैं, जो एकल भोजन घटकों के प्रभावों को मापने के लिए एक आधार रेखा प्रदान करती है। उदाहरण के लिए, एई में न्यूरोपेप्टाइड वाई-लाइक रिसेप्टर 7 (NPYLR7) एजिप्टी को प्रोटीन युक्त रक्त भोजन के बाद मेजबान-मांग दमन में मध्यस्थता करने के लिए जाना जाता है, और जब NPYLR7 agonists को प्रोटीन मुक्त खारा भोजन में जोड़ा जाता है, तो मादा मच्छर उन लोगों के समान मेजबान-मांग दमन प्रदर्शित करते हैं जिन्होंने पूरे रक्त का सेवन किया है7।
दूसरे खंड में, एक व्यक्तिगत मादा मच्छर द्वारा उपभोग किए जाने वाले प्रत्येक भोजन की मात्रा की मात्रा निर्धारित करने के लिए कदम प्रस्तुत किए जाते हैं। यह परख फ्लोरेसेंस-आधारित है और उन तरीकों की तुलना में उच्च संकल्प में फीडिंग की स्थिति को कैप्चर करता है जिनमें महिलाओं को अकेले पेट के तनाव के दृश्य मूल्यांकन के आधार पर “फेड” या “अनफेड” के रूप में वर्गीकृत किया जाता है। भोजन से पहले भोजन में फ्लोरोसेइन जोड़कर, व्यक्तियों द्वारा किए जाने वाले भोजन की मात्रा को 96-अच्छी तरह से प्लेट में प्रत्येक मच्छर को समरूप बनाकर और एक रीडआउट के रूप में फ्लोरेसेंस तीव्रता को मापने के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। यह परख भोजन संरचना या मच्छरों की आनुवंशिक पृष्ठभूमि जैसे चर के जवाब में खिलाने की ताक़त में अंतर को माप सकती है। मध्यवर्ती भोजन के आकार के लिए सटीक मात्राकरण महत्वपूर्ण है, उदाहरण के लिए जब महिलाओं को सबऑप्टिमल भोजन की पेशकश की जाती है जिसमें भोजन निवारक होते हैं या जब वे चर आकार27के सुक्रोज भोजन का उपभोग करते हैं। यदि भोजन के आकार के मात्राकरण के बाद बाद के व्यवहार परख के लिए खिलाया मच्छरों की आवश्यकता होती है, तो भोजन के आकार की गणना समूहों में एनेस्थेटाइज्ड मादाओं को तौलकर और प्रति व्यक्ति औसत वृद्धि द्रव्यमान का आकलन करके की जा सकती है। हालांकि फ्लोरोसेइन अंकन की तुलना में कम सटीक, वजन अभी भी भोजन की मात्रा का एक एकत्रित अनुमान प्रदान करता है और डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं पर भोजन के प्रभाव की जांच की अनुमति देता है, जैसे कि fecundity या बाद में मेजबान आकर्षण। जबकि रक्त भोजन का आकार परिवर्तनशील है और11,28,29के असंख्य कारकों से प्रभावित हो सकता है , यहां वर्णित तरीकों के साथ मापा गया भोजन का आकार पिछले मात्रा7, 30,31के अनुरूप है ।
कई प्रयोगशाला अनुप्रयोगों के लिए, कृत्रिम झिल्ली फीडर शोधकर्ताओं को भोजन की सामग्री में सीधे हेरफेर करने की क्षमता की अनुमति देकर लाइव मेजबानों की तुलना में अलग लाभ प्रदान करते हैं। यद्यपि कृत्रिम झिल्ली खिलाने के लिए कई विधियां उपलब्ध हैं, यहां वर्णित विधि लचीलेपन, लागत और थ्रूपुट में लाभ प्रदान करती है। अन्य वाणिज्यिक झिल्ली फीडरों की तुलना में, ग्लीट्यूब परख के लिए एक छोटे भोजन की मात्रा की आवश्यकता होती है, जिससे यह दवाओं या रोगजनकों सहित महंगे अभिकर्मकों के लिए एक कुशल वितरण तंत्र बन जाता है, जिससे कुल मात्रा को कम करके7,35की आवश्यकता होती है। चूंकि प्रोटीन मुक्त खारा और कृत्रिम रक्त भोजन दोनों ही engorgement को बढ़ावा देते हैं, यौगिकों या रोगजनकों को इंजेक्शन के लिए एक उच्च थ्रूपुट और गैर-आक्रामक विकल्प के रूप में या तो भोजन में जोड़ा जा सकता है। इसके अतिरिक्त, ग्लीट्यूब के प्रत्येक घटक को आसानी से धोया जा सकता है, बदला जा सकता है, या खिलाने वाले उपकरण के क्रॉस-संदूषण के बिना कई भोजन प्रकारों को वितरित करने और निर्धारित करने के लिए बढ़ाया जा सकता है।
मच्छरों द्वारा उपभोग किए जाने वाले भोजन की मात्रा की मात्रा निर्धारित करने के लिए, फ्लोरेसेंस-आधारित विधि मच्छरों को खिलाने से पहले और बाद में वजन की तुलना में अधिक सटीक भोजन आकार मात्राकरण को सक्षम बनाती है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यह विधि एक अंत बिंदु परख है। इसके विपरीत, वजन मच्छरों को आगे के प्रयोग के लिए जीवित रखने की अनुमति देता है। एक प्लेट रीडर का उपयोग करके, फ्लोरेसेंस-आधारित विधि को सैकड़ों व्यक्तिगत महिलाओं द्वारा उपभोग किए गए भोजन के उच्च-थ्रूपुट मात्राकरण के लिए आसानी से बढ़ाया जा सकता है।
उच्च भोजन दरों को प्राप्त करने के लिए, महिला मेजबान की मांग व्यवहार को सक्रिय करने और फीडर के लिए महिलाओं को आकर्षित करने के लिए पर्याप्त मेजबान संकेतों का एक संयोजन मौजूद होना चाहिए। यदि ग्लीट्यूब के नीचे मच्छरों की भीड़ नहीं हो रही है, तो भोजन ठीक से गर्म नहीं हो सकता है, या सीओ2 डिलीवरी पर्याप्त नहीं हो सकती है। झिल्ली की सतह में मानव गंध के अलावा कृत्रिम झिल्ली का आकर्षण मज़बूती से बढ़ता है। यदि ग्लीट्यूब के नीचे मच्छरों को देखा जाता है लेकिन खिलाने में विफल रहते हैं, तो भोजन संरचना गलती पर हो सकती है। यदि भोजन गर्म नहीं है, तो महिलाएं फ़ीड नहीं कर सकती हैं, रक्त बहुत पुराना है, या यदि भोजन के लिए योजक आंतरिक रूप से प्रतिकूल हैं या अवांछनीय रासायनिक प्रतिक्रिया36का कारण बनते हैं। अतिरिक्त एटीपी भी मज़बूती से खिला दरों में वृद्धि करता है और प्रदान की व्यंजनों में से प्रत्येक में 2 mM की अंतिम एकाग्रता तक पहुंचा जा सकता है। यदि पैराफिल्म को ग्लीट्यूब कैप में नहीं खींचा जाता है तो महिलाएं फ़ीड नहीं कर सकती हैं; पैराफिल्म समान रूप से पारदर्शी होना चाहिए और इसे बकसुआ नहीं करना चाहिए, क्योंकि यह महिला को अपने स्टाइल के साथ पैराफिल्म को प्रभावी ढंग से छेदने में सक्षम होने से रोकता है। यदि भोजन जाल पर ग्लीट्यूब के माध्यम से लीक होता है, तो पैराफिल्म खींचने की प्रक्रिया के दौरान फट सकता है और इसे प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए।
भोजन संरचना को बदलने से शोधकर्ताओं को मिडगुट से भोजन को साफ करने के साथ-साथ बाद में मेजबान की मांग करने वाले व्यवहार के लिए आवश्यक समय की लंबाई में हेरफेर करने की भी अनुमति मिल सकती है। यहां प्रस्तुत भोजन को पशु-व्युत्पन्न रक्त के समान पाचन 7 के लिए24-36 घंटे की आवश्यकता होती है। इनमें से किसी भी भोजन पर भोजन करने के बाद, महिलाएं पाचन समय खिड़की के दौरान मेजबान की मांग को दबा देंगी। चूंकि खारा भोजन प्रोटीन की कमी है, महिलाओं को मेजबान की मांग के बाद भोजन को मंजूरी दे दी है वापस । यदि एक तेज वापसी वांछनीय है, तो शोधकर्ता वैकल्पिक “त्वरित समाशोधन” नमकीन भोजन चुन सकते हैं जो लगभग 6 एच27में उत्सर्जित होते हैं। जबकि यहां प्रस्तुत खारा भोजन की संरचना सीधे कृत्रिम रक्त भोजन के साथ परिणामों की तुलना करने के लिए मिलान किया जाता है, “त्वरित समाशोधन” भोजन कशेरुकी रक्त में पाए जाने वाले शारीरिक नमक के स्तर से अधिक निकटता से मेल खाता है।
यहां वर्णित तरीकों की सीमाएं हैं जिन्हें शोधकर्ता के प्रयोगात्मक लक्ष्यों के लिए सबसे उपयुक्त परख का चयन करने से पहले माना जाना चाहिए। वर्णित फ्लोरोसेसिन माप मच्छरों को अतिरिक्त प्रयोग के लिए फिर से उपयोग करने की अनुमति नहीं देते हैं। हालांकि, फ्लोरोसिन परख का उपयोग करके भोजन के आकार क्वांटिफिकेशन से पहले वजन माप लिया जा सकता है। यदि वजन और भोजन का आकार किसी दिए गए भोजन के लिए कई परीक्षणों में सुसंगत है, तो वजन भविष्य के प्रयोगों में प्रॉक्सी के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इसके अलावा, यह प्रोटोकॉल मेजबान-मांग बनाम रक्त-भोजन व्यवहार में घाटे के बीच अंतर नहीं करता है; झिल्ली फीडर को खोजने में हानि दिखाने वाले मच्छरों में भोजन दरों और/या भोजन के आकार में कमी आएगी । परख भर में व्यवहार रिकॉर्ड करने के लिए एक कैमरा जोड़कर, शोधकर्ताओं ने निर्धारित कर सकते है कि महिलाओं ग्लिकुट नहीं मिल सकता है, या कि क्या वे Glytube मिल जाए, लेकिन फ़ीड नहीं है ।
यहां वर्णित परख मच्छरों में खिलाने के व्यवहार से संबंधित कई बकाया सवालों का पता लगाने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, कृत्रिम रक्त भोजन में घटक प्रोटीन या कुल प्रोटीन एकाग्रता के अनुपात में फेरबदल करके विशिष्ट रक्त प्रोटीन के योगदान का पता लगाया जा सकता है। कई भोजन की घटनाओं से भोजन के आकार का मूल्यांकन करने के लिए, अद्वितीय स्रोतों37से भोजन में अंतर करने के लिए अलग फ्लोरेसेंस स्पेक्ट्रा वाले रंगों को जोड़ा जा सकता है। इस प्रोटोकॉल को आंतरिक मुंह के हिस्सों को अलग से उत्तेजित करने के लिए भी संशोधित किया जा सकता है जो रक्त का पता लगाते हैं और जिनका उपयोग घूस (यानी, स्टाइल) के लिए किया जाता है, और केमोसेन्सरी उपांग जो त्वचा (यानी, लेबियम, पैर) से संपर्क करते हैं क्योंकि मच्छर36रक्त खिलाने के लिए भूमि पर आते हैं। उदाहरण के लिए, यदि लिगांड को सीधे भोजन में जोड़ा जाता है, तो वे लेबियम और पैरों से संपर्क नहीं करते हैं, क्योंकि झिल्ली केवल स्टाइल द्वारा छेद की जाती है। यदि लिगांड के बजाय पैराफिल्म की बाहरी सतह में जोड़ा जाता है, तो वे भोजन से अलग रहते हैं और लेबियम औरपैरों 36से संपर्क किया जा सकता है। अंत में, रक्त-भोजन व्यवहार की विस्तृत गतिज को अच्छी तरह से समझ में नहीं आता है और यहां प्रस्तुत विधि को लोकोमोशन, मुद्रा और भोजन गतिशीलता38के व्यवहार readouts निकालने के लिए मशीन लर्निंग टूल के साथ उच्च-रिज़ॉल्यूशन ट्रैकिंग को संयोजित करने के लिए संशोधित किया जा सकता है।
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य उपयोगकर्ता के अनुकूल और लागत प्रभावी होना है, जिसमें मच्छर रक्त-भोजन और रक्त-भोजन व्यवहार का अध्ययन करने के लिए औषधीय और आनुवंशिक जोड़तोड़ को नियोजित करने वाले शोधकर्ताओं की सेवा करने की क्षमता है।
The authors have nothing to disclose.
हम पांडुलिपियों पर टिप्पणी के लिए निपुन बसर, एड्रियाना के रोसास विल्लेगैस, नादव शाई और ट्रेवर सोरेल्स और तकनीकी सहायता के लिए झेंगयान गोंग और किरोलोस बार्सुम को धन्यवाद देते हैं। हम चित्रा 1में इस्तेमाल तस्वीरों के लिए एलेक्स वाइल्ड का शुक्रिया अदा करते हैं । केवी को बोहरिंगर इंगलहेम शौकीन्स पीएचडी फेलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था । वीजे को एनआईएच T32-MH095246 द्वारा भाग में समर्थन दिया गया था । इस काम को हावर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट से जेम्स एच गिलम फैलोशिप फॉर एडवांस्ड स्टडी प्रोग्राम के माध्यम से रॉकफेलर विश्वविद्यालय को वीजे को अनुदान देकर समर्थन दिया गया था । यह सामग्री ग्रांट नं. एनएसएफ की डीईई-1325261 से वीजे इस सामग्री में व्यक्त की गई कोई भी राय, निष्कर्ष और निष्कर्ष या सिफारिशें लेखक (ओं) के हैं और जरूरी नहीं कि राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन के विचारों को प्रतिबिंबित करें।
15 mL conical tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
3 mm diameter borosilicate solid-glass bead | MilliporeSigma | Z143928 | For use for bead mill homogenizer; not required if using pellet pestle grinder |
32 oz. high-density polyethylene (HDPE) plastic cup | VWR | 89009-668 | Example mosquito container used for feeding assays shown; alternate options can be used |
50 mL conical tubes | Fisher Scientific | 14-959-49A | |
96-well black polystyrene plate | ThermoFisher | 12-566-09 | |
96-well PCR plate sealing film | Bio-Rad | MSB1001 | Alternate options can be used |
96-well PCR plates | Bio-Rad | HSP9621 | Alternate options can be used |
Adenosine 5′-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate | MilliporeSigma | A6419 | |
Albumin (human serum) | MilliporeSigma | A9511 | |
Aluminum foil | Fisher Scientific | 01-213 | Alternate options can be used to block light entering fluorescein container |
Balance | Fisher Scientific | 01-911 | Alternate options can be used |
Bead mill homogenizer | Qiagen | 85300 | Not required if using pellet pestle grinder |
Cotton ball | Fisher Scientific | 22456880 | For nectar-feeding; alternate options can be used |
Defibrinated sheep blood | Hemostat Laboratories | DSB100 | Alternate options can be used |
Drosophila CO2 fly pad | Tritech Research | MINJ-DROS-FP | Alternate options can be used |
Fluorescein | MilliporeSigma | F6377 | |
Fluorescence plate-reader | ThermoFisher | VL0000D0 | Alternate options can be used |
Gamma-globulin (human blood) | MilliporeSigma | H7379 | |
Glycerol | MilliporeSigma | G7893 | |
Hemoglobin (human) | MilliporeSigma | G4386 | |
Laboratory wrapping film – parafilm | Fisher Scientific | 13-374 | |
Magnetic stirrer | Fisher Scientific | 90-691 | Alternate magnetic stirrers can be used |
Microcentrifuge for 96-well plate | VWR | 80094-180 | Alternate options can be used |
Microcentrifuge Tubes | MilliporeSigma | 2236412 | Alternate options can be used |
Pellet pestle grinder | VWR | KT749521-1500 | Not required if using bead mill homogenizer |
Phosphate buffered solution (PBS) | Fisher Scientific | BW17-516F | Optional |
Razor blades | Fisher Scientific | 12-640 | Alternate options can be used, such as a lathe for better consistency of cutting |
Rubber bands | |||
Silicone tubing | McMaster Carr | Needed if using a fly pad for CO2 delivery | |
Sodium bicarbonate (NaHCO3) | Fisher Scientific | S233 | |
Sodium chloride (NaCl) | MilliporeSigma | S9888 | |
Stir bars | Fisher Scientific | 14-512 | Alternate magnetic stir bars can be used |
Translucent polypropylene storage box with removable lid | Example box used for feeding assays shown | ||
Vortex mixer | |||
Water bath | Alternate heating device may be used | ||
White 0.8 mm polyester mosquito netting | American Home & Habit Inc. | F03A-PONO-MOSQ-M008-WT | Alternate options can be used |