Summary
השכיחות הגוברת של קנדידה אלביקנס עמידים לתרופות היא בעיה בריאותית חמורה ברחבי העולם. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) עשוי להציע אסטרטגיה למאבק בזיהומים פטרייתיים עמידים לתרופות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את יעילות ה-aPDT בתיווך בנגל רוז על זן C. albicans עמיד בפני multidrug במבחנה.
Abstract
זיהום קנדידה אלביקנס פולשני הוא זיהום פטרייתי אופורטוניסטי משמעותי בבני אדם מכיוון שהוא אחד המתיישבים הנפוצים ביותר במעיים, בפה, בנרתיק ובעור. למרות הזמינות של תרופות נגד פטריות, שיעור התמותה של קנדידה פולשנית נותר כ -50%. למרבה הצער, השכיחות של C. albicans עמידים לתרופות עולה ברחבי העולם. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) עשוי להציע טיפול חלופי או אדג'ובנטי כדי לעכב את היווצרות הביופילם של C. albicans ולהתגבר על עמידות לתרופות. APDT בתיווך רוז בנגל (RB) הראה הרג יעיל של תאים של חיידקים ושל C. albicans. במחקר זה מתוארת היעילות של RB-aPDT על C. albicans עמידים למולטי-דרוג. מקור אור ביתי של דיודה ירוקה פולטת אור ירוק (LED) מתוכנן להתיישר עם מרכזה של באר של צלחת בעלת 96 בארות. השמרים דוגרו בבארות עם ריכוזים שונים של RB והוארו בפלואנסים משתנים של אור ירוק. השפעות ההרג נותחו בשיטת דילול הצלחת. עם שילוב אופטימלי של אור ו- RB, הושגה עיכוב צמיחה של 3 לוגים. הוסק כי RB-aPDT עשוי לעכב C. albicans עמידים לתרופות.
Introduction
C. albicans מתיישבת במערכת העיכול ובמערכת העיכול והגניטורין של אנשים בריאים וניתן לזהות אותה כמיקרוביוטה רגילה בכ-50 אחוז מהאנשים1. אם נוצר חוסר איזון בין הפונדקאי לפתוגן, C. albicans מסוגל לפלוש ולגרום למחלות. הזיהום יכול לנוע בין זיהומים ריריים מקומיים בממברנה ועד לכשל איברים מרובים2. במחקר מעקב רב-מרכזי בארה"ב, כמחצית מהמבודדים מחולים עם קנדידה פולשנית בין 2009 ל-2017 הם C. albicans3. קנדידמיה יכולה להיות קשורה לשיעורי תחלואה גבוהים, תמותה, שהייה ממושכת בבית החולים4. המרכזים לבקרת מחלות ומניעתן בארה"ב דיווחו כי כ-7% מכל דגימות הדם של קנדידה שנבדקו עמידות לתרופה האנטי-פטרייתית fluconazole5. הופעתם של מיני קנדידה עמידים לתרופות מעלה את החשש לפתח טיפול חלופי או אדג'ובנטי לחומרים אנטי-מיקוטיים.
טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) כולל הפעלת פוטוס-סנסיטיזר ספציפי (PS) עם אור באורך הגל של שיא הקליטה של ה-PS6. לאחר העירור, PS הנרגש מעביר את האנרגיה או האלקטרונים שלו למולקולות החמצן הסמוכות וחוזר למצב הקרקע. במהלך תהליך זה נוצרים מיני חמצן תגובתי וחמצן סינגלט וגורמים נזק לתאים. aPDT נמצא בשימוש נרחב כדי להרוג מיקרואורגניזמים מאז שנות ה-90של המאה ה-20. אחד היתרונות של aPDT הוא שמספר אברונים ניזוקים בתא על ידי חמצן יחיד ו/או מיני חמצן תגובתי (ROS) במהלך הקרנה; לפיכך, ההתנגדות ל-aPDT לא נמצאה עד היום. יתר על כן, מחקר שנערך לאחרונה דיווח כי החיידקים ששרדו לאחר aPDT נעשו רגישים יותר לאנטיביוטיקה8.
מקורות האור המשמשים ב-aPDT כוללים לייזרים, מנורות הלוגן מתכתיות עם מסננים, אור אינפרה-אדום קרוב ודיודה פולטת אור (LED)9,10,11,12. הלייזר מספק עוצמת אור גבוהה, בדרך כלל גדולה מ-0.5 W/cm2, המאפשרת אספקה של מינון אור גבוה בזמן קצר מאוד. זה כבר בשימוש נרחב במקרים שבהם זמן טיפול ארוך יותר אינו נוח כגון aPDT עבור זיהומים דרך הפה. החיסרון של לייזר הוא שגודל התאורה הנקודתי שלו קטן, ונע בין כמה מאות מיקרומטרים ל -10 מ"מ עם מפזר. יתר על כן, ציוד לייזר הוא יקר וזקוק להכשרה ספציפית כדי לפעול. מצד שני, שטח ההקרנה של מנורת הלוגן מתכתית עם פילטרים גדול יחסית13. עם זאת, המנורה חסונה ויקרה מדי. מקורות אור LED הפכו למיינסטרים של aPDT בתחום הדרמטולוגי מכיוון שהוא קטן וזול יותר. שטח ההקרנה יכול להיות גדול יחסית עם סידור מערך של נורת ה-LED. ניתן להאיר את כל הפנים בו זמנית9. עם זאת, רוב, אם לא כל, מקורות תאורת ה-LED הזמינים כיום מיועדים לשימוש קליני. זה לא יכול להיות מתאים לניסויים במעבדה כי זה תופס מקום ויקר. פיתחנו מערך LED זול שהוא קטן מאוד וניתן לחתוך ולהרכיב אותו מרצועת LED. ניתן להתאים את נוריות ה- LED לסידורים שונים עבור עיצובים ניסיוניים שונים. ניתן להשלים תנאים שונים של aPDT בצלחת של 96 בארות או אפילו בצלחת של 384 בארות בניסוי אחד.
ורד בנגל (RB) הוא צבע צבעוני הנמצא בשימוש נרחב להגברת ההדמיה של נזקי הקרנית בעיני אדם14. aPDT בתיווך RB הראה השפעות הרג על סטפילוקוקוס אאורוס, Escherichia coli ו- C. albicans עם יעילות דומה פחות או יותר לזו של טולואידין כחול O15. מחקר זה מדגים שיטה לאימות ההשפעה של RB-aPDT על C. albicans עמידים למולטי-דרוג.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. הכנת מערכת aPDT
- חותכים ארבע דיודות פולטות אור ירוק (נוריות LED) מרצועת LED (ראו טבלת חומרים) ומיישרים אותן עם ארבע בארות של לוחית בעלת 96 בארות (איור 1).
הערה: נוריות ה-LED סודרו במערך של 4 x 3. החלק האחורי של הנורית הודבק לגוף קירור כדי לפזר חום במהלך ההקרנה. - מדוד את קצב הפלואנס11 של הנורית ב- 540 ננומטר באמצעות מד הספק אור (ראה טבלת חומרים). ראו איור משלים 1 כדי להבטיח שקצב הפלואנס של ה-LED יהיה בין 510-560 ננומטר.
- הניחו מאוורר חשמלי לצד הצלחת במהלך ההקרנה כדי לשמור על הטמפרטורה הקבועה (25 ± 1 מעלות צלזיוס) 11. ראו איור משלים 2 כדי להבטיח שהטמפרטורה הקבועה של התווך תישמר במהלך ההקרנה.
2. התרבות של צורת השמרים של C. albicans
הערה: C. albicans עמידים למולטי-דרוג (BCRC 21538/ATCC 10231), עמיד בפני רוב החומרים האנטי-פטרייתיים, כולל פלוקונאזול, משמש לניסויים16.
- קבע את הרגישות לתרופות אנטי-מיקוטיות באמצעות שיטת דיפוזיה של דיסקים בעקבות דו"ח17 שפורסם בעבר.
- לגדל C. albicans בצורות שמרים, hyphae, ו pseudohyphae בהתאם לסביבות המיקרו-אקולוגיות18.
הערה: הצורות hyphae ו- pseudohyphae קשות לחישוב מדויק. ניתן לחשב את צורת השמרים במדויק תחת מיקרוסקופ או עם ציטומטריה של זרימה. הטמפרטורה במהלך צמיחת התא קובעת את המורפולוגיה שלו. בטמפרטורת החדר (25 מעלות צלזיוס), כמעט כל התאים הם בצורת שמרים. דגירה קצרה של 4 שעות של C. albicans בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס לא השפיעה על מורפולוגיית השמרים שלה.
3. aPDT על פלנקטוני C. albicans
- מבודדים מושבה אחת של C. albicans מצלחת אגר עם לולאה סטרילית ומוסיפים אותה למדיום של תמצית שמרים של 3 מ"ל פפטון דקסטרוז (YPD) (ראו טבלת חומרים) בצינור זכוכית מעוקר.
- דגירה של הצינור ב-25 ± 1 מעלות צלזיוס למשך הלילה (14-16 שעות) באינקובטור עם מהירות סיבוב של 155 סל"ד כדי להרחיב את C. albicans ולשמור על הפטרייה בצורת שמרים לכימות מדויק.
- דיללו את תרבית הלילה עם ערך בינוני עדOD 600 של כ-0.5 ב-30 מעלות צלזיוס וסובבו במהירות של 155 סל"ד למשך 4 שעות כדי להשיג שלב צמיחה של לוג של C. albicans.
- דיללו שוב את תרבות שלב היומן עם מדיום YPD טרי לערך OD600 של 0.65 (בערך 1 x 107 יחידות יוצרות מושבה, CFU/mL). אשרו את הריכוז הסופי בשיטת דילול סדרתי על צלחת אגר8.
- הכינו תמיסת מלאי (4%) של רוז בנגל (RB) על ידי המסת האבקה ב-1x PBS. מסננים ומעקרים אותו עם מסנן של 0.22 מיקרומטר ומאחסנים אותו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בחושך. ריכוז העבודה הסופי של RB הוא 0.2%.
- הוסיפו 111 μL של 2% RB ל-1 מ"ל של אלביקנים מסוג C. פאזה לוגית בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל ובתרבית משותפת בנקודות זמן שונות (0, 15 ו-30 דקות) בטמפרטורת החדר כדי להבין את ספיגת ה-RB בתאים (איור 2).
- שטפו את התרבות המשותפת שלוש פעמים עם 1 מ"ל של 1x PBS עם צנטריפוגה ב-16,100 x גרם למשך 2.5 דקות בטמפרטורת החדר.
הערה: aPDT מכיל ארבעה תנאים שונים: שליטה מוחלטת (ללא חשיפה לאור, ללא RB), שליטה בחושך (ללא אור אלא דגירה עם RB), בקרת אור (חושף לאור ללא RB), aPDT (חושף לאור בנוכחות RB). - בצעו החייאה של ה-C. albicans ב-1 מ"ל של 1x PBS והקצו אותם לשלוש בארות שונות בלוחית קידוח של 96 עבור כל מצב. יישרו את הבארות עם מערך ה-LED לאחר הכביסה.
- בקבוצות חשופות אור, הפעילו את המאוורר החשמלי ואת האור.
הערה: ניתן להשיג פלואנס שונה (J/cm2) על ידי חשיפת הבארות לתקופות זמן משתנות. לדוגמה, חשיפת אור של 16.7 דקות מגיעה ל-10 J/cm2 עם נורת LED של 10 mW/cm2 . - לאחר הקרנה, הוסף 20 μL של תמיסת התרבית המשותפת מבאר אחת לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל המכיל 180 μL של 1x PBS כדי להכין דילול של פי 10. יתר על כן, לדלל עשר פעמים, ולאחר מכן בעקבות אותה שיטה.
- שחררו שלוש טיפות של 20 μL מכל דילול סדרתי על רבע אחד של צלחת אגר YPD כדי להשיג מושבות הניתנות לספירה של הצלחת. חשב את ה-CFU/mL על ידי הכפלת המושבות בגורמי הדילול3.
4. ניתוח סטטיסטי
- נתחו את הנתונים שנאספו באמצעות תוכנת גרפים וסטטיסטיקה (ראו טבלת חומרים).
- תאר נתונים לפי ממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע. בצע ניתוח ANOVA דו-כיווני של שונות8 כדי להעריך הבדלים משמעותיים בין תנאי הבדיקה השונים.
- בצע את מבחני ההשוואה המרובים של Tukey עבור השוואות זוגיות8. עבור כל טיפול שונה, בצע לפחות שלושה ניסויים עצמאיים. שקול ערך p < 0.05 מובהק סטטיסטית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 1 מראה את מערכת ה-aPDT שבה נעשה שימוש במחקר הנוכחי. מכיוון שטמפרטורות גבוהות עלולות לגרום למוות תאי משמעותי, מערך ה-LED מקורר על ידי מאוורר חשמלי, וגוף קירור משמש במהלך הקרנה כדי לשמור על טמפרטורה קבועה של 25 ± 1 °C (74 °F). ניתן לזלזל באפקט החום. התפלגות אור אחידה היא גם גורם מכריע חשוב עבור aPDT מוצלח; לכן, חשוב ליישר את נורת ה-LED לבאר בדיוק במהלך התאורה. בשל הבהירות של הנורית, משקפי שמש צריכים להיות מצוידים לפני הדלקת האור.
C. albicans מוכתם מיד ב-RB כפי שמדגימים פלואורסצנציה אדומה תחת מיקרוסקופיה פלואורסצנטית (0 דקות באיור 2). ניתן לראות שה-RB נכנס לתאים באופן תלוי-זמן (איור 2). המחקר השתמש בדגירה של 15 דקות RB שבה, לאחר 15 דקות, רוב התאים הוכתמו ב-RB. ריכוז גבוה יותר של RB מוביל לפלואורסצנציה חזקה יותר, ומייצר רדיקלים חופשיים יותר להריגת פטריות. עם זאת, הוא עלול גם לגרום למוות תאי משמעותי בתאים רגילים; לכן, 0.2% ריכוז RB משמש בדרך כלל במרפאות. לפיכך, הריכוז המדויק הזה נבחר במחקר זה.
PDT כרוך בהפעלת RB עם אור. כאשר ה-RB המופעל חוזר למצב הקרקע שלו, הוא מעביר את האנרגיה והאלקטרונים לחמצן הסמוך כדי ליצור רדיקלים חופשיים וחמצן סינגלט, וכתוצאה מכך מוות תאי. איור 3 מראה שאין מוות תאי במצב של היעדר הקרנה או היעדרות של RB. C. albicans עוכב באופן תלוי מינון קל לאחר הקרנת אור ירוק בנוכחות 0.2% RB (איור 3). חשיפת הפטריות לאור ירוק עם 30 J/cm2 גרמה לעיכוב של 4 לוגים (99.99%) של צמיחת התאים.
איור 1: המערכת הפוטודינמית. (A) מערך LED ירוק הודבק לגוף קירור ממתכת כדי לפזר חום במהלך הקרנה. מאוורר חשמלי הונח לצד מקור האור כדי לשמור על טמפרטורה קבועה של 25 ± 1 °C (B) האור נדלק. (C) הבארות של לוחית קידוח 96 היו מיושרות עם מרכז הנורית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
איור 2: המחקר התלוי בזמן של רוז בנגל נכנס ל-C. albicans. תמונות שדה בהיר (A-D) ופלואורסצנטיות (E-H) של האלביקנים C. לאחר 0-30 דקות מתורבתות יחד עם 0.2% רוז בנגל (RB). (A) ו-(E) שליטה ללא RB מתורבתת במשותף. (B) ו-(F) התאים הוכתמו מיד ב-0.2% RB. (C) ו-(G) לאחר 15 דקות של תרבית, רוב התאים הראו פלואורסצנציה אדומה, מה שמעיד על RB בתוך התאים. (D) ו-(H) פלואורסצנציה חזקה יותר של ה-RB נצפתה בדגירה של 30 דקות. סרגל קנה מידה = 50 μm. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
איור 3: השפעות טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי על C. albicans עמידים למולטי-דרוג. עיכוב הצמיחה של התאים תלוי בפלואנס האור. חשיפת C. albicans לפלואנס של 10 J/cm2 עיכבה את צמיחת התאים ב-1.5 לוגים, על ידי 2 לוגים עם 20 J/cm2, ו-4 בולי עץ עם 30 J/cm2 בהתאמה בנוכחות 0.2% רוז בנגל. -RB, ללא דגירה בנגלית של רוז; +RB, מתורבת במשותף עם רוז בנגל במשך 15 דקות. נתונים הם אמצעים ± SEM של שלושה ניסויים נפרדים שבוצעו בשכפול. ערכי p מסומנים באיור (מבחני ההשוואה המרובים של Tukey, ANOVA דו-כיווני). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
איור משלים 1: ספקטרום יציאות ה-LED. קצב הפלואנס נמדד כל 2 ננומטר בין 510-560 ננומטר עם מד הספק. הנתונים נאספים משני ניסויים בלתי תלויים עם מדידות משולשות. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
איור משלים 2: הטמפרטורה של התווך במהלך ההקרנה. תרמו-קופל הוכנס לכל באר של צלחת בת 96 בארות מלאה בציר של 100 μL כדי למדוד את הטמפרטורה. הטמפרטורה הייתה קבועה ב 25 ± 1 מעלות צלזיוס. הנתונים נאספים מניסויים כפולים עם בארות משולשות. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
תוצאות מעודדות של יישומים קליניים של RB-PDT עבור קרטיטיס פטרייתית דווחו לאחרונה19. שיא הספיגה של RB הוא ב 450-650 ננומטר. חיוני לקבוע את קצב הפלואנס של מקור האור עבור aPDT מוצלח. פלואנס גבוה (בדרך כלל >100 J/cm2) נדרש לטיפול בתאים סרטניים, בעוד פלואנס נמוך יותר צפוי לטפל בנגעים נגועים6. פלואנס גבוה פירושו זמן חשיפה ארוך אשר עשוי להיות לא מעשי במסגרת קלינית. לטיפול בקרטיטיס מיקוטית, מוסכם על 5.4 J/cm2 בקהילה האופתלמולוגית20. זמן דגירה ארוך של RB הוא גם לא נוח לחולה לקבל טיפול aPDT. לפיכך, נבחר זמן דגירה של 15 דקות לניסויים נוספים.
כמה שלבים הם קריטיים לניסוי מוצלח. צלחות האגר ששימשו לתרבות הפטרייתית יובשו במשך 15-20 דקות בתא זרימה למלרי כאשר המאוורר מופעל כדי להפחית את הלחות על פני השטח. משטח לח יאפשר לזרימת טיפות הפטריות להתערבב, וימנע היווצרות של מושבה אחת.
ביצוע כל הניסויים באור עמום הוא חיוני כדי למנוע מ-RB להלבין תמונות. המעגל החשמלי היה בחיבור מקבילי כך שאם התרחשה הפסקה באחד המעגלים, המכשירים הנותרים לא יושפעו. אם יש תוצאות שמחוץ לטווח של אחרים, ניתן לבדוק תחילה את המערך כדי לוודא שכל נורות ה-LED מתפקדות היטב.
מגבלה אחת של שימוש במקור אור LED היא התלות בטמפרטורה שלו. ב- LED, החום אינו מיוצר על ידי נורת ה- LED עצמה אלא נוצר בצומת המוליכים למחצה בתוך המכשיר9. מכיוון שהגזמת נוריות LED מעל הזרם המדורג שלהן מעוררת את עליית טמפרטורת הצומת, ובסופו של דבר מובילה לכשל מוקדם של הנורה, יש צורך לצייד את המכשיר בצלעות קירור מתכתיות כדי לספק קירור מתאים של הצומת. מגבלה נוספת של העיצוב הנוכחי של מערך ה-LED היא השטח המוגבל המואר על ידי כל נורת LED, אשר מתאים רק לבאר אחת ויחידה של לוחית 96 בארות. אם יש צורך באזור תאורה גדול יותר, יש צורך בסידור שונה של נורות LED עם מרחקים מתאימים מתאימים מעל או מתחת לצלחת כדי להשיג תאורה אחידה.
היתרונות של תכנון מחקר זה הם ההגדרה הקלה והזולה של המערכת הפוטודינמית לניסויים ב-aPDT. ניתן להשתמש בו בניסויים הנוגעים לזיהומים פטרייתיים. וירוסים וחיידקים יכולים להיבדק גם באותה מערכת. ניתן לבחור את פס האור LED מתוך צבע אור שונה כדי להתאים לפסגות הקליטה של פוטו-סנסיטיזרים שונים, החל מספקטרום אור נראה לעין ועד ספקטרום אור אינפרה-אדום קרוב. ניתן לרכוש אותם בקלות מהשוק. ניתן לחתוך את הרצועה ולהרכיב אותה במערכים שונים כדי ליישר קו עם לוחית 96 בארות לצורך בדיקת תפוקה גבוהה. השימוש בלוחית 96 בארות מאפשר תנאי בדיקה שונים בו זמנית כדי לחסוך זמן ומקום במעבדה.
לסיכום, המערכת שנקבעה במחקר זה היא פשוטה, קלה ורב-תכליתית לבחינת השפעות פוטודינמיות שונות על מיקרואורגניזמים ותאים שונים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים.
Acknowledgments
עבודה זו קיבלה מימון מהמרכז לננו-רפואה יישומית, אוניברסיטת צ'נג קונג הלאומית מתוכנית מרכז המחקר לאזורים נבחרים במסגרת פרויקט הנבטים להשכלה גבוהה על ידי משרד החינוך (MOE), ומשרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן [MOST 109-2327-B-006-005] ל- TW וונג. J.H. Hung מכיר במימון מבית החולים האוניברסיטאי הלאומי צ'נג קונג, טייוואן [NCKUH-11006018], ו[MOST 110-2314-B-006-086-MY3].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL microfuge tube | Neptune, San Diego, USA | #3745.x | |
| 5 mL round-bottom tube with cell strainer cap | Falcon, USA | #352235 | |
| 96-well plate | Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan | #16196 | |
| Aluminum foil | sunmei, Tainan, Taiwan | ||
| Aluminum heat sink | Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan | BK-T220-0051-01 | Disperses heat from the LED array. |
| Centrifuge | Eppendorf, UK | 5415R | |
| Graph pad prism software | GraphPad 8.0, San Diego, California, USA | graphing and statistics software | |
| Green light emitting diode (LED) strip | Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan | 2835 | Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63 |
| Incubator | Yihder, Taipei, Taiwan | LM-570D (R) | |
| Light power meter | Ophir, Jerusalem, Israel | PD300-3W-V1-SENSOR, | |
| Millex 0.22 μm filter | Merck, NJ, USA | SLGVR33RS | |
| Multidrug-resistant Candida albicans | Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan | BCRC 21538/ATCC 10231 | http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538 |
| OD600 spectrophotometer | Biochrom, London, UK | Ultrospec 10 | |
| Rose Bengal | Sigma-Aldrich, MO, USA | 330000 | stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C |
| Sterilized glass tube | Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan | AK45048-16100 | |
| Yeast Extract Peptone Dextrose Medium | HIMEDIA, India | M1363 |
References
- Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).
- Pappas, P. G., et al. Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).
- Ricotta, E. E., et al. Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017. Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).
- Koehler, P., et al. Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis. Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).
- Toda, M., et al. Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).
- Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. Daylight photodynamic therapy: an update. Molecules. 25 (21), 5195 (2020).
- Wainwright, M.
- Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance. Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).
- Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
- Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit. Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).
- Wong, T. W., et al. Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light. Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).
- Stasko, N., et al. Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue. Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).
- Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).
- Feenstra, R. P., Tseng, S. C. Comparison of fluorescein and rose bengal staining. Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).
- Demidova, T. N., Hamblin, M. R. Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).
- Shahid, H., et al. Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities. Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).
- Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).
- Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition. Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).
- Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).
- Martinez, J. D., et al. Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study. Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).
