Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Rose Bengal-medied fotodynamisk terapi för att hämma Candida albicans

Published: March 24, 2022 doi: 10.3791/63558
Automatic Translation
*1,2, *3,4, 5, 3,6, 7, 7, 3, 3,8,9
1Institute of Clinical Medicine, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Ophthalmology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Dermatology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 5Department of Dermatology, Fu Jen Catholic University Hospital, Fu Jen Catholic University, 6Institute of Clinical Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 7School of Medicine, National Cheng Kung University, 8Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 9Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University
* These authors contributed equally

Summary

Den ökande förekomsten av läkemedelsresistenta Candida albicans är ett allvarligt hälsoproblem över hela världen. Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) kan erbjuda en strategi för att bekämpa läkemedelsresistenta svampinfektioner. Det föreliggande protokollet beskriver Rose bengal-medierad aPDT-effekt på en multiresistent C. albicans-stam in vitro.

Abstract

Invasiv Candida albicans-infektion är en signifikant opportunistisk svampinfektion hos människor eftersom det är en av de vanligaste kolonisatörerna i tarmen, munnen, slidan och huden. Trots tillgången på svampdödande läkemedel förblir dödligheten för invasiv candidiasis ~ 50%. Tyvärr ökar förekomsten av läkemedelsresistenta C. albicans globalt. Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) kan erbjuda en alternativ eller adjuvant behandling för att hämma C. albicans biofilmbildning och övervinna läkemedelsresistens. Rose bengal (RB) -medierad aPDT har visat effektiv celldödande av bakterier och C. albicans. I denna studie beskrivs effekten av RB-aPDT på multiresistenta C. albicans . En hemlagad grön ljusdiod (LED) ljuskälla är utformad för att anpassa sig till mitten av en brunn på en 96-brunnsplatta. Jästen inkuberades i brunnarna med olika koncentrationer av RB och upplystes med varierande flytande grönt ljus. De dödande effekterna analyserades med plattutspädningsmetoden. Med en optimal kombination av ljus och RB uppnåddes 3-log tillväxthämning. Det drogs slutsatsen att RB-aPDT potentiellt kan hämma läkemedelsresistenta C. albicans.

Introduction

C. albicans koloniserar i mag-tarmkanalen och könsorganen hos friska individer och kan detekteras som normal mikrobiota hos cirka 50 procent av individerna1. Om en obalans skapas mellan värden och patogenen kan C. albicans invadera och orsaka sjukdom. Infektionen kan sträcka sig från lokala slemhinnor till multipel organsvikt2. I en övervakningsstudie med flera center i USA är ungefär hälften av isolaten från patienter med invasiv candidiasis mellan 2009 och 2017 C. albicans3. Candidemi kan associeras med hög sjuklighet, dödlighet, långvarig sjukhusvistelse4. US Centers of Disease Control and Prevention rapporterade att cirka 7% av alla Candida blodprover som testats är resistenta mot det svampdödande läkemedlet flukonazol5. Framväxten av läkemedelsresistenta Candida-arter väcker oro för att utveckla en alternativ eller adjuvansbehandling till antimykotiska medel.

Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) innebär att man aktiverar en specifik fotosensibiliserare (PS) med ljus vid PS6: s högsta absorptionsvåglängd. Efter excitation överför den exciterade PS sin energi eller elektroner till de närliggande syremolekylerna och återgår till marktillståndet. Under denna process bildas reaktiva syrearter och singlet syre och orsakar cellskador. aPDT har använts i stor utsträckning för att döda mikroorganismer sedan 1990-talet7. En av fördelarna med aPDT är att flera organeller skadas i en cell av singlet syre och / eller reaktiva syrearter (ROS) under bestrålning; således har motstånd mot aPDT inte hittats förrän idag. Dessutom rapporterade en ny studie att bakterierna som överlevde efter aPDT blev känsligare för antibiotika8.

Ljuskällorna som används i aPDT inkluderar lasrar, metallhalogenlampor med filter, nära infrarött ljus och ljusdiod (LED) 9,10,11,12. Lasern ger en hög ljuseffekt, vanligtvis större än 0,5 W / cm2, som möjliggör leverans av en hög ljusdos på mycket kort tid. Det har använts i stor utsträckning i fall där en längre behandlingstid är obekvämt, såsom aPDT för orala infektioner. Nackdelen med en laser är att dess fläckstorlek på belysningen är liten, allt från några hundra mikrometer till 10 mm med en diffusor. Dessutom är laserutrustning dyr och behöver särskild utbildning för att fungera. Å andra sidan är bestrålningsområdet för en metallhalogenlampa med filter relativt större13. Lampan är dock för rejäl och dyr. LED-ljuskällor har blivit vanliga av aPDT inom det dermatologiska området eftersom det är litet och billigare. Bestrålningsområdet kan vara relativt stort med ett matrisarrangemang av LED-glödlampan. Hela ansiktet kan belysas samtidigt9. Ändå, de flesta, om inte alla, LED-ljuskällor som finns tillgängliga idag är utformade för klinisk användning. Det kanske inte är lämpligt för experiment i ett laboratorium eftersom det är rymdupptåt och dyrt. Vi utvecklade en billig LED-matris som är mycket liten och kan klippas och monteras från en LED-remsa. Lysdioderna kan monteras i olika arrangemang för olika experimentella konstruktioner. Olika förhållanden för aPDT kan slutföras i en 96-brunnsplatta eller till och med en 384-brunnsplatta i ett experiment.

Rose bengal (RB) är ett färgat färgämne som ofta används för att förbättra visualiseringen av hornhinneskador i mänskliga ögon14. RB-medierad aPDT har visat dödande effekter på Staphylococcus aureus, Escherichia coli och C. albicans med ungefär jämförbar effektivitet med toluidinblåO15. Denna studie visar en metod för att validera effekten av RB-aPDT på multiresistenta C. albicans.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Förberedelse av aPDT-system

  1. Skär fyra gröna ljusdioder (LED) från en LED-remsa (se Materialtabell) och rikta in dem mot fyra brunnar på en 96-brunnsplatta (figur 1).
    OBS: Lysdioderna arrangerades i en 4 x 3-matris. Lysdiodens baksida fästes på en kylfläns för att sprida värme under bestrålning.
  2. Mätlysdiodens flytande hastighet 11 vid 540 nm med en ljuseffektmätare (se Materialtabell). Se kompletterande figur 1 för att säkerställa att lysdiodens fluenshastighet är mellan 510-560 nm.
  3. Sätt en elektrisk fläkt bredvid plattan under bestrålning för att bibehålla den konstanta temperaturen (25 ± 1 °C)11. Se kompletterande figur 2 för att säkerställa att mediets konstanta temperatur bibehålls under bestrålning.

2. Odling av jästformen av C. albicans

OBS: En multiresistent C. albicans (BCRC 21538 / ATCC 10231), resistent mot de flesta svampdödande medel, inklusive flukonazol, används för experimenten16.

  1. Bestäm den antimykotiska läkemedelskänsligheten med en diskdiffusionsmetod enligt tidigare publicerad rapport17.
  2. Odla C. albicans i jäst-, hyfer- och pseudohyphaformer beroende på de mikroekologiska miljöerna18.
    OBS: Hyferna och pseudohyphae formerna är svåra för en exakt beräkning. Jästformen kan beräknas exakt under ett mikroskop eller med flödescytometri. Temperaturen under celltillväxt bestämmer dess morfologi. Vid rumstemperatur (25 ° C) är nästan alla celler jästform. En 4 timmars kort inkubation av C. albicans vid 30 ° C påverkade inte dess jästmorfologi.

3. aPDT på plankton C. albicans

  1. Isolera en enda koloni av C. albicans från en agarplatta med en steril slinga och tillsätt den till ett 3 ml jästextrakt pepton dextros (YPD) medium (se materialtabell) i ett steriliserat glasrör.
    1. Inkubera röret vid 25 ± 1 ° C över natten (14-16 timmar) i en inkubator med en rotationshastighet på 155 rpm för att expandera C. albicans och bibehålla svampen i jästform för exakt kvantifiering.
  2. Späd ut övernattningskulturen med medium till ett OD600-värde på cirka 0,5 vid 30 ° C och rotera med en hastighet av 155 rpm i 4 timmar för att uppnå en loggtillväxtfas av C. albicans.
  3. Späd ut loggfaskulturen igen med färskt YPD-medium till ett OD600-värde på 0,65 (cirka 1 x 107 kolonibildande enheter, CFU / ml). Bekräfta den slutliga koncentrationen genom seriell utspädningsmetod på en agarplatta8.
  4. Förbered en stamlösning (4%) av Rose bengal (RB) genom att lösa upp pulvret i 1x PBS. Filtrera och sterilisera det med ett 0,22 μm filter och förvara det vid 4 °C i mörker. Den slutliga arbetskoncentrationen av RB är 0, 2%.
  5. Tillsätt 111 μL 2% RB till 1 ml log-fas C. albicans i ett 1,5 ml mikrocentrifugrör och samodling vid olika tidpunkter (0, 15 och 30 min) vid rumstemperatur för att förstå absorptionen av RB i cellerna (Figur 2).
  6. Tvätta samkulturen tre gånger med 1 ml 1x PBS med centrifugering vid 16 100 x g i 2,5 min vid rumstemperatur.
    OBS: aPDT innehåller fyra olika förhållanden: absolut kontroll (ingen ljusexponering, ingen RB), mörk kontroll (inget ljus men inkuberar med RB), ljuskontroll (exponeras för ljus utan RB), aPDT (exponeras för ljus i närvaro av RB).
  7. Resuspend C. albicans i 1 ml 1x PBS och fördela dem i tre olika brunnar i en 96 brunnsplatta för varje tillstånd. Rikta in brunnarna mot LED-matrisen efter tvätt.
  8. I ljusexponerade grupper, slå på den elektriska fläkten och ljuset.
    OBS: En annan fluens (J / cm2) kan uppnås genom att utsätta brunnarna för olika tidsperioder. Till exempel kommer en 16,7 minuters ljusexponering till 10 J / cm2 med en 10 mW / cm2 LED-glödlampa.
  9. Efter bestrålning tillsätt 20 μL av samodlingslösningen från en brunn till ett 1,5 ml centrifugrör innehållande 180 μL 1x PBS för att bereda en 10x spädning. Späd vidare tio gånger och följ därefter samma metod.
  10. Släpp tre droppar av 20 μL av varje seriell utspädning på en kvadrant av en YPD-agarplatta för att uppnå räknebara kolonier plattan. Beräkna CFU/ml genom att multiplicera kolonierna med utspädningsfaktorerna3.

4. Statistisk analys

  1. Analysera insamlade data med hjälp av en graf- och statistikprogramvara (se Materialtabell).
  2. Avbilda data med medelvärdet ± medelvärdets standardfel. Utför en tvåvägs ANOVA-analys av varians8 för att utvärdera signifikanta skillnader mellan de olika testförhållandena.
  3. Utför Tukeys flera jämförelsetester för parvisa jämförelser8. För varje annan behandling, utför minst tre oberoende experiment. Tänk på p-värde < 0,05 statistiskt signifikant.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figur 1 visar det aPDT-system som används i föreliggande studie. Eftersom höga temperaturer kan orsaka betydande celldöd kyls LED-matrisen av en elektrisk fläkt och en kylfläns används under bestrålning för att upprätthålla en konstant temperatur vid 25 ± 1 ° C. Värmeeffekten kan diskonteras. Att ha en jämn ljusfördelning är också en viktig avgörande faktor för en framgångsrik aPDT; därför, Det är viktigt att rikta in LED-glödlampan till brunnen exakt under belysningen. På grund av lysdiodens ljusstyrka måste solglasögon utrustas innan du slår på ljuset.

C. albicans färgas omedelbart med RB som visualiseras av röd fluorescens under fluorescerande mikroskopi (0 min i figur 2). Det kan ses att RB kommer in i cellerna på ett tidsberoende sätt (figur 2). Studien använde en 15 minuters RB-inkubation vid vilken, efter 15 min, de flesta cellerna färgades med RB. En högre koncentration av RB leder till en starkare fluorescens, vilket ger fler fria radikaler för att döda svampar. Ändå kan det också orsaka betydande celldöd i normala celler; Därför används 0,2% RB-koncentration vanligtvis i kliniker. Således valdes den exakta koncentrationen i denna studie.

PDT innebär aktivering av RB med ljus. När den aktiverade RB återgår till sitt marktillstånd överför den energi och elektroner till det närliggande syret för att generera fria radikaler och singlet syre, vilket resulterar i celldöd. Figur 3 visar ingen celldöd under förutsättning att ingen bestrålning eller frånvaro av RB föreligger. C. albicans hämmades på ett lätt dosberoende sätt efter bestrålning med grönt ljus i närvaro av 0,2 % RB (figur 3). Att utsätta svamparna för grönt ljus med 30 J / cm2 resulterade i en 4-log (99.99%) hämning av celltillväxten.

Figure 1
Figur 1: Det fotodynamiska systemet. (A) En grön LED-matris fästes vid en metall kylfläns för att sprida värme under bestrålning. En elektrisk fläkt sattes bredvid ljuskällan för att hålla temperaturen konstant vid 25 ± 1 ° C. (B) Lampa tändes. (C) Brunnarna på en 96 brunnsplatta var i linje med lysdiodens mitt. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Figure 2
Figur 2: Den tidsberoende studien av Rose bengal in i C. albicans. Ljusfältsbilder (A-D) och fluorescensbilder (E-H) av C. albicans efter 0-30 min samodling med 0,2% Rose bengal (RB). (A) och (E) Kontroll utan SAMODLING AV RB. (B) och (F) Cellerna färgades omedelbart med 0,2% RB. (C) och (G) Efter 15 minuters odling visade de flesta celler röd fluorescens, vilket indikerar RB inuti cellerna. (D) och (H) Starkare fluorescens av RB noterades med en 30 minuters inkubation. Skala bar = 50 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3: Antimikrobiella fotodynamiska terapieffekter på multiresistenta C. albicans. Tillväxthämningen av celler beror på ljusfluensen. Exponering av C. albicans för en fluens av 10 J / cm2 hämmade celltillväxten med 1,5 stockar, med 2 stockar med 20 J / cm2 respektive 4 stockar med 30 J / cm2 i närvaro av 0,2% Rose bengal. -RB, utan Rose bengal inkubation; +RB, samodling med Rose bengal i 15 min. Data är medel ± SEM av tre separata experiment utförda i två exemplar. p-värden anges i figuren (Tukeys multipla jämförelsetester, tvåvägs ANOVA). Klicka här för att se en större version av denna figur.

Kompletterande figur 1: LED-utgångsspektrumet. Fluenshastigheten mättes var 2 nm från 510-560 nm med en effektmätare. Data samlas från två oberoende experiment med tredubbla mätningar. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Kompletterande figur 2: Mediets temperatur vid bestrålning. Ett termoelement sattes in i varje brunn på en 96-brunnsplatta fylld med 100 μL buljong för att mäta temperaturen. Temperaturen var konstant vid 25 ± 1 ° C. Data samlas från duplicerade experiment med tredubbla brunnar. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Uppmuntrande resultat av kliniska tillämpningar av RB-PDT för svampkeratit har nyligen rapporterats19. Absorptionstoppen för RB är vid 450-650 nm. Det är viktigt att bestämma ljuskällans flythastighet för en framgångsrik aPDT. En hög fluens (vanligtvis >100 J / cm2) krävs för att behandla cancerceller, medan en lägre fluens förväntas behandla infekterade lesioner6. En hög fluens innebär en lång exponeringstid som kanske inte är praktisk i en klinisk miljö. För behandling av mykotisk keratit är en 5,4 J / cm2 överenskommen i det oftalmologiska samhället20. En lång inkubationstid för RB är också obekvämt för en patient att få aPDT-behandling. Således valdes en 15 minuters inkubationstid för ytterligare experiment.

Vissa steg är avgörande för ett lyckat experiment. Agarplattorna som användes för svampodling torkades i 15-20 min i en lamellär flödeshytt med fläkten påslagen för att minska fukten på ytan. En fuktig yta skulle möjliggöra flödet av svampdropparna att blandas, vilket förhindrar bildandet av en enda koloni.

Att utföra alla experiment i svagt ljus är avgörande för att rb inte ska kunna fotobleka. Den elektriska kretsen var i en parallell anslutning så att om ett brott inträffade i en av kretsarna skulle de återstående apparaterna inte påverkas. Om det finns resultat som överträffar andra, arrayen kan kontrolleras först för att säkerställa att alla LED-glödlampor är i god funktion.

En begränsning med att använda en LED-ljuskälla är dess temperaturberoende. I en LED produceras inte värme av själva LED-glödlampan utan genereras vid halvledarkorsningen i enheten9. Eftersom överdrivande lysdioder ovanför deras nominella ström framkallar stigande korsningstemperatur, vilket så småningom leder till för tidigt fel på glödlampan, är det nödvändigt att utrusta enheten med en metallkylafläns för att ge lämplig kylning av korsningen. En annan begränsning av LED-matrisens nuvarande design är det begränsade området upplyst av varje LED-glödlampa, som bara rymmer en enda brunn på en 96-brunnsplatta. Om ett större belysningsområde behövs är ett annat arrangemang av LED-lampor med lämpliga motsvarande avstånd över eller under plattan nödvändigt för att uppnå jämn belysning.

Fördelarna med denna studiedesign är den enkla och billiga installationen av det fotodynamiska systemet för aPDT-experiment. Det kan användas i experiment om svampinfektioner. Virus och bakterier kan också testas i samma system. LED-ljusremsan kan väljas från en annan ljusfärg för att korrelera med absorptionstopparna hos olika fotosensibiliserande medel, allt från synligt till nära infrarött ljusspektrum. De kan enkelt köpas från marknaden. Remsan kan skäras och monteras i olika matriser för att anpassa sig till en 96-brunnsplatta för en analys med hög genomströmning. Användningen av en 96-brunnsplatta möjliggör olika testförhållanden samtidigt för att spara tid och utrymme i labbet.

Sammanfattningsvis är det etablerade systemet i denna studie enkelt, enkelt och mångsidigt för att undersöka olika fotodynamiska effekter på olika mikroorganismer och celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar ingen intressekonflikt.

Acknowledgments

Detta arbete har fått finansiering från Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University från Featured Areas Research Center Program inom ramen för Higher Education Sprout Project av utbildningsministeriet (MOE) och ministeriet för vetenskap och teknik, Taiwan [MOST 109-2327-B-006-005] till TW Wong. J.H. Hung erkänner finansiering från National Cheng Kung University Hospital, Taiwan [NCKUH-11006018] och [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL microfuge tube Neptune, San Diego, USA #3745.x
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap Falcon, USA #352235
96-well plate Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan #16196
Aluminum foil sunmei, Tainan, Taiwan
Aluminum heat sink Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan BK-T220-0051-01 Disperses heat from the LED array.
Centrifuge Eppendorf, UK 5415R
Graph pad prism software GraphPad 8.0, San Diego, California, USA graphing and statistics software
Green light emitting diode (LED) strip Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan 2835 Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63
Incubator Yihder, Taipei, Taiwan LM-570D (R)
Light power meter Ophir, Jerusalem, Israel PD300-3W-V1-SENSOR,
Millex 0.22 μm filter Merck, NJ, USA SLGVR33RS
Multidrug-resistant Candida albicans Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan BCRC 21538/ATCC 10231 http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538
OD600 spectrophotometer Biochrom, London, UK Ultrospec 10
Rose Bengal Sigma-Aldrich, MO, USA 330000 stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium HIMEDIA, India M1363

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).
  2. Pappas, P. G., et al. Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).
  3. Ricotta, E. E., et al. Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017. Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).
  4. Koehler, P., et al. Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis. Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).
  5. Toda, M., et al. Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).
  6. Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. Daylight photodynamic therapy: an update. Molecules. 25 (21), 5195 (2020).
  7. Wainwright, M. Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT). Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).
  8. Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance. Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).
  9. Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
  10. Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit. Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).
  11. Wong, T. W., et al. Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light. Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).
  12. Stasko, N., et al. Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue. Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).
  13. Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).
  14. Feenstra, R. P., Tseng, S. C. Comparison of fluorescein and rose bengal staining. Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).
  15. Demidova, T. N., Hamblin, M. R. Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).
  16. Shahid, H., et al. Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities. Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).
  17. Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).
  18. Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition. Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).
  19. Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).
  20. Martinez, J. D., et al. Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study. Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).

Tags

Immunologi och infektion utgåva 181
Rose Bengal-medied fotodynamisk terapi för att hämma <em>Candida albicans</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., … More

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., Lee, C. N., Chang, Y., Chang, R. Y., Huang, C. C., Wong, T. W. Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans. J. Vis. Exp. (181), e63558, doi:10.3791/63558 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter