Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Роза Бенгал-Опосредованная Фотодинамическая Терапия для ингибирования Candida albicans

Published: March 24, 2022 doi: 10.3791/63558
Automatic Translation
*1,2, *3,4, 5, 3,6, 7, 7, 3, 3,8,9
1Institute of Clinical Medicine, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Ophthalmology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Dermatology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 5Department of Dermatology, Fu Jen Catholic University Hospital, Fu Jen Catholic University, 6Institute of Clinical Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 7School of Medicine, National Cheng Kung University, 8Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 9Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University
* These authors contributed equally

Summary

Растущая заболеваемость лекарственно-устойчивыми Candida albicans является серьезной проблемой здравоохранения во всем мире. Антимикробная фотодинамическая терапия (aPDT) может предложить стратегию борьбы с лекарственно-устойчивыми грибковыми инфекциями. Настоящий протокол описывает опосредованную розой бенгальскую эффективность aPDT на штамме C. albicans in vitro с множественной лекарственной устойчивостью.

Abstract

Инвазивная инфекция Candida albicans является значительной оппортунистической грибковой инфекцией у людей, потому что она является одним из наиболее распространенных колонизаторов кишечника, рта, влагалища и кожи. Несмотря на доступность противогрибковых препаратов, смертность от инвазивного кандидоза остается ~50%. К сожалению, заболеваемость лекарственно-устойчивымИ C. albicans растет во всем мире. Антимикробная фотодинамическая терапия (aPDT) может предложить альтернативное или адъювантное лечение для ингибирования образования биопленки C. albicans и преодоления лекарственной устойчивости. Роза бенгальская (RB)-опосредованная aPDT показала эффективное уничтожение клеток бактерий и C. albicans. В данном исследовании описана эффективность RB-aPDT на C. albicans с множественной лекарственной устойчивостью. Самодельный зеленый светодиодный (LED) источник света предназначен для выравнивания с центром колодца 96-луночной пластины. Дрожжи инкубировали в колодцах с различными концентрациями RB и освещали различными колебаниями зеленого света. Эффекты уничтожения были проанализированы методом разбавления пластин. При оптимальном сочетании света и RB было достигнуто 3-логарифмическое торможение роста. Был сделан вывод о том, что RB-aPDT может потенциально ингибировать лекарственно-устойчивые C. albicans.

Introduction

C. albicans колонизируется в желудочно-кишечном тракте и мочеполовом тракте здоровых людей и может быть обнаружен как нормальная микробиота примерно у 50 процентов лиц1. Если между хозяином и патогеном создается дисбаланс, C. albicans способен вторгаться и вызывать заболевание. Инфекция может варьироваться от локальных инфекций слизистой оболочки до полиорганной недостаточности2. В многоцентровом обсервационном исследовании в США около половины изолятов пациентов с инвазивным кандидозом в период с 2009 по 2017 год составляют C. albicans3. Кандидемия может быть связана с высокими показателями заболеваемости, смертности, длительным пребыванием в стационаре4. Центры США по контролю и профилактике заболеваний сообщили, что около 7% всех протестированных образцов крови Candida устойчивы к противогрибковому препарату флуконазол5. Появление лекарственно-устойчивых видов Candida вызывает обеспокоенность по поводу разработки альтернативной или адъювантной терапии антимикотическими средствами.

Антимикробная фотодинамическая терапия (aPDT) включает активацию определенного фотосенсибилизатора (PS) светом на пиковой длине волны поглощения PS6. После возбуждения возбужденный PS передает свою энергию или электроны соседним молекулам кислорода и возвращается в основное состояние. Во время этого процесса образуются активные формы кислорода и синглетный кислород, которые вызывают повреждение клеток. aPDT широко используется для уничтожения микроорганизмов с 1990-х годов7. Одним из преимуществ aPDT является то, что множественные органеллы повреждаются в клетке синглетным кислородом и/или активными формами кислорода (АФК) во время облучения; таким образом, устойчивость к aPDT не была обнаружена до сегодняшнего дня. Более того, недавнее исследование показало, что бактерии, которые выжили после aPDT, стали более чувствительными к антибиотикам8.

Источники света, используемые в aPDT, включают лазеры, металлические галогенные лампы с фильтрами, ближний инфракрасный свет и светодиоды (LED)9,10,11,12. Лазер обеспечивает высокую световую мощность, обычно превышающую 0,5 Вт /см2, что позволяет доставлять высокую дозу света за очень короткое время. Он широко используется в тех случаях, когда более длительное время лечения неудобно, например, aPDT для инфекций полости рта. Недостатком лазера является то, что его размер пятна освещения небольшой, от нескольких сотен микрометров до 10 мм с рассеивателем. Кроме того, лазерное оборудование стоит дорого и нуждается в специальной подготовке для работы. С другой стороны, площадь облучения металлической галогенной лампы с фильтрами относительно больше13. Однако лампа слишком здоровенная и дорогая. Светодиодные источники света стали основным направлением aPDT в дерматологической области, потому что они небольшие и менее дорогие. Площадь облучения может быть относительно большой при массивном расположении светодиодной лампочки. Все лицо может быть освещено одновременно9. Тем не менее, большинство, если не все, светодиодные источники света, доступные сегодня, предназначены для клинического использования. Он может не подходить для экспериментов в лаборатории, потому что он занимает место и дорог. Мы разработали недорогой светодиодный массив, который очень мал и может быть вырезан и собран из светодиодной ленты. Светодиоды могут быть установлены в различных компоновках для различных экспериментальных конструкций. Различные условия aPDT могут быть выполнены в 96-луночной плите или даже 384-луночной пластине в одном эксперименте.

Роза бенгальская (RB) является цветным красителем, широко используемым для улучшения визуализации повреждений роговицы в глазах человека14. RB-опосредованный aPDT показал убийственное воздействие на золотистый стафилококк, Escherichia coli и C. albicans с примерно сопоставимой эффективностью с эффективностью Toluidine blue O15. Это исследование демонстрирует метод проверки влияния RB-aPDT на C. albicans с множественной лекарственной устойчивостью.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Подготовка системы aPDT

  1. Вырежьте четыре зеленых светодиода (СВЕТОДИОДЫ) из светодиодной ленты (см. Таблицу материалов) и выровняйте их с четырьмя колодцами 96-луночной пластины (рисунок 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Светодиоды были расположены в массиве 4 x 3. Задняя часть светодиода была прикреплена к радиатору для рассеивания тепла во время облучения.
  2. Измерьте скорость флюенса11 светодиода при 540 нм с помощью измерителя мощности света (см. Таблицу материалов). Смотрите дополнительный рисунок 1 , чтобы убедиться, что скорость плавного звучания светодиода составляет 510-560 нм.
  3. Поставьте электрический вентилятор рядом с пластиной во время облучения для поддержания постоянной температуры (25 ± 1 °C)11. См. дополнительный рисунок 2 , чтобы убедиться, что постоянная температура среды поддерживается во время облучения.

2. Культивирование дрожжевой формы C. albicans

ПРИМЕЧАНИЕ: Для экспериментов16 используется C. albicans с множественной лекарственной устойчивостью (BCRC 21538/ATCC 10231), устойчивая к большинству противогрибковых препаратов, включая флуконазол.

  1. Определение чувствительности к антимикотическому препарату методом дисковой диффузии следует из ранее опубликованного отчета17.
  2. Выращивают C. albicans в дрожжевых, гифовых и псевдогифайных формах в зависимости от микроэкологической среды18.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Гифы и псевдогифаи формы трудны для точного расчета. Форма дрожжей может быть точно рассчитана под микроскопом или с помощью проточной цитометрии. Температура во время роста клетки определяет ее морфологию. При комнатной температуре (25 °C) почти все клетки имеют дрожжевую форму. Короткая 4-часовая инкубация C. albicans при 30 °C не повлияла на его морфологию дрожжей.

3. aPDT на планктонных C. albicans

  1. Изолируйте одну колонию C. albicans из агаровой пластины стерильной петлей и добавьте ее в 3 мл дрожжевого экстракта пептон декстрозы (YPD) (см. Таблицу материалов) в стерилизованной стеклянной трубке.
    1. Инкубируют трубку при 25 ± 1 °C в течение ночи (14-16 ч) в инкубаторе со скоростью вращения 155 об/мин для расширения C. albicans и поддержания грибка в дрожжевой форме для точной количественной оценки.
  2. Разбавляют культуру на ночь со средним значением OD600 около 0,5 при 30°C и вращают со скоростью 155 об/мин в течение 4 ч для достижения фазы роста бревна C. albicans.
  3. Снова разбавьте культуру логарифмической фазы свежей средой СЛД до значения OD600 0,65 (около 1 x 107 колониеобразующих единиц, КОЕ/мл). Подтверждают конечную концентрацию методом серийного разбавления на агаровой пластине8.
  4. Приготовьте стандартный раствор (4%) розы бенгальской (RB), растворив порошок в 1x PBS. Фильтруйте и стерилизуйте фильтром 0,22 мкм и храните при температуре 4 °C в темноте. Конечная рабочая концентрация РБ составляет 0,2%.
  5. Добавьте 111 мкл 2% RB к 1 мл log-phase C. albicans в 1,5 мл микроцентрифужной трубки и кокультуру в разные моменты времени (0, 15 и 30 мин) при комнатной температуре, чтобы понять поглощение RB в клетках (рисунок 2).
  6. Промыть сокультуру три раза 1 мл 1x PBS с центрифугированием при 16 100 x g в течение 2,5 мин при комнатной температуре.
    ПРИМЕЧАНИЕ: aPDT содержит четыре различных условия: абсолютный контроль (отсутствие воздействия света, отсутствие RB), контроль темноты (нет света, но инкубируется с RB), управление светом (подвергает свету без RB), aPDT (подвергает свету в присутствии RB).
  7. Повторно суспендируйте C. albicans в 1 мл 1x PBS и распределите их по трем различным скважинам в 96 луночной пластине для каждого условия. Выровняйте колодцы со светодиодной решеткой после промывки.
  8. В светлых группах включите электрический вентилятор и свет.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Различная плавность (Дж/см2) может быть достигнута путем воздействия на скважины различных периодов времени. Например, 16,7-минутная экспозиция света достигает 10 Дж /см2 с светодиодной лампочкой 10 мВт /см2 .
  9. После облучения добавляют 20 мкл раствора кокультуры из одной лунки в центрифужную трубку объемом 1,5 мл, содержащую 180 мкл 1x PBS, чтобы получить 10-кратное разведение. Далее разбавляют десять раз, впоследствии следуя тому же методу.
  10. Нанесите три капли по 20 мкл каждого серийного разбавления на один квадрант агаровой пластины YPD, чтобы достичь счетных колоний пластины. Рассчитайте КОЕ/мл, умножив колонии на коэффициенты разбавления3.

4. Статистический анализ

  1. Анализ собранных данных с помощью графического и статистического программного обеспечения (см. Таблицу материалов).
  2. Отображение данных по среднему значению ± стандартной погрешности среднего значения. Выполните двусторонний ANOVA-анализ дисперсии8 для оценки существенных различий между различными условиями тестирования.
  3. Выполните множественные сравнительные тесты Tukey для парных сравнений8. Для каждого отдельного лечения выполните не менее трех независимых экспериментов. Рассмотрим p-значение < 0,05 статистически значимым.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

На рисунке 1 показана система aPDT, используемая в настоящем исследовании. Поскольку высокие температуры могут вызвать значительную гибель клеток, светодиодная решетка охлаждается электрическим вентилятором, а во время облучения используется радиатор для поддержания постоянной температуры на уровне 25 ± 1 °C. Тепловой эффект можно сбрасывать со счетов. Наличие равномерного распределения света также является важным определяющим фактором для успешного aPDT; поэтому очень важно выровнять светодиодную лампочку к колодцу точно во время освещения. Из-за яркости светодиода солнцезащитные очки необходимо оборудовать перед включением света.

C. albicans окрашивают сразу же RB, что визуализируется красной флуоресценцией под флуоресцентной микроскопией (0 мин на рисунке 2). Видно, что RB входит в клетки зависимым от времени образом (рисунок 2). В исследовании использовалась 15-минутная инкубация RB, при которой через 15 минут большинство клеток окрашивались RB. Более высокая концентрация RB приводит к более сильной флуоресценции, производя больше свободных радикалов для уничтожения грибов. Тем не менее, это может также вызвать значительную гибель клеток в нормальных клетках; поэтому концентрация RB 0,2% обычно используется в клиниках. Таким образом, именно эта концентрация была выбрана в этом исследовании.

ФДТ включает в себя активацию RB светом. Когда активированный RB возвращается в свое основное состояние, он передает энергию и электроны соседнему кислороду для генерации свободных радикалов и синглетного кислорода, что приводит к гибели клеток. На рисунке 3 не показано гибели клеток при условии отсутствия облучения или отсутствия РБ. C. albicans ингибировали легким дозозависимым способом после облучения зеленым светом в присутствии 0,2% RB (рисунок 3). Воздействие на грибы зеленого света с 30 Дж /см2 привело к 4-логарифмическому (99,99%) ингибированию роста клеток.

Figure 1
Рисунок 1: Фотодинамическая система. (A) Зеленый светодиодный массив был прикреплен к металлическому теплоотводу для рассеивания тепла во время облучения. Электрический вентилятор был поставлен рядом с источником света, чтобы поддерживать постоянную температуру на уровне 25 ± 1 ° C. (B) Свет был включен. (C) Колодцы плиты из 96 скважин были выровнены с центром светодиода. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 2
Рисунок 2: Зависящее от времени исследование бенгальской розы, входящей в C. albicans. Ярко-полевые (A-D) и флуоресцентные изображения (E-H) C. albicans через 0-30 мин совместно культивируют с 0,2% розовой бенгальской (RB). (A) и (E) Контроль без совместного культивирования RB. (B) и (F) Клетки были немедленно окрашены 0,2% RB. (C) и (G) После 15 мин культивирования большинство клеток показали красную флуоресценцию, указывающую на RB внутри клеток. (D) и (H) Более сильная флуоресценция РБ была отмечена при 30-минутной инкубации. Шкала = 50 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 3
Рисунок 3: Эффекты антимикробной фотодинамической терапии на C. albicans с множественной лекарственной устойчивостью. Ингибирование роста клеток зависит от легкого флюенса. Подвергая C. albicans флюенсу 10 Дж/см2 , ингибировал рост клеток на 1,5 бревна, на 2 бревна с 20 Дж/см2 и на 4 бревна с 30 Дж/см2 соответственно в присутствии 0,2% розовой бенгалии. - RB, без инкубации Rose bengal; +RB, совместно культивируемый с розой бенгальской в течение 15 мин. Данные являются средствами ± SEM трех отдельных экспериментов, выполненных в двух экземплярах. Значения p указаны на рисунке (множественные сравнительные тесты Туки, двусторонняя ANOVA). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Дополнительный рисунок 1: Выходной спектр светодиодов. Скорость флюенса измеряли через каждые 2 нм от 510-560 нм с помощью измерителя мощности. Данные объединяются из двух независимых экспериментов с тройными измерениями. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Дополнительный рисунок 2: Температура среды во время облучения. Термопару вставляли в каждую скважину из 96-луночной пластины, заполненной бульоном 100 мкл для измерения температуры. Температура была постоянной при 25 ± 1 °C. Данные объединяются из дублированных экспериментов с тройными скважинами. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Обнадеживающие результаты клинического применения RB-PDT при грибковом кератите были зарегистрированы недавно19. Пик поглощения RB находится на уровне 450-650 нм. Для успешного aPDT важно определить скорость флюенса источника света. Высокая флюенс (обычно >100 Дж /см2) требуется для лечения раковых клеток, в то время как более низкая флюенс, как ожидается, будет лечить инфицированные поражения6. Высокая плавность означает длительное время воздействия, которое может быть непрактичным в клинических условиях. Для лечения микотического кератита в офтальмологическом сообществе20 согласовано 5,4 Дж/см2. Длительное инкубационное время РБ также неудобно для пациента получать лечение аПДТ. Таким образом, для дальнейших экспериментов было выбрано 15-минутное время инкубации.

Некоторые шаги имеют решающее значение для успешного эксперимента. Агаровые пластины, используемые для грибковой культуры, сушили в течение 15-20 мин в пластинчатой проточной кабине с включенным вентилятором для снижения влажности на поверхности. Влажная поверхность позволит потоку капель грибов смешиваться, предотвращая образование одной колонии.

Выполнение всех экспериментов при тусклом освещении жизненно важно для предотвращения фотоотбеливания RB. Электрическая цепь находилась в параллельном соединении, так что в случае разрыва в одной из цепей остальные приборы не пострадали. Если есть результаты, которые выходят за пределы других, массив может быть сначала проверен, чтобы убедиться, что все светодиодные лампы находятся в хорошем состоянии.

Одним из ограничений использования светодиодного источника света является его температурная зависимость. В светодиоде тепло не производится самой светодиодной лампочкой, а генерируется на полупроводниковом переходе внутри устройства9. Поскольку превышение светодиодов выше их номинального тока вызывает повышение температуры перехода, что в конечном итоге приводит к преждевременному выходу из строя лампочки, необходимо оснастить устройство металлическим радиатором, чтобы обеспечить подходящее охлаждение соединения. Еще одним ограничением нынешней конструкции светодиодной решетки является ограниченная область, освещенная каждой светодиодной лампочкой, которая вмещает только один колодец 96-луночной пластины. Если требуется большая площадь освещения, для достижения равномерного освещения необходимо другое расположение светодиодных ламп с соответствующими расстояниями выше или ниже пластины.

Преимуществами этой конструкции исследования являются простота и недорогая настройка фотодинамической системы для экспериментов aPDT. Его можно использовать в экспериментах, касающихся грибковых инфекций. Вирусы и бактерии также могут быть протестированы в одной системе. Светодиодная световая полоса может быть выбрана из другого цвета света, чтобы коррелировать с пиками поглощения различных фотосенсибилизаторов, начиная от видимого до ближнего инфракрасного спектра света. Их можно легко приобрести на рынке. Полоса может быть разрезана и собрана в различные массивы для выравнивания с 96-луночной пластиной для анализа с высокой пропускной способностью. Использование 96-луночной пластины позволяет одновременно использовать различные условия тестирования, чтобы сэкономить время и пространство в лаборатории.

В заключение, установленная система в этом исследовании проста, легка и универсальна для изучения различных фотодинамических эффектов на различные микроорганизмы и клетки.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Acknowledgments

Эта работа получила финансирование от Центра прикладной наномедицины, Национального университета Ченг Кунг от Программы Исследовательского центра избранных областей в рамках проекта «Ростки высшего образования» Министерства образования (MOE) и Министерства науки и технологий Тайваня [MOST 109-2327-B-006-005] до TW Wong. J.H. Hung признает финансирование от Национальной университетской больницы Чэн Кунг, Тайвань [NCKUH-11006018] и [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL microfuge tube Neptune, San Diego, USA #3745.x
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap Falcon, USA #352235
96-well plate Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan #16196
Aluminum foil sunmei, Tainan, Taiwan
Aluminum heat sink Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan BK-T220-0051-01 Disperses heat from the LED array.
Centrifuge Eppendorf, UK 5415R
Graph pad prism software GraphPad 8.0, San Diego, California, USA graphing and statistics software
Green light emitting diode (LED) strip Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan 2835 Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63
Incubator Yihder, Taipei, Taiwan LM-570D (R)
Light power meter Ophir, Jerusalem, Israel PD300-3W-V1-SENSOR,
Millex 0.22 μm filter Merck, NJ, USA SLGVR33RS
Multidrug-resistant Candida albicans Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan BCRC 21538/ATCC 10231 http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538
OD600 spectrophotometer Biochrom, London, UK Ultrospec 10
Rose Bengal Sigma-Aldrich, MO, USA 330000 stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium HIMEDIA, India M1363

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).
  2. Pappas, P. G., et al. Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).
  3. Ricotta, E. E., et al. Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017. Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).
  4. Koehler, P., et al. Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis. Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).
  5. Toda, M., et al. Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).
  6. Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. Daylight photodynamic therapy: an update. Molecules. 25 (21), 5195 (2020).
  7. Wainwright, M. Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT). Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).
  8. Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance. Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).
  9. Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
  10. Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit. Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).
  11. Wong, T. W., et al. Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light. Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).
  12. Stasko, N., et al. Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue. Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).
  13. Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).
  14. Feenstra, R. P., Tseng, S. C. Comparison of fluorescein and rose bengal staining. Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).
  15. Demidova, T. N., Hamblin, M. R. Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).
  16. Shahid, H., et al. Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities. Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).
  17. Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).
  18. Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition. Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).
  19. Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).
  20. Martinez, J. D., et al. Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study. Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).

Tags

Иммунология и инфекции выпуск 181
Роза Бенгал-Опосредованная Фотодинамическая Терапия для ингибирования <em>Candida albicans</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., … More

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., Lee, C. N., Chang, Y., Chang, R. Y., Huang, C. C., Wong, T. W. Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans. J. Vis. Exp. (181), e63558, doi:10.3791/63558 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter