Contactvrij co-kweekmodel voor de studie van innate immuuncelactivering tijdens respiratoire virusinfectie

Zhe Zhang Ryan Lew; Jing Liu; Hsiao Hui Ong; Vivian Jiayi Tan; Annika Luukkainen; Yew Kwang Ong; Mark Thong; Kia Joo Puan; Vincent Tak Kwong Chow; Kai Sen Tan; De Yun Wang

doi:10.3791/62115

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Contactvrij co-kweekmodel voor de studie van innate immuuncelactivering tijdens respiratoire virusinfectie

2.9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/62115

⸱

28 februari 2021

Zhe Zhang Ryan Lew^*¹ , Jing Liu^*¹ , Hsiao Hui Ong¹ , Vivian Jiayi Tan² , Annika Luukkainen³ , Yew Kwang Ong¹^,⁴ , Mark Thong¹^,⁴ , Kia Joo Puan⁵ , Vincent Tak Kwong Chow²^,⁶ , Kai Sen Tan¹^,²^,⁶ , De Yun Wang¹^,⁶

¹Department of Otolaryngology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ³Haartman Institute, Medicum, University of Helsinki, ⁴Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery, National University Hospital, National University Health System, ⁵Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), Singapore Immunology Network (SIgN), ⁶NUHS Infectious Diseases Translational Research Program, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

^* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een onderzoek naar de vroege interacties tussen viraal geïnfecteerde neusepitheelcellen en aangeboren celactivatie. Individuele subsets van immuuncellen kunnen worden onderscheiden op basis van hun activering als reactie op virale infecties. Ze kunnen vervolgens verder worden onderzocht om hun effecten op vroege antivirale reacties te bepalen.

Samenvatting

De vroege interacties tussen de neusepitheellaag en de aangeboren immuuncellen tijdens virale infecties blijven een onderbelicht gebied. De betekenis van aangeboren immuniteitssignalering bij virale infecties is aanzienlijk toegenomen naarmate patiënten met luchtweginfecties die een hoge aangeboren T-celactivatie vertonen, een beter ziekteresultaat vertonen. Vandaar dat het ontleden van deze vroege aangeboren immuuninteracties de opheldering mogelijk maakt van de processen die ze beheersen en de ontwikkeling van potentiële therapeutische doelen en strategieën voor het dempen of zelfs voorkomen van vroege progressie van virale infecties kan vergemakkelijken. Dit protocol beschrijft een veelzijdig model dat kan worden gebruikt om vroege overspraak, interacties en activering van aangeboren immuuncellen te bestuderen van factoren die worden uitgescheiden door viraal geïnfecteerde luchtwegepitheelcellen. Met behulp van een H3N2-influenzavirus (A /Aichi / 2/1968) als het representatieve virusmodel, is aangeboren celactivering van co-gekweekte perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's) geanalyseerd met behulp van flowcytometrie om de subsets van cellen te onderzoeken die worden geactiveerd door de oplosbare factoren die vrijkomen uit het epitheel als reactie op de virale infectie. De resultaten tonen de gating-strategie voor het differentiëren van de subsets van cellen en onthullen de duidelijke verschillen tussen de geactiveerde populaties van PBMC's en hun kruisverwijzing met het controle- en geïnfecteerde epitheel. De geactiveerde subsets kunnen vervolgens verder worden geanalyseerd om hun functies en moleculaire veranderingen specifiek voor de cellen te bepalen. Bevindingen van een dergelijk kruisverwijzingsonderzoek kunnen factoren blootleggen die belangrijk zijn voor de activering van vitale aangeboren celpopulaties, die gunstig zijn bij het beheersen en onderdrukken van de progressie van virale infectie. Bovendien kunnen deze factoren universeel worden toegepast op verschillende virale ziekten, vooral op nieuw opkomende virussen, om de impact van dergelijke virussen te dempen wanneer ze voor het eerst circuleren in naïeve menselijke populaties.

Inleiding

Respiratoire virussen behoren misschien wel tot de meest voorkomende ziekteverwekkers die ernstige gezondheids- en economische lasten veroorzaken. Van de periodieke wereldwijde uitbraken van opkomende epidemische stammen (bijv. H1N1, H5N1, H3N2, MERS, COVID-19) tot de seizoensgebonden stammen van influenza elk jaar, virussen vormen een constante bedreiging voor de volksgezondheid. Hoewel vaccins het grootste deel van het antwoord vormen op deze wereldwijde uitdagingen op het gebied van de volksgezondheid, is het ontnuchterend om op te merken dat deze tegenmaatregelen slechts responsief zijn ^1,2. Bovendien is e....