Summary
Depresyonun kronik umutsuzluk fare modeli (CDM), tekrarlayan zorla yüzme seanslarından ve bir okuma olarak başka bir gecikmeli yüzme aşamasından oluşur. Subkronik ve akut tedavi müdahalelerini değerlendirmek için değiştirilebilen, en az 4 hafta boyunca stabil olan kronik depresif benzeri bir durumun indüksiyonu için uygun bir modeli temsil eder.
Abstract
Majör depresif bozukluk, akıl hastalıklarının en yaygın biçimlerinden biridir ve muazzam bireysel acılara ve sosyoekonomik yüke neden olur. Önemine rağmen, mevcut farmakolojik tedavi sınırlıdır ve acilen yeni tedavi seçeneklerine ihtiyaç duyulmaktadır. Potansiyel yeni ilaçların araştırılmasında kilit faktörlerden biri, uygun hayvan modellerinde anti-depresif potansiyellerinin değerlendirilmesidir. Klasik Porsolt zorla yüzme testi, depresif benzeri bir durumu teşvik etmek ve değerlendirmek için onlarca yıldır bu amaçla kullanılmıştır. İki kısa süreli zorla yüzmeden oluşur: birincisi depresif bir duruma neden olmak ve ikincisi ertesi gün iki yüzme seansı arasında verilen ajanın antidepresan etkisini değerlendirmek. Bu model, potansiyel antidepresif ajanlar için bir tarama aracı olarak uygun olabilir, ancak birçok antidepresanın etkisinin gecikmeli başlangıcını göz ardı eder. CDM yakın zamanda kuruldu ve klasik testin dikkate değer farklılıklarla bir modifikasyonunu temsil etti. Fareler, insanlarda depresyonun akut stresten ziyade kronik tarafından indüklendiği fikrini takiben, art arda 5 gün boyunca yüzmeye zorlanırlar. Birkaç günlük (1-3 hafta) bir dinlenme döneminde, hayvanlar sürekli davranışsal umutsuzluk geliştirir. Standart okuma yöntemi, ek bir gecikmeli yüzme seansında hareketsizlik süresinin ölçülmesidir, ancak hayvanın ruh hali durumu hakkında daha geniş bir görüş elde etmek için birkaç alternatif yöntem önerilmektedir. Davranışsal, moleküler ve elektrofizyolojik değişiklikleri hedefleyen çoklu analiz araçları kullanılabilir. Depresif fenotip, en az 4 hafta boyunca stabildir ve hızlı ama aynı zamanda subkronik antidepresan tedavi stratejileri için bir zaman aralığı sağlar. Ayrıca, depresif benzeri bir durumun gelişimindeki değişiklikler bu yaklaşım kullanılarak ele alınabilir. Bu nedenle CDM, depresyonu daha iyi anlamak ve yeni tedavi müdahaleleri geliştirmek için yararlı bir araçtır.
Introduction
Majör depresif bozukluk gibi duygulanım bozuklukları en sık görülen ve zorlayıcı ruhsal hastalıklar arasındadır ve yüksek bireysel acı1, intihar riskinin artması2 ile ilişkilidir ve toplum için önemli bir sosyoekonomik yüke3 neden olur. Etkisine rağmen, tedavi seçenekleri sınırlıdır ve özellikle son yıllarda psikofarmakolojideki yenilik krizi nedeniyle, yeni antidepresif müdahalelerin geliştirilmesine acil bir ihtiyaç vardır. Depresyonun patofizyolojisini anlamak ve potansiyel yeni ajanları test etmek için rasyonel ve geçerli hayvan modellerine acilen ihtiyaç vardır4. Neredeyse yarım yüzyıl boyunca, orijinal olarak Porsolt5 tarafından tanımlanan klasik zorla yüzme testi (FST), potansiyel yeni antidepresanların taranması için indüksiyon ve okuma olarak kullanıldı. 1. günde 5-15 dakika boyunca zorla yüzme süresi, ardından bir kerelik ilaç uygulaması ve ertesi gün başka bir yüzme döneminde farelerin suda hareketsiz geçirdiği kısmın değerlendirilmesinden oluşur. Hareketsizlik zamanının eksik bir doğal kaçış davranışını temsil ettiği düşünülüyordu ve farelerde depresyon benzeri bir durumun derecesiyle ilişkili olduğu düşünülüyordu5.
Klasik FST, sadece bilimsel toplulukta değil6,7,8 aynı zamanda kamu medyasında da ağır bir şekilde eleştirilmiştir8. FST ile ilgili tartışmaların çoğu, klasik paradigmada sadece 1 günlük kısa indüksiyon ve tedavi sürelerinden kaynaklanmaktadır. FST'nin insan depresyonuyla karşılaştırılabilir bir durumdan ziyade akut bir travma modelini temsil ettiği iddia edildi. Dahası, Porsolt testi potansiyel antidepresif ajanlar için bir tarama aracı olarak uygun olabilir, ancak birçok antidepresanın etkisinin gecikmeli başlangıcını görmezden gelir.
Orijinal FST'den türetilen kronik umutsuzluk modeli (CDM)9,10,11,12,13,14,15, depresyon için daha uygun bir hayvan modelini temsil eder. CDM'de, art arda 5 gün boyunca tekrarlanan yüzme stresi akut travmatik etkileri önler. Tekrarlanan ve devam eden stresli bir durumdan kaçmayı başaramayarak, farelerin çaresizlik, teslim olma ve nihayetinde umutsuzluk durumu geliştirdiği düşünülmektedir. Bu paradigma, insanlarda depresyonun gelişimi için mevcut psikolojik teorilerle, travma sonrası stres bozukluğunun başlangıcında yaygın olarak yaşanan tek bir akut travmadan daha karşılaştırılabilir. CDM'de ortaya çıkan depresyon benzeri durum 4 haftaya kadar stabildir9 ve bu nedenle antidepresanların fayda göstermesi için genellikle 2-4 haftaya ihtiyaç duyduğu klinik koşullarla daha iyi karşılaştırılabilir daha uzun tedavi süreleri olasılığını ortaya çıkarır16.
Depresif benzeri durumun değerlendirilmesi o zaman çok boyutlu olmalıdır. Klasik FST'de olduğu gibi hareketsizlik süresinin ölçülmesi yararlıdır, ancak tek sonuç parametresi olarak kullanılmamalıdır. Aşağıda açıklanan çeşitli yöntemler, genellikle depresif insanlarda bulunan semptomlar doğrultusunda depresif bir durumun farklı boyutlarını haritalayabilmelidir. Uygun okuma değerlendirmeleri arasında kaçış davranışı (hareketsizlik süresi9,10,17), kuyruk süspansiyon testi (TST)9, anhedoni (klasik sakkaroz tercih testi (SPT)18), motivasyon odaklı davranış (burun dürtme sakkaroz tercih testi (NPSPT)10), beklenti/keşif-davranış (belirsiz sinyale yanıt19; Y-labirent testi9), elektrofizyoloji (uzun süreli plastisite ölçümleri (uzun süreli potansiyel, LTP; uzun süreli depresyon, LTD)20), moleküler değerlendirmeler (acil erken genlerin aktivasyon paternleri (IEG'ler); daha fazla stres paternleri21).
Teorik olarak, tekrarlanan bir yüzme testi, hareketsizlik süresinin herhangi bir değerlendirmesi olmadan depresif bir durumu indüklemek için kullanılabilir. Bununla birlikte, hareketsizlik sürelerine sahip en azından bir kavram kanıtı deney serisi sağlanması şiddetle tavsiye edilir. Ek olarak, CDM, indüksiyon aşamasında hareketsizlik süresini ölçerek depresif benzeri bir durumun gelişimini değerlendirmek için uygun bir modeli temsil eder. Yüzmeden önce tedavi edilen belirli fare suşları veya fareler, strese karşı esneklik veya kırılganlık ve davranışsal umutsuzluğun indüksiyonu açısından değerlendirilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm deneyler, Avrupa kılavuzları (AB 2010/63) ile uyumlu olarak ve Alman hayvan koruma yasası (TierSchG), FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php), laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için ulusal hayvan refahı kuruluşu GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html) kılavuzu uyarınca gerçekleştirilmiş ve Freiburg Üniversitesi hayvan refahı komitesi ve Comite d'Ethique en Matiere d'Experimentation Animale de Strasbourg (CREMEAS, CEEA35) ve yerel makamlar. 10-14 haftalık (70-98 doğum sonrası gün, PND) C57Bl6N vahşi tip farelerin her iki cinsiyeti de vahşi tip (WT) belirtilen deneyler için kullanıldı. Strese dirençli bir çizgi olarak, ön beyin nöronal CaMKII promotörü altında adenozin A1 reseptörlerinin ekspresyonunun arttığı transgenik fare hattı kullanıldı9,15. Deneylerden sonra, fareler servikal çıkık tarafından kurban edildi.
1. Hazırlık
- Kapsamlı deneysel planlama da dahil olmak üzere bir hayvan araştırma lisansı alın.
- Varış: Varışta, CDM'yi gerçekleştirmek için hayvanları hayvan tesisinde büyütün. Hayvanlar harici bir tedarikçiden satın alınırsa, yeni ortama uyum sağlamaları için en az 2 hafta bekleyin.
- Barınma: Hayvanları barındırmak için, ek stresi önlemek için kafeslerin maksimum sayıda hayvanla meşgul olmadığından emin olun. Barınma koşullarının uluslararası fare muhafazası tavsiyelerine uygun olduğunu garanti edin (daha fazla bilgi için bkz.22) ve bunları her zaman sürekli olarak koruyun.
NOT: En önemli standart muhafaza koşulları, saatte 25-120 hava değişimine sahip ayrı ayrı havalandırılan kafesleri, 12 saat açık-karanlık döngüsünü, mümkün olduğunca sabit sıcaklığı (en azından 20-24 °C arasında sabit), mümkün olduğunca kararlı nemi (en az% 45 -% 65 arasında), kemiren malzeme ve barınak mevcut, bireysel muhafaza yok. - Zaman noktası: Tüm denemeleri günün aynı saatinde gerçekleştirin.
NOT: Gündüz vaktinin CDM üzerindeki etkisini doğrulamak için doğrudan bir değerlendirme yapılmamıştır, ancak depresif benzeri durumları değerlendiren davranış testlerinin çoğu, günün saatine bağlı olarak farklılıklar göstermektedir23,24,25 ve gündüz vaktinin de CDM'yi etkilemesi muhtemeldir. - İç içe geçme malzemesi: İç içe geçme malzemesini minimuma indirin. Kafeste çalışan tekerlekler vb. bulunmadığından emin olun.
NOT: Zenginleştirilmiş ortam, depresif bir durumun indüklenmesini önler. - Grup kompozisyonu: Hayvanların tüm deney boyunca aynı grupta kalmasına izin verin. Dişi fareleri farklı litrelerden bile bir araya getirin; erkek fareleri çöp arkadaşı erkek hayvanlarla birlikte gruplandırın. Yaklaşan saldırganlık nedeniyle, özellikle erkeklerde, ısırma ve berberlik bir sorun haline gelebilir, bu nedenle grup kompozisyonuna özel önem verin. Tek konuttan kaçının, çünkü yoksunluk önemli bir ek stres kaynağıdır.
- Hayvanlar: Belirli farklılıklar gözlenmesine rağmen farklı fare suşları kullanın9,10. Sık kullanılan bir fare suşu C57Bl6N. Eşleştirilmiş istatistiksel analiz yapmak için fareleri etiketleyin (bkz. adım 3.2.4).
- Hayvan cinsiyeti: Hem erkek hem de dişi fareleri eşit olarak kullanın.
- Hayvan yaşı: Hayvanların en az 10 haftalık (70 PND) yaşında olduğundan emin olun. Yüzmenin neden olduğu yorgunluk nedeniyle genç hayvanları kullanmayın.
- Ekipman: En az 2 L kapasiteli, 24-26 cm çapında ve minimum 30 cm yüksekliğinde şeffaf bir cam silindir / beher kullanın. Diğer gereksinimler arasında su sıcaklığını kontrol etmek için bir termometre, kağıt havlular, kırmızı ışık ısıtma lambası / ısıtma paspası veya karşılaştırılabilir ısıtma kaynağı, zamanlayıcı, kronometre, sessiz ortam bulunmaktadır. Çevrimdışı analiz ve dokümantasyon için yüzme oturumlarını videoya kaydedin. Tarih ve saatin, tek tek hayvan için bir kimlik kodu numarasıyla birlikte bantta/dosyada sürekli olarak görünür olduğundan emin olun. Dosyaları daha sonra analiz etmek ve daha fazla başvuru yapmak üzere saklayın. Analizi kolaylaştırmak için yukarıdan değil, cam silindirin yanından film.
2. İndüksiyon fazı
- Başlamadan önce
- Hayvanları ısırma veya berberlik belirtileri de dahil olmak üzere anormallikler için görsel olarak gözlemleyin. Bir hayvan herhangi bir minimal yaralanma gösteriyorsa, tüm kafesi deney serisinden hariç tutun. Deney sırasında yaralanmalar kötüleşeceğinden ve fareler stresin etkisi altında daha agresif hale geldikçe devam etmesini önleyeceğinden bir veterinerin herhangi bir zamanda hazır olduğundan emin olun.
- Deneye başlamadan önce her hayvanın vücut ağırlığını elde edin. Sık sık gözlenen kilo kaybının ilk vücut ağırlığının% 20'sini geçmediğinden emin olun. % 20'nin üzerinde kilo kaybı olan hayvanları hariç tutun ve varsayılan yüksek acı nedeniyle derhal ötenazi yapın.
- Bir beheri veya silindiri oda sıcaklığında (22-23 ° C) alttan en az 20 cm yüksekliğe kadar suyla doldurun ve su yüzeyi ile kabın üst sınırı arasında en az 10 cm bırakın.
- Performans
- Hayvanları yavaşça suya aktarın. Yüzme aşamasında, boğulmayı önlemek için hayvanı sürekli gözlem altında tutun. Hayvanın deneyciyi göremediği bir konumdan gözlemleyin (örneğin, yandaki bir odadan video gözlemi).
- Deneyin başında bir kronometre ayarlayın. Hayvanları 10 dakika sonra kuyruklarını tutarak sudan çıkarın. Onları bir kağıt havluyla nazikçe kurutun ve bir ısıtma ışığının altına veya bir ısıtma paspasının üzerine koyun.
- Bir seferde sadece bir hayvanı değerlendirin. Hayvanların birbirlerini görememelerini sağlayın (örneğin, barınak kafesini deney düzeneğinden bir oda bölücü ile ayırın).
- Zorunlu yüzme seansını art arda 5 gün boyunca her gün 10 dakika boyunca gerçekleştirin.
- Bitirme
- Beş yüzme seansından sonra hayvanları ev kafeslerine geri aktarın ve en az 2 gün dinlenmelerine izin verin. Daha sonra spesifik tedavi müdahalelerine başlayın.
3. Anti-depresif tedavinin değerlendirilmesi
- Zaman kursu
- CDM ile akut ve subkronik tedavileri değerlendirin. Bilimsel soruya bağlı olarak, indüksiyon aşaması ile okuma arasındaki dinlenme süresini uyarlayın.
- Ketaminin akut ve hızlı etkili potansiyelini değerlendirmek için, CDM'nin indüksiyon aşamasından sonra kısa bir dinlenme süresi (birkaç gün) seçin. Tedaviyi uygulayın (yani, intraperitoneal enjeksiyon) ve kısa bir süre sonra değerlendirmeyi (ek yüzme seansı veya farklı değerlendirme yöntemi) gerçekleştirin.
- Subkronik bir tedavinin etkilerini değerlendirmek için, tedavi süresini 4 haftaya kadar artırın (daha uzun tedavi süreleri için veri yoktur). Örneğin, indüksiyon aşamasından sonraki 4 hafta boyunca hayvanlara imipramin ile oral tedaviyi verin ve daha sonra değerlendirin.
- Depresif durumu, tedavi süresinin bitiminden hemen sonra, örneğin ertesi gün değerlendirmeye başlayın. Kontrol ve deneysel koşullar için her zaman aynı zaman dilimini seçin.
- Hareketsizlik süresi
- Kavram kanıtı
- Hareketsizlik süresini bir okuma yöntemi olarak kullanmak için, indüksiyon aşamasının her gününü ve bir kavram kanıtı sağlamak için test gününü değerlendirin (bkz. Şekil 1). Daha ileri deneysel seriler için, değerlendirmeleri 1. güne, 5. güne ve test gününe düşürün (bkz. Şekil 1C).
- Her deneyi videoya çekin. Deneysel koşullara kör olan iki eğitimli gözlemcinin analizi bağımsız olarak gerçekleştirmesine izin verin. Video analizi, deneycinin davranışı farklı bir odadan gözlemlemesini sağlar, böylece teste müdahaleyi en aza indirir (örneğin, ek materyaldeki video dosyasına bakın).
- Koşullar: Yüzme testi sırasında üç farklı davranış koşulunu gözlemleyin ve tanımlayın: mücadele, yüzme ve hareketsizlik. Çoğu araştırmacı hareketsizliğe odaklanır; mücadele ve yüzme arasında daha fazla ayrım nadiren yararlıdır ve analizin karmaşıklığını ve süresini önemli ölçüde arttırır.
- Mücadele: Hayvan aktif olarak tehdit edici durumdan kaçmaya çalışır. Bu, silindirin yan tarafını, kafası duvara ve tüm uzuvların hareketlerine doğru yönlendirilmiş olarak döşemeyi içerir. Su yüzeyi tipik olarak biraz çalkantılıdır.
- Yüzme: Hayvan en azından her iki arka pençesini de hareket ettirir ve su boyunca bir mesafe kat eder. Aktif olarak bir çıkış yolu arar, ancak geminin cam duvarının üstesinden gelmeye çalışmaz. Yüzme, pençeleri su yüzeyinin üzerine kaldırmayı içermez ve vücut genellikle silindirin duvarlarına paralel olarak yönlendirilir. Bu durumda, hayvanlar sıklıkla döner veya daireler halinde hareket eder.
- Hareketsizlik: Hayvan, donma benzeri bir konumda hareketsiz kalır ve hiç hareket etmez veya sadece kuyruğunu veya ön pençelerini başını su yüzeyinin üzerinde tutmak için hareket ettirir. Pasif yüzer dışında aktif olarak hiçbir mesafe kat edilmez ve ön pençelerin yönlendirilmiş hareketi gözlenmez.
- Izleme
- Çevrimdışı video kayıtlarını kullanarak değerlendirmeyi gerçekleştirin. İki bağımsız ve deneyimli sınav görevlisinin kör derecelendirmelerini kullanın ve iki derecelendirme arasındaki ortalamaları hesaplayın.
- İki değerlendiricinin sonuçları önceden belirlenmiş bir aralığın üzerinde farklılık gösteriyorsa derecelendirmeleri tekrarlayın. Farklı koşullar mücadele, yüzme ve hareketsizlik arasında sıklıkla değiştiği için fareleri sürekli olarak gözlemleyin.
- Odaklanmış bir aşamada (genellikle hareketsizlik) farenin suda kaldığı 10 dakika boyunca harcanan toplam süreyi ölçmek için bir kronometre kullanın. Devam eden zaman ölçümünü değiştirmeden önce yaklaşık bir saniyelik kısa bir gecikme süresi düşünün (örneğin; bir hayvan hareketsizlikte 20 saniye kalırsa ve yalnızca bir saniyeden az bir süre için bir kez hareket ederse ve başka bir 10 saniye boyunca hareketsizliğe geri dönerse, toplam hareketsizlik süresi 30 sn'dir).
- İstatistikler: Nispeten yüksek bireyler arası standart sapma nedeniyle (muhtemelen hiyerarşiye bağlı davranışın kafesten yüzme testine aktarılmasından kaynaklanır), daha sonra eşleştirilmiş (eşleştirilmemiş yerine) parametrik testler yapmak için hayvanları işaretleyin veya etiketleyin. Normallik dağılımını değerlendirin ve spesifik soruya bağlı olarak, farklı grupları karşılaştırmak için post-hoc t-testleri veya eşleştirilmiş t-testleri ile varyans analizi (ANOVA) yapın. Hareketsizlik sürelerinin mutlak değerlerini veya normalleştirilmiş değerler olarak analizi gerçekleştirin.
- Mutlak değerler: 1. günden 5. güne kadar hareketsizlik süresinin ve test günü için SEM'± ortalama değerlerini verin (bkz. Şekil 1A). 1. gün ve 5. gün için ortalama değerleri karşılaştırın, tercihen depresif bir durumun indüksiyonunu doğrulamak için eşleştirilmiş bir t-testi kullanın. 1. ve 5. günler arasında anlamlı bir fark varsa, 5. günün ortalama değerlerini test gününün ortalama sonuçlarıyla karşılaştırın. Bir deneydeki tipik bir grup büyüklüğünün 6 ila 10 hayvan arasında olduğundan emin olun ve vahşi tip hayvanlarda başlangıç çizgisi ve indüksiyon sonrası hareketsizlik süreleri arasında önemli farklılıklar bekleyin. Farklı grupları eşlenmemiş bir t-testi ile karşılaştırmak, temel farklılıklar nedeniyle mutlak değerler kullanılıyorsa zordur; bu nedenle, normalleştirilmiş değerler kullanın.
- Göreceli/Normalleştirilmiş değerler: Normalleştirme yoluyla farklı tedavi etkilerini 5. gündeki bireysel sonuçla karşılaştırın ve ardından değerleri 5. günün yüzdesi olarak ifade edin (bkz. Şekil 1B).
- Kontrol deneyleri
NOT: Yüzme performansı hareket ile ilişkili olabilir. Hiper-lokomotife neden olan maddeler yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir (yani, hareketsizlik süresinin azalması); ayrıca yatıştırıcı ajanlar hareketsizlik süresini yapay olarak artırabilir.- Yüzme analizini yapmadan önce bilinmeyen maddeler için hareketteki değişiklikleri değerlendirin. Açık Alan Testi'ni (OFT) ayrı bir hayvan grubunda en az 10 dakika boyunca kullanın.
- Test edilen bileşiğin, yüksek geçerliliğe sahip hareketsizlik süresi ölçümü yoluyla CDM okumasını etkileyebilecek spesifik olmayan hiper-lokomotif etkilerini tespit etmek için OFT'de CDM'de olduğu gibi aynı gözlem süresini (10 dakika) seçin.
- Önemli hiper-lokomotif etkiler durumunda, anti-depresif gücü değerlendirmek için yüzme seansını değerlendirmeyin, ancak farklı okuma yöntemleri kullanın (örneğin, sakkaroz tercihi, kuyruk süspansiyon testi, vb.).
- Kavram kanıtı
4. Depresif benzeri bir durumun gelişiminin değerlendirilmesi
- Depresif bir bozukluğun gelişimini değerlendirmek için, hareketsizlik zamanını ölçmek için indüksiyon aşamasının her gününü değerlendirin.
NOT: Bu durumda, her gün arasındaki hareketsizlik süresinin küçük bir artışı esnekliği tanımlarken, tedavi edilmemiş veya vahşi tip hayvanlara kıyasla daha güçlü ve daha erken bir artış, strese bağlı umutsuzluğa karşı gelişmiş bir savunmasızlığı temsil eder. Yüzme olayından önce fareleri tedavi ederek, önleyici müdahale veya transgenik fare çizgileri davranışsal umutsuzluğun gelişimi ile ilgili olarak değerlendirilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
CDM'nin indüksiyon aşamasının ilk yüzme seansında, fareler genellikle her ek yüzme seansında sürekli olarak yükselen 190 s ile 230 s arasında ortalama bir hareketsizlik süresi gösterir (Şekil 1A). Bu artış ilk 3 günde daha belirgindir ve son 2-3 gün içinde plato benzeri bir faza ulaşır. 5. günde ölçülen hareketsizlik süresi, 4 haftaya kadar sabit kalır ve bu da istikrarlı davranışsal umutsuzluğu gösterir. Bir müdahalenin antidepresan gücü, indüksiyon aşamasının son günü ile test günü arasında hayvanı tedavi ederek değerlendirilebilir. Yüzme seansları sırasında mutlak puanlama süresinin oldukça öznel olduğunu ve deneyciye, yaşa, cinsiyete ve kullanılan fare çizgisine bağlı olduğunu unutmayın. Bununla birlikte, oturumlar arasındaki göreceli fark, sadece küçük interrater farklılıkları ile oldukça kararlıdır.
Şekil 1'de çeşitli temsili tedaviler gösterilmiştir. Imipramin, uyku yoksunluğu ve ketamin, hareketsizlik süresini önemli ölçüde azaltırken, iyileşme uykusu ile birlikte uyku yoksunluğu, depresif benzeri fenotipte önemli bir değişiklik göstermedi. Bu sonuçlar, uygulanan tedavilerin anti-depresif gücü ile uyumludur ve insan hastalarda gözlenen etkilere benzer. Tedavi, içme suyu yoluyla 3 hafta boyunca 20 mg / kg / gün imipramin, testten 24 saat önce tek bir intraperitoneal enjeksiyonla 3 mg / kg ketamin alımını ve testten önce 6 saat boyunca uyku yoksunluğunu içeriyordu.
Araştırma sorusuna bağlı olarak, çeşitli temsiller görüntülenebilir. Mutlak değerlerin bir temsili gerçek bir veri genel bakışı sağlayabilir ve indüksiyon fazının ve tek bir tedavinin iyi bir şekilde değerlendirilmesini sağlar (Şekil 1A, D). Bununla birlikte, çeşitli tedavilerin farklılıkları doğrudan karşılaştırılamaz; bu nedenle her tedavi grubunun 5. günde hareketsizlik süresi ortalama değerleri farklıdır. Bu nedenle, bu durumda normalleştirilmiş ortalama değerlerin gösteriminin kullanılması önerilir (Şekil 1B). Alan sınırlamaları nedeniyle azaltılmış bir temsil seçilebilir (Şekil 1C). En azından 1. gün, 5. gün ve sınav gününün sonuçlarının gösterilmesinin zorunlu olduğunu unutmayın.
Şekil 1: Mutlak ve normalleştirilmiş değerlerle başarılı sonuçlar. (A) 30 farede depresif benzeri bir durumun başarılı bir şekilde indüklenmesi gözlemlenebilir. Her nokta, belirli bir günde tek bir hayvanın hareketsizlik süresini temsil eder ve çubuklar, test edilen hayvanların ortalama değerlerini temsil eder. Hareketsizlik süresi, indüksiyon fazının her günü (1. günden 5. güne kadar) ve test günü (noktalı çizgiden sonra) için tedavi olsun veya olmasın temsil edilir. Bu örnekte, 1. gün ile 2. gün arasında önemli bir artış gözlenebileceğini unutmayın. Bazı durumlarda, anlamlılık düzeyleri ilk olarak 1. gün ile 3. gün arasında elde edilir. Deneyin devamı için, 1. gün ile 5. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı bir artış zorunludur. Tipik tavan etkisine dikkat edin (4. ve 5. günler arasındaki farka kıyasla 1, 2 ve 3. günler arasındaki artış). 5. gün ile test günleri arasında, hayvanlar 4 hafta boyunca ev kafeslerinde, daha fazla tedavi (CDM) veya imipramin (Imip.) ile muamele edilmeden barındırıldı; uyku yoksunluğu (SD); uyku yoksunluğu ve iyileşme uykusu (RS) ve ketamin (Ket). (B) Her gün için bireysel hayvanların performansının örnek zaman seyri verilir. (C) Şekil 1A'da daha önce gösterilen aynı sonuçların normalleştirilmiş gösterimi. Her hayvanın ve günün hareketsizlik süresi, 5. günde karşılık gelen hareketsizlik süresine normalleştirildi ve yüzde olarak ifade edildi. Farklı grupların tedavi sonrası değerleri bu yaklaşım kullanılarak daha iyi görüntülenebilir ve karşılaştırılabilir. (D) 1. gün, 5. gün ve sınav günü (CDM) için normalleştirilmiş değerlerin gösterimi. Başarılı bir kavram kanıtı çalışmasından sonra, değerlendirme zaman noktaları birinci güne, beşinci güne ve test gününe düşürülebilir. Bu zaman noktalarına ihtiyaç vardır, çünkü başarılı bir indüksiyonu göstermek için 1. gün ile 5. gün arasında önemli bir artış gereklidir ve tedavi etkinliği hakkında bir açıklama yapmak için 5. günün test günüyle karşılaştırılması gerekir. (E) Üç farklı fare çizgisinin hareketsizlik süresinin karşılaştırılması: Wildtype (WT) başarılı bir indüksiyon gösterir; örnek bir esnek çizgi (RL), ilk üç günde ve test gününde depresyon benzeri davranışların önemli ölçüde azaldığını gösterir. Bonferroni post hoc testi ile tek yönlü ANOVA: ∗/#p < 0,05, ∗∗/##p < 0,01, ∗∗∗/###p < 0,001, ∗∗∗∗/####p < 0,0001. (#show difference to day 1, ∗ Şekil 1A,C'deki 5. günün ortalama değerlerine ve Şekil 1E'deki WT fare çizgisine olan farkı gösterir). Veriler SEM ± ifade edilmektedir. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Tüm 5 gün boyunca hareketsizlik süresinin değişmemesi durumunda (Şekil 2), uygulanan stres davranışı uygun şekilde değiştirememiştir ve hiçbir tedavi etkisi değerlendirilememiştir; hayvanların kurban edilmesi ve daha fazla kullanılmaması gerekir.
Şekil 2: Başarısız sonuçlar. Etkisiz bir indüksiyonun temsili şekilde gösterilmiştir. 1. gün ile 5. gün arasındaki hareketsizlik süresinde önemli bir artış olmadığını unutmayın. Bu nedenle, deneyin devamı için kriterlere ulaşılamamıştır ve daha fazla uzatma rasyonel değildir (bu durumda, sadece erkek fareler test edilmiştir ve geriye dönük incelemeden sonra, çöp arkadaşı olmadıkları bulunmuştur). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Hayvanların davranışsal umutsuzluğunun daha geniş bir görünümünü tanımlamak için daha fazla okuma yöntemi kullanılmalıdır. Çeşitli davranış testleri, elektrofizyolojik ölçümler ve strese bağlı değişikliklerin moleküler değerlendirmeleri mevcuttur. CDM, imipramin ve ketamin tedavisi, Burun-poke-Sakkaroz Tercih Testi (NPSPT) ve yama-kelepçe tekniği kullanılarak uzun süreli potansiyelin değerlendirilmesi ile Kuyruk Süspansiyon Testi (TST) için örnek sonuçlar Şekil 3'te verilmiştir. Bu sonuçlar, CDM indüksiyon fazının davranışsal umutsuzluğun indüksiyonu için genel bir araç olarak kullanılmasını teşvik eder. Kullanılan teknikler hakkında daha fazla bilgi için (TST, NPSPT, LTP-değerlendirmesi) bakınız9,10,17,20.
Şekil 3: CDM fareleri ile ek sonuçlar. (A) Kuyruk Süspansiyon Testinde CDM'nin etkilerinin örnek bir temsili. Fareler kuyrukları tarafından askıya alındı ve hareketsiz geçirilen zaman kaydedildi (metodolojik ayrıntılar için bkz. 9). Her nokta, tek bir hayvanın hareketsizlik süresini temsil eder ve çubuklar, test edilen hayvanların ortalama değerlerini temsil eder. Bonferroni post hoc testi ile tek yönlü ANOVA: ∗∗∗p < 0.001. Veriler, SEM'± araçları olarak ifade edilmektedir. (B) CDM farelerde yakın zamanda kurulan burun pokes sakkaroz tercih testinin temsili sonuçları. Bu görevde, sakkaroz tercihi, sakkaroz şişesine ulaşmak için kademeli olarak artan çabayla ölçülmüştür (burun iğnesi sayısı) (metodolojik ayrıntılar için bkz. 10). CDM'de sakkaroz tercihinin azaldığını ve CDM ile kontrol fareleri arasındaki farkın, farelerin tatlı çözeltiyi içmek için başvurmaları gereken çabayla (Nspk1-7 olarak belirtilen her gün burun pokeslerinin ortalama değerleri) kademeli olarak arttığını unutmayın. Bonferroni post hoc testi ile iki yönlü ANOVA: ∗∗p 0.01 <, ∗∗∗p < 0.001. Uzun süreli sinaptik plastisitedeki CDM'±ye bağımlı değişiklikler, WT farelerinin hipokampal beyin dilimlerinde ilişkisel bir LTP indüksiyon protokolünün uygulanmasından sonra EPSP'lerin ortalama değerlerinin değişmesi olarak sunulmaktadır. Veriler CA3-CA1 sinapsının uyarılması ile elde edildi (ayrıntılar için bakınız17,20). Eşlenmemiş t-testi, ∗∗p < 0.01, veriler SEM ± araç olarak ifade edilmektedir.
Ek Materyal. Bu Dosyayı indirmek için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
CDM modeli, yeni müdahalelerin anti-depresif gücünü test etmek için ilgili ve yerleşik bir modeli temsil eder ve depresyonun patofizyolojisini aydınlatmak için moleküler veya elektrofizyolojik deneyler için uzun bir zaman penceresi açar. Özellikle depresyon benzeri bir durumu değerlendirmek için diğer testlerle birleştirildiğinde, CDM yüksek bir yüze ve kavram geçerliliğine sahiptir. Subkronik stresi ve indüksiyon için edinilmiş çaresizliği birleştirir ve uzun süreli depresif benzeri bir durum üretir. Klasik antidepresanların tek uygulamasına duyarsızdır, ancak subkronik uygulamaya cevap verir ve bu nedenle insanlardaki durumu taklit eder. 4 haftalık bir zaman aralığında, farklı antidepresan sınıflarından, invaziv olmayan beyin stimülasyonuna, uyku yoksunluğundan hızlı etkili antidepresanlara kadar birçok farklı antidepresif müdahale etkinlik göstermektedir9,10,11. Ayrıca, indüksiyon fazı sırasında hareketsizlik süresinin ölçülmesi, indüksiyon aşamasından önce tedavi edilen transgenik hayvanların veya farelerin test edilmesi durumunda, stres esnekliği veya kırılganlığının bir göstergesi olarak kullanılabilir. Sonuç olarak, CDM maliyet, süre, standardizasyon ve laboratuvarlar arasında tekrarlanabilirlik açısından ekonomiktir. Performans oldukça basit görünse de - "bir fareyi bir su kabına düşürür ve 10 dakika sonra çıkarırsınız" - makul ve istikrarlı sonuçlar elde etmek için akılda tutulması gereken birkaç kritik nokta vardır. Çoğu sorun, hazırlık veya analiz sırasında yetersiz doğruluktan kaynaklanmaktadır.
Yaygın olarak karşılaşılan bir sorun, farelerin, özellikle erkeklerin, indüksiyon aşamasında hareketsizlik süresinde önemli bir artış göstermemesidir. Bu durumlarda, indüksiyon başlamadan önce fareler zaten gerilmiş olabilir; Bu nedenle, yüzme protokolü sırasında ek stres, umutsuzluğun ilgili bir artışına neden olmaz. Hareketsizlik süresinin tavan etkisi olduğunu unutmayın, çünkü 1. ve 2. günler arasındaki artış sırasıyla 2. ve 3. günlerden daha büyüktür. 3. günden sonra, genellikle, daha fazla önemli bir artış beklenemez. Aşırı temel stresin yaygın nedenleri, hayvanların yakın zamanda taşınması veya doğada asla meydana gelmeyen bir durum olan ergen / yetişkin erkek hayvanların birlikte yaşamasını içerebilir. Bu nedenle, deneyci dikkatli olmalı ve her zaman hayvanların çöp arkadaşı olduklarını, yeni çevreye alışmak için yeterli zamanları olduğunu ve deney başlamadan önce ısırma veya berberlik belirtisi olmadığından emin olmalıdır. Ayrıca, hayvanlar her gün tartılmalı ve kilo kaybı başlangıçtaki vücut ağırlığının% 20'sini geçmeyecek şekilde kontrol edilmelidir. Tekrarlayan yüzmenin yorucu olması ve vücut ağırlığını koruyamayan hayvanların bu yorgunluktan çok fazla acı çekmesi nedeniyle daha büyük bir kilo kaybı kritik olarak kabul edilir. Burada kritik bir nokta, yorgunluktan çok fazla acı çeken hayvanların muhtemelen test sırasında 10 dakika boyunca yüzememesi veya mücadele edememesidir. Bu hayvanların hareketsizlik süreleri analiz edildiğinde, fiziksel yorgunluk nedeniyle yanlış bir olumsuz sonuç gösterme eğilimindedirler.
Bazen özellikle daha uzun tedavi süreleri gerektiğinde ortaya çıkan bir diğer sorunlu durum ise test değerlendirmesinde hareketsizlik süresinin kendiliğinden azalmasıdır. 4 hafta sonra, hareketsizlik süresi genellikle indüksiyon periyodunun bitiminden 2 gün sonra yapılan değerlendirmelere kıyasla azalır (N.B. bu, farklı bir zaman ölçeğine sahip olsa da, depresyondaki atakların genellikle kendi kendini sınırladığı insanlarda duruma karşılık gelir). Bu tuzağı en aza indirmek için, hayvanın ev kafesine gereksiz bir yuvalama malzemesi uygulanmaması garanti edilmelidir, bu da etkili bir antidepresif müdahale (zenginleştirilmiş ortam) olarak kabul edilebilir. Ayrıca, grup büyüklüğündeki bir artış varyansı azaltmaya yardımcı olabilir. Gerekirse, yukarıda açıklanan standart protokolün bir modifikasyonu olarak ek bir yüzme seansı eklenebilir. Örneğin, art arda 7 günde beş ila yedi yüzme seansı arasında bir artış yapılabilir ve hayvanların daha istikrarlı bir depresif durumuna neden olabilir. Aşırı yorgunluğu önlemek için bireysel yüzme seansının süresinin daha da arttırılması önerilmez.
Analiz edilecek en mantıklı zaman dilimi hakkında bilimsel topluluk içinde bir anlaşma yoktur. Bazı gruplar 10 dakikanın tamamını önemli görürken9,10, diğerleri ilk birkaç dakika içindeki davranışın akut stres durumunu temsil ettiğini ve yalnızca son 4 dakika veya 6 dakika 18'i analiz ettiğini savunuyor. İkinci varsayım esas olarak klasik FST'nin değerlendirme sürecindeki yaygın uygulamadan türetilmiştir. CDM'de analiz edilecek en rasyonel zaman dilimi sorusunu ele alan deneysel kanıtlar eksiktir. Çeşitli üst düzey yayınlar, CDM9,10'daki tüm 10 dakikanın analizini kullandı.
Otomatik video analizi için ticari olarak temin edilebilen yazılımların sayısının artmasına rağmen, hiçbir kurulum eğitimli bir gözlemcinin yerini almak için yeterli doğruluk göstermemiştir. Çoğu yazılım, sudaki farelerin hareketlerinin izlenmesine dayanır ve yukarıdan bir kamera konumu gerektirir. Yetenekli insanlar tarafından yapılan değerlendirmeler, sadece hareketin değil, aynı zamanda pençe hareketlerinin yoğunluğu da dahil olmak üzere daha karmaşık hareketlerin niyetinin de değerlendirilebileceği avantajına sahiptir. Örneğin, fareler sıklıkla vücutlarının etrafında dönerek veya başlarını suyun üzerinde tutmak için ince kuyruk hareketleriyle hareket ederler, bu da genellikle yüzme olarak izler. Başka bir örnek, kısa mesafeden sık sık dürtülen burun da dahil olmak üzere damarın cam duvarına doğru yönlendirilen harekettir. Dikey hareketlerle kaçma niyetine rağmen, yazılım sık sık az hareket kabiliyeti nedeniyle hareketsizliği izler. Bununla birlikte, doğru ve güvenilir değerlendirmeler zor ve zaman alıcı olmaya devam etmektedir. Bir değerlendiricinin deneyimli bir deneyci tarafından eğitilmesi ve ortak tanımları ve belirsizlikleri tartışmak için iki bağımsız değerlendirici tarafından örnek videoların ortak değerlendirmelerinin hazırlanması önerilir. Ayrıca, CDM'li bir laboratuvarın ilk sonuçları, diğer gruplardan daha önce yayınlanmış sonuçlarla karşılaştırılmalıdır.
CDM'yi kullanan araştırmacılar, artan hareketsizliğin, farelerin kaçınılmaz ama geçici stresli bir duruma karşı oldukça akıllı bir son enerji tasarrufu öğrenilmiş reaksiyonu olduğu fikrini sık sık deneyimleyebilirler. Bize göre, bu farelerin bilişsel esnekliğini abartıyor; ancak, hareketsizlik süresinden bağımsız olarak depresif bir durumun daha fazla değerlendirilmesinin gerekliliğini vurgulamaktadır. Ayrıca, Kronik Hafif Stres testi olarak depresyonun diğer köklü hayvan modellerinin de benzer sonuçlar ürettiği söylenebilir; ve depresif bir durumun veya güçlü stresörlerin hem insanlarda hem de hayvanlarda öğrenmeyi engellemesi, arttırmaması17,20,26,27,28,29,30.
Hayvanların yükü, hayvan araştırma uygulamalarında genellikle yüksek ila aşırı olarak derecelendirilir. Hayvan sayısını en aza indirgemek için deney serileri iyice planlanmalı ve yüzme seanslarından önce ve sonra hayvanlara özen ve saygıyla davranılmalıdır. Bununla birlikte, bazı ülkelerde, CDM için bir hayvan araştırma lisansı almak mümkün olmayabilir. CDM, çok çeşitli müdahalelerin anti-depresif etkinliğinin değerlendirilmesine ve nispeten stabil bir depresif durumun indüklenmesine izin verir. İnsanlarda majör depresif bozukluğun heterojenliği ve karmaşıklığı hiçbir hayvan modelinde çoğaltılamaz. Depresyonun çoğu hayvan modeli, çocukluk çağı yoksunluğunun, karmaşık öğrenme tarihinin ve / veya sosyokültürel risk faktörlerinin de önemli göründüğü insanlarda mutlaka geçerli olmayan farelerde strese bağlı / travma benzeri deneyimlere dayanmaktadır. Bu nedenle, depresyonun fare modelleri oldukları gibi kabul edilmelidir: oldukça karmaşık bir bozukluk için basitleştirilmiş bir model. Bununla birlikte, yeterince gerçekleştirilirse ve çoklu okuma yöntemleri kullanılırsa, CDM depresyon araştırmalarında yeni içgörüler ve hedefler arayışında uygun bir araçtır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.
Acknowledgments
Bu çalışma, Freiburg Üniversitesi Kliniği, Psikiyatri ve Psikoterapi Bölümü ve Berta-Ottenstein Klinisyen Bilim İnsanları Programı'nın (SV'ye) iç fonları tarafından finanse edildi. TS, Tıbbi Araştırma Vakfı (FRM) (AJE201912009450) ve Strazburg Üniversitesi İleri Araştırmalar Enstitüsü (USIAS) (2020-035) ve Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Fransa hibeleri tarafından finanse edilmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Beaker, 2000 mL | Kimble Kimax | 14000-2000 | any vessel >2000ml and diameter of 24-26 cm possible |
| Digital Thermometer | Hanna Instruments | 846-4708 | any digital thermometer possible |
| Digitalwaage 200 g Dipse | DIPSE | tp200 | any digital scale possible |
| Lenovo ThinkCentre V50a-24IMB AiO 11FJ00DVGE - 60,5 cm | Lenovo | A 908278 | any standard Personalcomputer possible |
| Logitech PTZ Pro | Logitech | 1000005246 | any high resolution camera possible |
| Stopwatch ROTILABO | Carl Roth | L423.1 | any stopwatch possible |
| Timer ROTILABO | Carl Roth | A802.1 | any timer possible |
References
- James, S. L., et al. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 354 diseases and injuries for 195 countries and territories, 1990-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017. The Lancet. 392 (10159), 1789-1858 (2018).
- Aleman, A., Denys, D. Mental health: A road map for suicide research and prevention. Nature. 509 (7501), 421-423 (2014).
- Greenberg, P. E., Fournier, A. -A., Sisitsky, T., Pike, C. T., Kessler, R. C. The economic burden of adults with major depressive disorder in the United States (2005 and 2010). The Journal of Clinical Psychiatry. 76 (2), 155-162 (2015).
- Nestler, E. J., Hyman, S. E.
- Porsolt, R. D., Le Pichon, M., Jalfre, M. Depression: a new animal model sensitive to antidepressant treatments. Nature. 266 (5604), 730-732 (1977).
- Can, A., et al. The mouse forced swim test. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3638 (2012).
- Chatterjee, M., Jaiswal, M., Palit, G. Comparative evaluation of forced swim test and tail suspension test as models of negative symptom of schizophrenia in rodents. ISRN Psychiatry. 2012, 595141 (2012).
- Reardon, S. Depression researchers rethink popular mouse swim tests. Nature. 571 (7766), 456-457 (2019).
- Serchov, T., et al. Increased signaling via adenosine A1 receptors, sleep deprivation, imipramine, and ketamine inhibit depressive-like behavior via induction of Homer1a. Neuron. 87 (3), 549-562 (2015).
- Holz, A., et al. Enhanced mGlu5 signaling in excitatory neurons promotes rapid antidepressant effects via AMPA receptor activation. Neuron. 104 (2), 338-352 (2019).
- Sun, P., et al. Increase in cortical pyramidal cell excitability accompanies depression-like behavior in mice: A transcranial magnetic stimulation study. Journal of Neuroscience. 31 (45), 16464-16472 (2011).
- Hellwig, S., et al. Altered microglia morphology and higher resilience to stress-induced depression-like behavior in CX3CR1-deficient mice. Brain, Behavior, and Immunity. 55, 126-137 (2016).
- Serchov, T., Heumann, R., van Calker, D., Biber, K. Signaling pathways regulating Homer1a expression: implications for antidepressant therapy. Biological Chemistry. 397 (3), 207-214 (2016).
- van Calker, D., Serchov, T., Normann, C., Biber, K. Recent insights into antidepressant therapy: Distinct pathways and potential common mechanisms in the treatment of depressive syndromes. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 88, 63-72 (2018).
- Serchov, T., et al. Enhanced adenosine A1 receptor and Homer1a expression in hippocampus modulates the resilience to stress-induced depression-like behavior. Neuropharmacology. 162, 107834 (2020).
- Quitkin, F. M., Rabkin, J. G., Ross, D., Stewart, J. W. Identification of true drug response to antidepressants. Use of pattern analysis. Archives of General Psychiatry. 41 (8), 782-786 (1984).
- Normann, C., et al. Antidepressants rescue stress-induced disruption of synaptic plasticity via serotonin transporter-independent inhibition of L-type calcium channels. Biological Psychiatry. 84 (1), 55-64 (2018).
- Zanos, P., et al. NMDAR inhibition-independent antidepressant actions of ketamine metabolites. Nature. 533 (7604), 481-486 (2016).
- Alboni, S., et al. Fluoxetine effects on molecular, cellular, and behavioral endophenotypes of depression are driven by the living environment. Molecular Psychiatry. 22 (4), 552-561 (2017).
- Niehusmann, P., et al. Coincidence detection and stress modulation of spike time-dependent long-term depression in the hippocampus. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 30 (18), 6225-6235 (2010).
- Schreiber, S. S., Tocco, G., Shors, T. J., Thompson, R. F. Activation of immediate early genes after acute stress. Neuroreport. 2 (1), 17-20 (1991).
- National centre for the replacement refinement and reduction of animals in research. , Available from: https://www.nc3rs.org.uk (2021).
- Loss, C. M., et al. Influence of environmental enrichment vs. time-of-day on behavioral repertoire of male albino Swiss mice. Neurobiology of Learning and Memory. 125, 63-72 (2015).
- Walker, W. H., Walton, J. C., DeVries, A. C., Nelson, R. J. Circadian rhythm disruption and mental health. Translational Psychiatry. 10 (1), 1-13 (2020).
- Merrow, M., Spoelstra, K., Roenneberg, T. The circadian cycle: daily rhythms from behaviour to genes. EMBO Reports. 6 (10), 930-935 (2005).
- Holderbach, R., Clark, K., Moreau, J. -L., Bischofberger, J., Normann, C. Enhanced long-term synaptic depression in an animal model of depression. Biological Psychiatry. 62 (1), 92-100 (2007).
- Nissen, C., et al. Learning as a model for neural plasticity in major depression. Biological Psychiatry. 68 (6), 544-552 (2010).
- Kuhn, M., et al. State-dependent partial occlusion of cortical LTP-like plasticity in major depression. Neuropsychopharmacology. 41 (6), 1521-1529 (2016).
- Schwabe, L. Stress and the engagement of multiple memory systems: integration of animal and human studies. Hippocampus. 23 (11), 1035-1043 (2013).
- Ballan, R., Gabay, Y. Does acute stress impact declarative and procedural learning. Frontiers in Psychology. 11, 342 (2020).
