Summary
चूहों में पीठ दर्द मॉडल के सरल, तेजी से प्रेरण के तरीके यहां मूत्र प्लास्मिनोजेन एक्टिवेटर के इंट्रालिगामेंट इंजेक्शन का उपयोग करके प्रदान किए गए हैं।
Abstract
पीठ के निचले हिस्से में दर्द को जारी रखने का एक मॉडल यहां वर्णित सरल पद्धति के साथ चूहों में प्रेरित किया जा सकता है। चूहों में एक लगातार पीठ दर्द मॉडल के सरल, तेजी से प्रेरण के लिए चरण-दर-चरण विधियां यहां यूरोकिनेज-प्रकार प्लास्मिनोजेन एक्टिवेटर (यूरोकिनेज), मनुष्यों और अन्य जानवरों में मौजूद एक सेरीन प्रोटीज के इंजेक्शन का उपयोग करके प्रदान की जाती हैं। चूहों में पीठ के निचले हिस्से में लगातार दर्द को शामिल करने की पद्धति में काठ का रीढ़ के लिगामेंटस सम्मिलन क्षेत्र के साथ यूरोकाइनेज का एक सरल इंजेक्शन शामिल है। यूरोकिनेज भड़काऊ एजेंट प्लास्मिनोजेन को प्लास्मिन में सक्रिय करता है। आमतौर पर, मॉडल को 10 मिनट के भीतर प्रेरित किया जा सकता है और अतिसंवेदनशीलता कम से कम 8 सप्ताह तक बनी रहती है।
अतिसंवेदनशीलता, चाल की गड़बड़ी, और अन्य मानक चिंता- और अवसाद जैसे उपायों का परीक्षण लगातार मॉडल में किया जा सकता है। पीठ दर्द दर्द का सबसे प्रचलित प्रकार है। पीठ दर्द के बारे में जागरूकता में सुधार करने के लिए, इंटरनेशनल एसोसिएशन फॉर द स्टडी ऑफ पेन (IASP) ने 2021 को "पीठ दर्द के बारे में वैश्विक वर्ष" और 2022 को "अभ्यास के लिए दर्द ज्ञान का अनुवाद करने के लिए वैश्विक वर्ष" नाम दिया। दर्द चिकित्सा विज्ञान की चिकित्सीय प्रगति की एक सीमा लगातार और पुराने दर्द के परीक्षण के लिए उपयुक्त मॉडल की कमी है। इस मॉडल की विशेषताएं पीठ दर्द और इसकी सहायक विशेषताओं को कम करने के उद्देश्य से संभावित चिकित्सीय परीक्षण के लिए उपयुक्त हैं, जो IASP के नामकरण 2022 को दर्द ज्ञान को अभ्यास में अनुवाद करने के लिए वैश्विक वर्ष के रूप में योगदान देती हैं।
Introduction
कम पीठ दर्द विकलांगता के सबसे आम कारणों में से एक है, दुनिया भर में 5 में से 1 व्यक्ति पीड़ितहै। इन प्रयासों के बावजूद, पीठ दर्द के कुछ विश्वसनीय पशु मॉडल लोकप्रिय रूप से दर्द क्षेत्र में पशु अनुसंधान में उपयोग किए जाते हैं, खासकर चूहों में। पिछले मॉडलों ने लगभग विशेष रूप से पुरानी पीठ दर्द (सीबीपी) को शामिल करने के लिए चूहों का उपयोग किया है जैसे कि काठ का पहलू संयुक्त 2,3 में मूत्र प्लास्मिनोजेन एक्टिवेटर (यूपीए) के इंजेक्शन से प्रेरित, ट्रंक पेस्कुलचर4 में तंत्रिका विकास कारक (एनजीएफ) का इंजेक्शन, या मोनोसोडियम आयोडोसेटेट (एमआईए) 5 या इंटरल्यूकिन -1बीटा6 इंट्रावर्टेब्रल डिस्क में इंजेक्शन। बेशक, चूहों को इन मॉडलों के लिए मुख्य रूप से उनके बड़े आकार और भड़काऊ एजेंटों के इंजेक्शन के लिए पहुंच में आसानी के कारण पसंद किया जाता है।
स्पष्ट होने के लिए, पीठ दर्द के माउस मॉडल मौजूद हैं जैसे कि कई वर्षों सेउपयोग किए जाने वाले इंटरवर्टेब्रल-डिस्क डिजनरेशन के एसपीएआरसी-नल माउस मॉडल, लेकिन ये इंजेक्शन-आधारित मॉडल की तुलना में स्थापित करने के लिए अधिक महंगा और समय लेने वाले हैं। हाल ही में एक माउस अध्ययन ऊर्ध्वाधर पुरानी संयम तनाव8 के साथ कम पीठ की मांसपेशियों में एनजीएफ इंजेक्शन के संयोजन से पीठ के निचले हिस्से में दर्द का एक मॉडल स्थापित किया. निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हमने चूहों2 के लिए चूहों से यूपीए-प्रेरित सीबीपी मॉडल को अनुकूलित किया है। अतिसंवेदनशीलता 1 सप्ताह के भीतर स्थापित होती है और 6-8 सप्ताह तक बनी रहती है। इसके अलावा, हम स्थापित करते हैं कि चूहों में चिंता और अवसाद जैसे व्यवहार विकसित होते हैं। पीठ दर्द की व्यापकता और आणविक दर्द अनुसंधान में चूहों के अधिक सामान्य उपयोग को देखते हुए, यह टिकाऊ मॉडल पीठ दर्द से राहत के लिए नई उपचार रणनीतियों के विकास में उपयोग के लिए आसानी से स्थापित किया गया है।
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Protocol
वर्णित सभी पशु प्रक्रियाएं प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए एनआईएच गाइड के अनुपालन में हैं। न्यू मैक्सिको स्वास्थ्य विज्ञान केंद्र विश्वविद्यालय की स्थानीय संस्थागत देखभाल और उपयोग समिति (IACUC #23-201364-HSC) द्वारा अध्ययन को मंजूरी दी गई थी। सभी अध्ययन अनुसंधान में जानवरों के उपयोग पर OLAW अनुपालन आश्वासन (A3002-01) के तत्वावधान में नीतियों का अनुपालन करते हैं, जैसा कि भाग III में वर्णित है। II. आश्वासन और प्रमाणपत्र. जानवरों को पशु संसाधन केंद्र (एआरसी) आवास सुविधा में रखा जाता है जो प्रयोगशाला कर्मचारियों और प्रयोगशाला और पशु संसाधन विभाग (डीएलएआर) के कर्मचारियों द्वारा बनाए रखा जाता है। इच्छामृत्यु की विधि (59 मिलीग्राम/एमएल पेंटोबार्बिटल इंजेक्शन का 100 माइक्रोन) तेजी से और विश्वसनीय है और आगे के शोध के लिए विभिन्न ऊतकों के विच्छेदन और संग्रह की अनुमति देता है।
1. जानवर
- हाउस वयस्क (~ 3-4 सप्ताह पुराना) नर और मादा बीएएलबी / सी चूहों (20-25 ग्राम) एक रिवर्स 12 एच: 12 एच प्रकाश: अंधेरे चक्र पर, इसलिए अंधेरे में उनका सक्रिय समय प्रयोगशाला के काम के घंटों के दौरान होता है।
नोट: यह जानवरों के प्राकृतिक सक्रिय समय के दौरान सभी मापदंडों के मूल्यांकन की अनुमति देगा क्योंकि कृन्तकों स्वाभाविक रूप से निशाचर जानवर हैं। यह सर्कैडियन घड़ी के परिवर्तनों के योगदान को कम करता है ताकि जानवरों को उनके सक्रिय समय के दौरान परीक्षण किया जा सके जो अब दिन का समय है। - प्रतिदिन दो बार जानवरों की निगरानी करें।
- सामान्य माउस ब्रीडर चाउ पर चूहों को बनाए रखें, जो मानक कृंतक चाउ (अतिसंवेदनशीलता को बदलने के लिए जाना जाता है) की तुलना में सोया प्रोटीन सामग्री में कम है, अगर दर्द से संबंधित व्यवहारों पर दवा के प्रभाव का आकलन किया जाता है।
- स्वस्थ वजन बढ़ाने के रखरखाव को सुनिश्चित करने के लिए सप्ताह में एक बार जानवरों का वजन करें।
नोट: 8-10 सप्ताह के अध्ययनों में वजन में कोई समूह अंतर नहीं देखा गया था, जिसने अध्ययन अंधा करने की अनुमति दी थी।
2. मॉडल प्रेरण
- माउस को जगह में रखने के लिए स्थिरीकरण संयम संलग्न करने के साधन के साथ फिट एक गर्म बाँझ सपाट सतह पर मॉडल प्रेरण करें (चित्र 1A)। एक निष्फल सतह पर एक विच्छेदन खुर्दबीन के साथ सर्जरी प्रदर्शन.
नोट: संज्ञाहरण कैप्चर उपलब्ध नहीं होने पर रासायनिक ग्रेड धूआं हुड का उपयोग करें। - सर्जिकल रेशम या यहां तक कि रबर बैंड के साथ यार्न का उपयोग करें, अगर सामग्री की तालिका में अनुशंसित बेस प्लेट का उपयोग करते हुए, संयम के रूप में प्लेट के काटने का निशानवाला किनारों से जुड़े तारों के अंत में गाँठ लगाया जाता है।
- इंजेक्शन के तुरंत बाद स्टेशन पर चूहों के हस्तांतरण के लिए सर्जरी सेटअप से सटे सतह पर एक हीटिंग पैड रिकवरी स्टेशन रखें (चित्र 1बी)।
नोट: पिंजरे को आरामदायक तापमान (37 डिग्री सेल्सियस) तक गर्म करने की अनुमति देने के लिए इंजेक्शन से कम से कम 10 मिनट पहले हीटिंग पैड पर एक खाली आवास पिंजरे रखें। जागने माउस वसूली तापमान की एक वरीयता की अनुमति देने के लिए, पैड से पिंजरे आधा प्लेस. - यूरोकाइनेज तैयार करें, इसे बाँझ पानी में पतला करें। शराब हैमिल्टन सिरिंज को साफ करें और बाँझ पानी में कुल्ला। अग्रिम में समाधान ड्रा तो माउस संज्ञाहरण के रूप में संभव के रूप में कम से कम समय के लिए है. मॉडल के लिए 2 मिलीग्राम/एमएल मूत्र प्लास्मिनोजेन एक्टिवेटर के 5 माइक्रोन का उपयोग करें; शम्स के लिए, बाँझ खारा के 5 माइक्रोन का उपयोग करें।
- इस छोटी प्रक्रिया के लिए 4% या उससे कम के स्तर पर आइसोफ्लुरेन एनेस्थीसिया स्टेशन सेट करें। प्रेरण कक्ष में माउस रखें; आमतौर पर, माउस की तेजी से सांस लेने की दर 1-2 मिनट के भीतर धीमी हो जाएगी, ऊपरी छाती की गति से निचले छाती तक जाएगी।
- 1.5 एल/मिनट के ऑक्सीजन स्तर और एक सक्रिय चारकोल एफ कनस्तर का उपयोग करें या पशु सर्जन के संपर्क से बचने के लिए आइसोफ्लुरेन को साफ़ करने के लिए जैविक प्रवाह या ओवरहेड निकासी हुड के नीचे काम करें। यदि उपलब्ध नहीं है, तो रासायनिक सुरक्षा हुड में प्रक्रिया करें।
- जल्दी से एक 37 डिग्री सेल्सियस वार्मिंग पैड पर शल्य चिकित्सा क्षेत्र के लिए माउस और संवेदनाहारी प्रवाह स्विच, संवेदनाहारी स्तर (चित्रा 1 सी, डी) को बनाए रखने के लिए नाक में माउस की नाक रखकर. माउस पैर की अंगुली चुटकी करने के लिए कोई प्रतिवर्ती आंदोलन है सुनिश्चित करने के लिए जाँच करें और फिर बेस प्लेट पर माउस को रोकना.
नोट: यदि वहाँ सब पर आंदोलन है, प्रेरण कक्ष में वापस माउस जगह और इस दोहराएँ. - अल्कोहल स्वैब के साथ पीठ की त्वचा के क्षेत्र को साफ करें। एनेस्थेटाइज्ड माउस की पीठ के स्पष्ट दृश्य के लिए आवश्यकतानुसार एलईडी लाइटिंग को समायोजित करें।
नोट: यदि आवश्यक हो, तो माउस की पीठ से बालों को हटाने के लिए एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग करें ताकि त्वचा के नीचे रीढ़ की लकीरों का एक अबाधित दृश्य हो। यदि प्रयोगात्मक चूहों मुंडा रहे हैं, भी अध्ययन अंधा करने के लिए भोले और दिखावा चूहों की पीठ दाढ़ी. - माउस इंजेक्षन जबकि पूरी तरह से संवेदनाहारी और स्थिर (कोई सही पलटा और पैर की अंगुली चुटकी वापसी). दो उंगलियों का प्रयोग धीरे महसूस करने के लिए जहां माउस के ribcage के नीचे रीढ़ (चित्रा 2 ए) से मिलता है. उस बिंदु के नीचे लकड़ी की रीढ़ की हड्डी के खंड हैं; इंजेक्शन को यहां L2-L3 पर लक्षित करें।
- रीढ़ की हड्डी के बगल में हैमिल्टन सिरिंज की नोक रखें (चित्रा 2 बी, सी)। तुरंत हड्डी से सटे interspinous स्नायुबंधन में ~ 45 डिग्री कोण पर सिरिंज निशाना लगाओ.
नोट: माउस की त्वचा की कठोरता के आधार पर, कभी-कभी सक्रिय दबाव के बजाय गुरुत्वाकर्षण पर भरोसा करना और 90 डिग्री कोण बेहतर काम कर सकता है। - सुई की नोक धीरे लेकिन मजबूती से interspinous स्नायुबंधन(चित्रा 3B,C)में डालें।
नोट: लक्ष्य पेट की गुहा को भंग करना नहीं है, बल्कि लिगामेंट को इंजेक्ट करना है। - सुई की सामग्री को धीरे-धीरे खाली करें। यदि किसी भी बिंदु पर टिप पर तरल होता है, तो सुई त्वचा के माध्यम से नहीं होती है। तब तक जारी रखें जब तक कि सभी 5 माइक्रोन इंजेक्ट न हो जाएं।
- इंजेक्शन से बैकफ्लो को रोकने के लिए ~ 5 एस के लिए सुई को पकड़ो। टर्मिनल या तीव्र पायलट परीक्षणों में नीली डाई के उपयोग की सिफारिश की जाती है।
नोट: यदि सही ढंग से किया जाता है, तो तरल को लिगामेंट में फैलाना चाहिए जैसा कि दिखाया गया है (चित्र 3 ए)। - धीरे और धीरे धीरे सुई निकालें. सुनिश्चित करें कि कोई रक्त या निर्वहन नहीं है।
- माउस को एक पिंजरे के शीर्ष के साथ गर्मी वसूली स्टेशन में रखें जब तक कि यह जागता है और घर पिंजरे में लौटने से पहले मोबाइल है।
नोट: यह मानते हुए कि प्रक्रिया जल्दी से की गई थी, माउस के जागने से पहले यह एक मिनट से अधिक नहीं होना चाहिए। - सर्जरी के बाद 1 घंटे के माध्यम से चूहों की जाँच करें सुनिश्चित करने के लिए सभी सामान्य मोटर समारोह एक एहतियात के रूप में जारी है.
नोट: यदि सही तरीके से किया जाता है, तो इस प्रक्रिया से कोई जटिलता नहीं होनी चाहिए। - सर्जरी के बाद सप्ताह के लिए दैनिक चूहों की जाँच करें, वजन मूल्यांकन और इंजेक्शन साइट निरीक्षण सहित सुनिश्चित करें कि कोई संक्रमण या जटिलताएं नहीं हुई हैं। आगे प्रयोग के लिए माउस का उपयोग न करें यदि व्यवहार में कोई परिवर्तन होता है, जैसे वजन घटाने और सुस्ती।
चित्रा 1: यूरोकिनेज सीबीपी प्रेरण के लिए सेटअप। (ए) माउस सर्जरी के लिए अनुशंसित ललित विज्ञान उपकरण बेसप्लेट। काटने का निशानवाला किनारों जगह में माउस पकड़ के लिए उन पर हुक स्ट्रिंग हो सकता है. (बी) रिकवरी स्टेशन। एक खाली आवास पिंजरे की सिफारिश की जाती है, हीटिंग पैड पर आधा, आधा बंद। माउस को आरामदायक विश्राम क्षेत्र देने के लिए तल पर एक साफ कपड़ा रखा जाता है। (सी) संज्ञाहरण मशीन सेटअप सिफारिश। दो-चैनल वितरण प्रणाली का उपयोग करके, एक नली को प्रेरण कक्ष में और दूसरे को सर्जरी स्टेशन पर स्थापित करें। (डी) माउस संयम का एक दृश्य। बेस प्लेट के रिब्ड किनारों पर दो तार गाँठ किए जाते हैं, फिर क्रमशः माउस की गर्दन और पीछे खींच लिया जाता है। सुनिश्चित करें कि माउस को बहुत कसकर न रोकें ताकि वह अभी भी सामान्य रूप से सांस ले सके। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: सीबीपी के यूरोकिनेज इंजेक्शन प्रेरण। (ए) इंजेक्शन साइट प्लेसमेंट का एक दृश्य। जैसा कि दिखाया गया है, L4-L5 के लिए संदर्भ बिंदु के लिए माउस के रिबकेज के नीचे खोजने के लिए उंगलियों से महसूस करें। (बी) इंजेक्शन प्रक्रिया का एक दृश्य, उचित इंजेक्शन के लिए कोण दिखा रहा है। (सी) एक 45 डिग्री कोण यहाँ बेहतर है, लेकिन सुई सुनिश्चित करने के लिए जहां यह करने की जरूरत हो जाता है के रूप में समायोजित करें. यदि आवश्यक हो, तो बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन के लिए इंजेक्शन साइट को शेव करें। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: इंजेक्शन साइट का आरेख। (ए) इंजेक्शन साइट के स्थान की एक तस्वीर। स्याही का उपयोग यहां यह इंगित करने के लिए किया जाता है कि तरल एल 2 और एल 3 कशेरुकाओं के बीच इंटरस्पिनस लिगामेंट में प्रवेश करेगा। (बी) एक तरफ के दृश्य से दिखाया गया सुई और इंजेक्शन साइट के स्थान की उचित स्थिति दिखा रहा एक आरेख। (सी) एक आरेख कशेरुकाओं के ऊपर-नीचे का दृश्य दिखा रहा है, और इंटरस्पिनस लिगामेंट्स के लिए इंजेक्शन साइटें। इंजेक्शन आमतौर पर रीढ़ के बगल में इंटरस्पिनस स्नायुबंधन पर होंगे, लेकिन सुई को बीच की जगह में और इंटरट्रांसवर्स कशेरुकाओं में भी डाला जा सकता है। पायलट परीक्षणों में नीली डाई के उपयोग की सिफारिश की जाती है जैसा कि (ए) में दिखाया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
3. व्यवहार परख
- वॉन फ्रे मैकेनिकल रिफ्लेक्स प्रतिक्रिया थ्रेशोल्ड परीक्षण
नोट: मैकेनिकल निकासी थ्रेशोल्ड ~ 0.2 ग्राम वृद्धि के साथ व्यास में वर्गीकृत 8 वॉन फ्रे मोनोफिलामेंट्स की एक श्रृंखला के साथ 50% समय की प्रतिक्रिया प्राप्त करने के लिए आवश्यक न्यूनतम बल है, जो यांत्रिक बल (सामग्री की तालिका) में लॉग स्टेप परिवर्तन प्रदान करता है।- वॉन फ्रे फाइबर के साथ यांत्रिक उत्तेजना का परीक्षण करें जो हिंदपॉ पर लागू होता है, लुंबोसैक्रल नसों का संक्रमण क्षेत्र। सर्जरी से पहले आधारभूत पंजा वापसी मूल्यों का निर्धारण. सर्जरी के बाद, क्रोनिक प्रयोग के दौरान सप्ताह में एक बार यांत्रिक दहलीज निर्धारित करें।
- आवास कक्ष से जानवरों ले जाएँ और परीक्षण से पहले अपने घर पिंजरों में 30 मिनट के लिए परीक्षण कक्ष में उन्हें acclimate है. वहां से, जानवरों को उनकी गतिविधि के स्तर के आधार पर 15-20 मिनट के लिए स्क्रीन-टॉप परीक्षण तालिका पर छोटे स्पष्ट क्यूबिकल्स में व्यक्तिगत रूप से नियंत्रित करने के लिए ले जाएं।
नोट: परीक्षण चूहों के बाद एक आराम की स्थिति में बस गए हैं और कक्ष में मोड़ और आगे नहीं बढ़ रहे हैं शुरू कर सकते हैं. संयम क्यूबिकल के लिए अनुकूलन तनाव-प्रेरित प्रभावों को कम करता है। चूहों एक रिवर्स प्रकाश चक्र पर बनाए रखा गया है, परीक्षण लाल बत्ती की स्थिति के तहत किया जाना चाहिए. - वॉन फ्रे फाइबर की वर्गीकृत श्रृंखला का उपयोग करके परीक्षण के साथ आगे बढ़ें जैसा कि नीचे वर्णित है और चैपलान एट अल.9 में।
- 3.61 वॉन फ्रे फिलामेंट का उपयोग करके प्रत्येक जानवर पर एक सुसंगत स्थान पर फुटपैड की जांच करें, जो जब तुला हुआ 0.4 ग्राम बल (सामग्री की तालिका) प्राप्त करता है। 4.08 वॉन फ्रे फिलामेंट के साथ उत्तेजना के साथ पालन करें जो 1.0 ग्राम बल को प्राप्त करता है।
नोट: इन तंतुओं में से कोई भी भोले, अभ्यस्त जानवरों में प्रतिक्रियाओं को प्राप्त नहीं करता है। - प्रत्येक फिलामेंट को पैर पैड के लंबवत >5 सेकंड के अंतराल पर 5x लागू करें, सावधान रहें कि एक तह / दरार या बालों को न छुएं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया पांच उत्तेजनाओं में से तीन के लिए एक पैर वापसी है। श्रृंखला में अगले कमजोर फिलामेंट को लागू करें जब तक कि जानवर यांत्रिक उत्तेजना का जवाब नहीं देता है; उस बिंदु पर, अगले उच्च फिलामेंट का उपयोग करें। यदि यह एक प्रतिक्रिया प्राप्त करता है, तो पैर पैड की यांत्रिक उत्तेजना के लिए प्रतिक्रिया के परिवर्तन के बाद चार परीक्षणों को लागू किए जाने तक फिर से निचले फिलामेंट का उपयोग करें।
- यांत्रिक वापसी सीमा की गणना करने के लिए परिणामी प्रतिक्रिया पैटर्न का उपयोग करें, वक्र फिटिंग एल्गोरिथ्म9 का उपयोग करके, 50% समय की प्रतिक्रिया प्राप्त करने के लिए आवश्यक बल की न्यूनतम मात्रा। भोले चूहों या जानवर की अपनी आधार रेखा की तुलना में पैर वापसी प्रतिक्रिया प्राप्त करने के लिए आवश्यक बल में कमी जानवर की बढ़ती संवेदनशीलता को इंगित करती है।
- 3.61 वॉन फ्रे फिलामेंट का उपयोग करके प्रत्येक जानवर पर एक सुसंगत स्थान पर फुटपैड की जांच करें, जो जब तुला हुआ 0.4 ग्राम बल (सामग्री की तालिका) प्राप्त करता है। 4.08 वॉन फ्रे फिलामेंट के साथ उत्तेजना के साथ पालन करें जो 1.0 ग्राम बल को प्राप्त करता है।
- थर्मल रिफ्लेक्स प्रतिक्रिया थ्रेशोल्ड परीक्षण
नोट: गर्मी और ठंड प्रतिक्रिया थ्रेसहोल्ड क्रमशः हरग्रेव्स और कोल्ड प्लेट परीक्षणों के साथ पता लगाया जाता है।- हरग्रीव्स परीक्षण
- क्यूबिकल्स में चूहों को एक कांच की सतह पर रखें जो नीचे से एक अवरक्त उत्सर्जक के साथ गरम किया जाता है। उत्तेजना से वापसी तक माउस के हिंद पंजा पर उपकरण द्वारा प्रदान की अवरक्त प्रकाश (50 डिग्री सेल्सियस) उत्तेजना के आवेदन से सेकंड में समय के रूप में पैर वापस लेने के लिए विलंबता रिकॉर्ड.
- कोल्ड प्लेट टेस्ट
- -9 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा ठंडा प्लेट तंत्र पर चूहों रखें. उपकरण पर माउस की नियुक्ति से सेकंड में समय के रूप में पैर वापस लेने के लिए विलंबता रिकॉर्ड जब तक माउस अपने पैर उठाने शुरू होता है.
- वैकल्पिक रूप से, माउस एक तार जाल के शीर्ष पर बंद है, जबकि माउस हिंद पंजा के नीचे -9 डिग्री सेल्सियस के लिए ठंडा एक ठंड जांच जगह है. हिंद पंजा के नीचे तंत्र के प्लेसमेंट से सेकंड में समय के रूप में वापस लेने के लिए विलंबता रिकॉर्ड जब तक माउस पैर उठाने, चाटना, या मिलाते हुए शुरू होता है. एक nociceptive प्रतिक्रिया evoking से बचने के लिए, कमरे के तापमान पर जांच से छुआ जा रहा करने के लिए माउस acclimate.
- हरग्रीव्स परीक्षण
- अनुभूति- और भावना-निर्भर व्यवहार परख
नोट: जानवरों में लंबे समय तक चलने वाली अतिसंवेदनशीलता भावनात्मक और अनुभूति-निर्भर शिथिलता पैदा करती है। ये आम तौर पर सप्ताह में केवल एक बार मापा जाता है 6 अभ्यास प्रभाव से बचने के लिए दर्द मॉडल प्रेरण के बाद.- चिंता परीक्षण
नोट: मॉडल की प्रभावशीलता का पता लगाने के लिए चिंता और अवसाद का भी मज़बूती से परीक्षण किया जा सकता है। प्रेरण इंजेक्शन के बाद कम से कम सप्ताह 4-6 तक इंतजार करना सबसे अच्छा है ताकि सहरुग्णता विकसित हो सके। प्रकाश कक्ष के बजाय अंधेरे के लिए वरीयता नोसिसेप्शन से संबंधित चिंता का एक उपाय है। शून्य या प्लस भूलभुलैया परीक्षण में, दर्द मॉडल चूहों भोले नियंत्रण जानवरों, चिंता की तरह व्यवहार10,11 का एक प्रदर्शन की तुलना में खुले quadrants में कम समय बिताने.- प्रकाश/अंधेरे जगह वरीयता परीक्षण: दो कक्षों (10 x 10 x 10 सेमी3) के बीच एक मार्ग के साथ जगह वरीयता परीक्षण बॉक्स में प्रत्येक जानवर जगह. तंत्र का एक कक्ष उज्ज्वल रूप से जलाया जाता है, जबकि विपरीत पक्ष अंधेरा रहता है। प्रत्येक 10 मिनट परीक्षण के दौरान, प्रकाश और अंधेरे अधिभोग बार और संक्रमण की संख्या निर्धारित करने के लिए कंप्यूटर द्वारा जानवर के स्थान की निगरानी.
नोट: वैकल्पिक रूप से, परीक्षण कक्ष पर एक वीडियो कैमरा माउंट करें और प्रत्येक कक्ष में बिताए गए समय को मैन्युअल रूप से रिकॉर्ड करें। - ऊंचा प्लस या शून्य भूलभुलैया: भूलभुलैया पर मॉडल कृन्तकों या भोले जानवरों को रखें और भूलभुलैया के बंद हिस्सों में बिताए गए समय का आकलन करने के लिए स्टॉपवॉच का उपयोग करें। दो दीवारों वाले "सुरक्षित" क्षेत्रों और दो खुले "असुरक्षित" क्षेत्रों में बिताए गए समय का निर्धारण करें। दर्द वाले जानवर बंद सुरक्षित क्षेत्रों को पसंद करते हैं।
नोट: चिंता की तरह व्यवहार या तो एक शून्य या प्लस भूलभुलैया (10 मिनट) में परीक्षण किया जा सकता है. शून्य भूलभुलैया प्लस भूलभुलैया के विपरीत एक गोलाकार ट्रैक है, जो "प्लस साइन आकार" है। दोनों में दो खुले और दो संलग्न चतुर्थांश हैं जो निरंतर खोजपूर्ण व्यवहार की अनुमति देते हैं। दोनों को जमीन से 1 मीटर ऊपर उठाया जाता है, या तो एक गोलाकार या प्लस-आकार का पैदल मार्ग चार समान आकार के चतुर्थांशों में विभाजित होता है।
- प्रकाश/अंधेरे जगह वरीयता परीक्षण: दो कक्षों (10 x 10 x 10 सेमी3) के बीच एक मार्ग के साथ जगह वरीयता परीक्षण बॉक्स में प्रत्येक जानवर जगह. तंत्र का एक कक्ष उज्ज्वल रूप से जलाया जाता है, जबकि विपरीत पक्ष अंधेरा रहता है। प्रत्येक 10 मिनट परीक्षण के दौरान, प्रकाश और अंधेरे अधिभोग बार और संक्रमण की संख्या निर्धारित करने के लिए कंप्यूटर द्वारा जानवर के स्थान की निगरानी.
- सुक्रोज स्पलैश अवसाद परीक्षण
नोट: सुक्रोज स्पलैश परीक्षण का उपयोग अवसाद जैसे व्यवहार को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। स्पलैश परीक्षण पुराने दर्द के परिणामस्वरूप अवसाद के लक्षण के रूप में सामान्य सौंदर्य व्यवहार की अनुपस्थिति की माप की अनुमति देता है।- पृष्ठीय कोट (पूंछ के आधार के पास ~ 250 माइक्रोन) पर 10-30% सुक्रोज समाधान छिड़काव के बाद 10 मिनट के लिए संवारने की आवृत्ति, अवधि और विलंबता स्कोर करें। अंधे पर्यवेक्षकों ने वीडियो टेप रिकॉर्डिंग12 से संवारने वाले युद्धाभ्यास की संख्या की गणना की है।
नोट: इस सूचकांक को मूड विकारों के कृंतक मॉडल में प्रभावित होने की सूचना दी गई है, जैसे कि पुरानी हल्के तनाव, और पुरानी अवसादरोधी उपचार13 द्वारा ठीक किया जाना है।
- पृष्ठीय कोट (पूंछ के आधार के पास ~ 250 माइक्रोन) पर 10-30% सुक्रोज समाधान छिड़काव के बाद 10 मिनट के लिए संवारने की आवृत्ति, अवधि और विलंबता स्कोर करें। अंधे पर्यवेक्षकों ने वीडियो टेप रिकॉर्डिंग12 से संवारने वाले युद्धाभ्यास की संख्या की गणना की है।
- उपन्यास वस्तु परीक्षण
नोट: संज्ञानात्मक शिथिलता उपन्यास वस्तु परीक्षण के साथ औसत दर्जे का है।- 1 घंटे के लिए एक खुले शीर्ष (56 x 30 x 20 सेमी) के साथ एक स्पष्ट प्लास्टिक पिंजरे में व्यक्तिगत रूप से चूहों को अनुकूलित करें। 5 मिनट के लिए पिंजरे के विपरीत कोनों में दो समान खिलौना minifigures जोड़ें.
- परीक्षण के दिन, जानवरों को घर पिंजरे में लौटने से पहले 5 मिनट के लिए पिंजरे के एक ही स्थिति में दो समान मिनी आंकड़े रखने से पहले 1 घंटे के लिए फिर से स्पष्ट पिंजरे के लिए acclimate.
- एक अलग उपन्यास वस्तु के साथ मूल आंकड़े में से एक को बदलें, परीक्षण पिंजरे 4 घंटे बाद चूहों को लौटें, और वस्तुओं की खोज में बिताए समय को रिकॉर्ड करें।
- कुल वस्तु अन्वेषण समय14 की उपन्यास वस्तु की खोज में खर्च प्रतिशत समय के रूप में रिपोर्ट मान्यता सूचकांक (आरआई) की गणना करें.
- मोटर फ़ंक्शन मूल्यांकन
नोट: इंकब्लॉट गतिशीलता और चाल गड़बड़ी परीक्षण15 पीठ दर्द मॉडल में मोटर फ़ंक्शन का आकलन करता है।- एक किनारे पर लंबाई में कटे हुए पेपर टॉवल ट्यूब से एक सुरंग का निर्माण करें। प्रिंटर पेपर के एक साफ टुकड़े पर सुरंग को फैलाएं।
- चूहों को धीरे से एक तौलिया में लपेटें जब तक कि वे शांत न हों। पंजे को गैर विषैले भारत स्याही से गीले स्टैम्प पैड पर रखें ताकि उन्हें स्याही से कोट किया जा सके या कपास झाड़ू का उपयोग करके माउस के पैरों के तल पर स्याही पेंट की जा सके। सुरंग के प्रवेश द्वार पर चूहों को छोड़ दें और उन्हें सुरंग के माध्यम से चलाने दें, अंत में उन्हें पकड़ लें।
- तीन मापदंडों के आधार पर स्कोर पंजा प्रिंट: स्ट्राइड लंबाई (एक प्रिंट के पीछे के छोर से अगले तक ऊर्ध्वाधर दूरी), स्ट्राइड चौड़ाई (प्रिंट के बीच क्षैतिज दूरी), और पैर की अंगुली फैल (पंजा के विपरीत किनारों पर पैर की उंगलियों के बीच की दूरी)।
नोट: अनुमोदित व्यवहार भी सुरंग के माध्यम से आने के लिए माउस को प्रोत्साहित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यदि पंजा प्रिंट धब्बा या अस्पष्ट हैं, तो प्रयोग दोहराया जाना चाहिए।
- चिंता परीक्षण
चित्रा 4: सीबीपी प्रेरण के बाद यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलता। मॉडल प्रेरण के एक सप्ताह बाद दर्द मापने योग्य है और 8 सप्ताह तक बना रहता है। (ए) वॉन फ्रे परीक्षण। मैकेनिकल थ्रेशोल्ड परीक्षण वॉन फ्रे फिलामेंट्स के साथ किया जाता है जो ऊपर-नीचे विधि के साथ एक जाल शीर्ष तालिका के माध्यम से फुटपैड पर लागू होता है जैसा कि 4 सप्ताह के दौरान यहां दिखाया गया है। भोली नर थ्रेसहोल्ड (हरा) भोली मादा चूहों के लिए नीली रेखा के नीचे छिपा हुआ है। सीबीपी चूहों (एन = 4 पुरुष, 4 महिलाओं) ने भोले नियंत्रण (एन = 2 पुरुष, 2 महिलाएं) की तुलना में यांत्रिक संवेदनशीलता में काफी वृद्धि दिखाई। दो-तरफा एनोवा (डनेट के कई तुलना परीक्षण) इन आंकड़ों पर किया गया था: एन = 4 प्रति समूह। पोस्ट-हॉक विश्लेषणों में, सीबीपी बनाम भोले की सप्ताह-दर-सप्ताह तुलना के लिए सभी पी-मूल्यों के लिए बोनफेरोनी समायोजन ने 0.0011 < सभी 11 मूल्यों को प्राप्त किया। पी < 0.0001। (बी) हरग्रीव्स परीक्षण। गर्मी दहलीज का परीक्षण फुटपैड पर हरग्रेव्स परीक्षण (50 डिग्री सेल्सियस) के साथ किया गया था। सीबीपी चूहों (एन = 12 पुरुषों, 12 महिलाओं) ने भोले नियंत्रण (एन = 6 पुरुष, 6 महिलाएं) की तुलना में गर्मी संवेदनशीलता में काफी वृद्धि दिखाई। मान-व्हिटनी दो-पूंछ वाले टी-टेस्ट को महत्व का परीक्षण करने के लिए किया गया था (पी < 0.0001)। (सी) शीत संवेदनशीलता। ठंड जांच परीक्षण -9 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा ठंडा प्लेट तंत्र पर चूहों को रखकर किया गया था। वापस लेने के लिए विलंबता उपकरण पर माउस की नियुक्ति से सेकंड में समय के रूप में दर्ज की गई थी जब तक माउस पैर उठाने, चाटना, या मिलाते हुए शुरू होता है. दिखाए गए आंकड़ों में, -9 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा एक ठंडा जांच माउस के हिंद पंजे के नीचे रखा गया था, जबकि माउस एक तार जाल के शीर्ष पर बंद है। सभी चूहों इंजेक्शन के बाद 1-3 सप्ताह परीक्षण किया गया. सीबीपी चूहों (एन = 4 पुरुष, 6 महिलाओं) ने भोले नियंत्रण (एन = 2 पुरुष, 4 महिलाएं) की तुलना में ठंड संवेदनशीलता में काफी वृद्धि दिखाई। मान-व्हिटनी दो-पूंछ वाले टी-टेस्ट को महत्व (पी = 0.0002) का परीक्षण करने के लिए किया गया था। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Representative Results
नोसिसेप्टिव-संबंधित व्यवहार परीक्षण और डेटा विश्लेषण
विकसित उपाय
फुटपैड पर अतिसंवेदनशीलता यूरोकाइनेज इंजेक्शन के एक दिन के भीतर विकसित होती है। 1 सप्ताह के भीतर, निकासी सीमा काफी कम हो जाती है और इच्छामृत्यु तक बनी रहती है; यह पोस्टसर्जिकल सप्ताह 4 (चित्रा 4 ए) के माध्यम से दिखाया गया है। पंजा वापसी विलंबता का विश्लेषण वॉन फ्रे अप-डाउन विधि9 और हरग्रेव्स परीक्षण का उपयोग करके किया जाता है। प्लॉट किए गए उदाहरण में, सीबीपी (एन = 4 पुरुष, 4 महिलाएं) वाले चूहों ने नियंत्रण (एन = 2 पुरुष, 2 महिलाएं) की तुलना में यांत्रिक संवेदनशीलता में काफी वृद्धि दिखाई। मॉडल सप्ताह 6-7 में नष्ट हो जाता है। यह समय पाठ्यक्रम यौगिकों के मूल्यांकन को पुराने समय बिंदुओं पर अतिसंवेदनशीलता को कम करने की अनुमति देता है, जो नैदानिक रोगियों में दर्द के अनुभव के वर्षों के बराबर है। रिफ्लेक्सिव वॉन फ्रे परीक्षण को एक ही दिन में कई बार दोहराया जा सकता है जब एक अल्पकालिक यौगिक की प्रभावकारिता निर्धारित की जा रही हो।
वॉन फ्रे यांत्रिक संवेदनशीलता परीक्षण
फुटपैड की संवेदनशीलता, और इस प्रकार, पीठ दर्द मॉडल की गंभीरता को परिभाषित तन्य शक्ति के साथ वर्गीकृत वॉन फ्रे फिलामेंट्स से वापसी की घटनाओं की संख्या से निर्धारित किया जाता है। सबसे कम फाइबर (0.008 ग्राम, 1.65) के साथ उत्तेजना आमतौर पर एलोडोनिया के गंभीर मामलों को छोड़कर पता लगाने योग्य नहीं है; सबसे बड़ा फाइबर (6.0 ग्राम, 4.74) एक कुंद पेपर क्लिप अंत के आकार के बारे में है, और हालांकि इसे माउस द्वारा महसूस किया जा सकता है, एक भोला माउस आमतौर पर आवेदन पर नहीं भड़केगा। पशु स्वेच्छा से अपने पैर को उत्तेजना से दूर ले जाने के लिए स्वतंत्र हैं। निकासी की घटनाओं की औसत घटना को पांच में से प्रतिक्रियाओं की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है, जिसमें शून्य कोई वापसी नहीं दर्शाता है, और पांच निकासी की अधिकतम संख्या का संकेत देता है। नियंत्रणों की तुलना में कम तंतुओं के प्रति प्रतिक्रियाएं संवेदनशीलता में वृद्धि का संकेत देती हैं। इस मॉडल को शामिल करने के बाद, सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता एक सप्ताह के भीतर विकसित होती है और इंजेक्शन के बाद कई हफ्तों तक बनी रहती है (चित्र 4ए)।
Hargreaves थर्मल संवेदनशीलता सीमा परीक्षण
आईआर प्रेरित गर्मी उत्तेजना के संपर्क में आने के बाद सेकंड में पैर की वापसी (बीच) समूहों के बीच तुलना की जाती है। सेकंड में वापसी विलंबता में कमी गर्मी अतिसंवेदनशीलता (चित्रा 4बी) को इंगित करती है। पशु स्वेच्छा से अपने पैर को उत्तेजना से दूर ले जाने के लिए स्वतंत्र हैं।
शीत जांच थर्मल अतिसंवेदनशीलता
पीठ दर्द मॉडल फुटपैड पर ठंड अतिसंवेदनशीलता को प्रेरित करता है। पशु स्वेच्छा से अपने पैर को उत्तेजना से दूर ले जाने के लिए स्वतंत्र हैं। सेकंड में वापसी विलंबता में कमी ठंड अतिसंवेदनशीलता(चित्रा 4सी)इंगित करती है। वापसी विलंबता एक स्टॉपवॉच के साथ लिया गया था जब ठंड उत्तेजना माउस को एक वापसी व्यवहार, चाटना, झिलमिलाहट, या प्रभावित हिंद पंजा के बार-बार उठाने का प्रदर्शन करने के लिए लागू किया गया था।
गैर-विकसित सहज दर्द के उपाय
चित्रा 5: परिवर्तित गैर-विकसित व्यवहार उपाय। (ए) सीबीपी मॉडल में चिंता। अंधेरे बॉक्स के प्रकाश कक्ष में बिताए गए कुल समय और पालन की घटनाओं की संख्या सीबीपी के साथ चूहों में काफी कम है, जो चिंता का संकेत देती है। इन आंकड़ों पर एक तरफा एनोवा (डनेट के कई तुलना परीक्षण) का प्रदर्शन किया गया था: (एन = 4 सीबीपी, एन = 6 भोला)। विशिष्ट समूह साधनों के बीच अंतर की पुष्टि करने के लिए टुकी पोस्ट-हॉक परीक्षण किया गया था। * पी < 0.05, ** पी < 0.01। (बी) सीबीपी मॉडल में अवसाद। संवारने में बिताया गया कुल समय और सुक्रोज स्पलैश परीक्षण के दौरान तैयार किए गए समय की संख्या सीबीपी के साथ चूहों में काफी कम है, जबकि संवारने से पहले समय की मात्रा में काफी वृद्धि हुई थी। इन आंकड़ों पर एक तरफा एनोवा (डनेट के कई तुलना परीक्षण) का प्रदर्शन किया गया था: (एन = 4 सीबीपी, एन = 6 भोला)। विशिष्ट समूह साधनों के बीच अंतर की पुष्टि करने के लिए टुकी पोस्ट-हॉक परीक्षण किया गया था। * पी < 0.05, *** पी < 0.001। (सी)सीबीपी मॉडल के साथ चूहों में स्ट्राइड परिवर्तन। सीबीपी और भोले चूहों के साथ चूहों के बीच स्ट्राइड की लंबाई काफी अलग थी। इन आंकड़ों पर एक तरफा एनोवा (डनेट के कई तुलना परीक्षण) का प्रदर्शन किया गया था: एन = 4 प्रति समूह। विशिष्ट समूह साधनों के बीच अंतर की पुष्टि करने के लिए टुकी पोस्ट-हॉक परीक्षण किया गया था। ** पी < 0.01। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
प्रकाश/गहरा परीक्षण
एक मानक प्रकाश/अंधेरे कक्ष चिंता विश्लेषण10 के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. पीठ दर्द मॉडल वाले चूहे प्रकाश कक्ष में समय बिताने की संभावना काफी कम होते हैं और कम पालन व्यवहार करते हैं, जो चिंता और मॉडल की गंभीरता का संकेत है। वैकल्पिक रूप से, ऊंचा शून्य या प्लस भूलभुलैया का उपयोग चिंता जैसे व्यवहारों को मापने के लिए किया जा सकता है। चिंता की तरह व्यवहार प्रदर्शित एक दर्द मॉडल के साथ कृंतक प्रवेश करते हैं और भोले नियंत्रण जानवरों (चित्रा 5 ए) की तुलना में खुले चतुर्थांश में कम समय बिताते हैं।
अवसाद जैसा व्यवहार
सुक्रोज स्पलैश टेस्ट का उपयोग पीठ दर्द मॉडल11 में अवसाद जैसे व्यवहार का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। परीक्षण प्रेरित दर्द मॉडल12,13 से उत्पन्न अवसाद का एक संकेत के रूप में सौंदर्य व्यवहार की अनुपस्थिति का आकलन करता है. पीठ दर्द के साथ चूहे काफी कम बार और कुल मिलाकर कम समय के लिए दूल्हे के साथ-साथ संवारना शुरू करने में अधिक समय लेते हैं (दूल्हे के लिए विलंबता)(चित्रा 5बी)।
गतिशीलता मोटर व्यवहार
अंत में, इंकब्लॉट परीक्षण का उपयोग मॉडल औरनियंत्रण चूहों 15 के बीच चाल अंतर को अलग करने के लिए किया जा सकता है। पीठ दर्द के साथ चूहों नियंत्रण (चित्रा 5C) की तुलना में काफी कम और व्यापक कदम दिखा. समूह तुलना के लिए स्ट्राइड लंबाई को मापें, स्ट्राइड उपस्थिति में अंतर को ध्यान में रखते हुए।
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Discussion
पुरानी पीठ दर्द का यह मॉडल प्रेरित करने के लिए सरल है, और 1 सप्ताह के भीतर स्थापित अतिसंवेदनशीलता 8 सप्ताह तक (और संभवतः उससे परे) तक रह सकती है। यह अन्य तीव्र मॉडल के विपरीत पुराने दर्द की स्थिति के सटीक अध्ययन की अनुमति देता है जो केवल एक या दो सप्ताह तक रहता है। जबकि हम चूहों में मॉडल दिखाते हैं, यूपीए-प्रेरित सीबीपी मॉडल चूहों2 में भी स्थापित किया जा सकता है। मॉडल का एक फायदा यह है कि लंबे समय तक पाठ्यक्रम चिंता के विकास को उत्तेजित करता है- और अवसाद जैसे व्यवहार, जो पुरानी पीठ के निचले हिस्से में दर्द वाले रोगियों में देखे जाते हैं। पीठ दर्द16 की व्यापकता को देखते हुए, आणविक दर्द अनुसंधान में अधिक सामान्यतः इस्तेमाल किया माउस मॉडल में प्रदर्शन करने की क्षमता एक फायदा है.
यूपीए का उपयोग करके एक दर्द मॉडल का यह प्रेरण ऑस्टियोआर्थराइटिस3 को प्रेरित करने के लिए एक इंट्राआर्टिकुलर इंजेक्शन के साथ इसी तरह किया गया है, लेकिन यहां दिखाए गए विधि (इंट्रालिगामेंट) को जल्दी और माउस को नुकसान के बहुत कम जोखिम के साथ किया जा सकता है। कोई टांके की जरूरत नहीं है, और आर्टिकुलर गुहा के पंचर होने के कारण ब्लीडआउट का कोई खतरा नहीं है। चूंकि यह थोड़ा प्रारंभिक कार्य के साथ एक एकल इंजेक्शन है, इसलिए अधिक सटीक परिणामों के लिए तकनीशियनों को समूहों में अंधा करना भी आसान है।
इस मॉडल की मुख्य सीमा में वॉन फ्रे परीक्षण के लिए चूहों का उचित अनुकूलन शामिल है; वास्तव में, यह अनुशंसा की जाती है कि चूहों को मॉडल प्रेरण से कम से कम एक सप्ताह पहले उनके क्यूबिकल और फिलामेंट्स के लिए अभ्यस्त किया जाए ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि फ्लिंच प्रतिक्रिया उस वातावरण की नवीनता के कारण नहीं है जिसमें वे हैं या उनके पैरों के नीचे कुछ हिलते हुए देखने के कारण नहीं है।
यह महत्वपूर्ण है कि इंजेक्शन को स्नायुबंधन में बनाया जाए ताकि यूरोकाइनेज के लिए अधिकतम प्रतिक्रिया सुनिश्चित हो और मांसपेशियों में न कि मांसपेशियों में जो लगभग आधी प्रतिक्रिया पैदा करता है। चूंकि इंजेक्शन रीढ़ के करीब है, इसलिए कम से कम 1 सप्ताह के लिए इंजेक्शन के बाद सभी चूहों की निगरानी करना अभी भी महत्वपूर्ण है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि प्रक्रिया से कोई जटिलता नहीं है। किसी भी माउस सुस्ती, वजन घटाने, पक्षाघात, असामान्य व्यवहार, या इंजेक्शन साइट के अत्यधिक संवारने के लक्षण दिखाता है, अध्ययन से माउस को हटाने पर विचार.
भविष्य के अध्ययन पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया की जांच करेंगे (DRG) इन विट्रो पैच क्लैंप रिकॉर्डिंग के साथ. प्रवाह विश्लेषण न्यूरोइम्यून प्रतिक्रिया और डीआरजी में हमलावर भड़काऊ कोशिकाओं की उपस्थिति का निर्धारण करेगा।
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Disclosures
लेखक कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हितों की घोषणा नहीं करते हैं। KNW NeuroChronix, Bessor Pharma, और USA Elixeria BioPharm, Inc. के साथ अवैतनिक परामर्श को स्वीकार करता है।
Acknowledgments
अनुदान निधि NIH हील UG3 NS123958 द्वारा प्रदान की गई थी। आवास सुविधाओं का निरीक्षण किया गया और AAALAC द्वारा मान्यता प्राप्त की गई। जानवरों को पशु संसाधन केंद्र (एआरसी) आवास सुविधा में रखा गया था, जो प्रयोगशाला कर्मचारियों और प्रयोगशाला और पशु संसाधन विभाग (डीएलएआर) के कर्मचारियों द्वारा बनाए रखा गया था। व्यवहार परीक्षण के लिए प्रक्रियाएं अमेरिकन पेन सोसाइटी और इंटरनेशनल एसोसिएशन फॉर द स्टडी ऑफ पेन द्वारा अनुमोदित क्षेत्र में मानक तरीके हैं। इच्छामृत्यु की विधि अमेरिकन वेटरनरी मेडिकल एसोसिएशन के इच्छामृत्यु पर पैनल की सिफारिशों के अनुरूप है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals and Consumables | |||
| 70% ethanol | Local Source | ||
| BALB/c mice | Envigo | 20-25 g | |
| Cotton balls | Fisher Scientific | 19-090-702 | |
| Cotton-tipped applicators | Fisher Scientific | 19-062-616 | |
| Isoflurane inhalant anesthetic | MedVet | RXISO-250 | |
| Labeling tape | Fisher Scientific | NGFP7002 | |
| Nitrile exam gloves | Fisher Scientific | ||
| Oxygen tank | Local Source | ||
| Surgical drape, Steri-Drape Utility Sheet, Absorbent Prevention | VWR | 76246-788 | cut into 15 x 15 cm pieces |
| Tygon tubing with 3 mm inner diameter | Grainger | 22XH87 | |
| Equipment | |||
| #11 carbon steel scalpel blades | VWR | 21909-612 | |
| Anesthesia induction chamber | Summit Medical Equipment Company | AS-01-0530-LG | |
| Autoclave | Local Unit | ||
| Biology Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-30 | |
| Glass bead sterilizer Germinator 500 | VWR | 102095-946 | |
| IITC Life Sciences Series 8 Model PE34 Hot/Cold Plate Analgesia Meter | IITC | PE34 | |
| Integra Miltex cotton & dressing pliers | Safco Dental Supply | 66-317 | |
| OPTIKA CL31 double arm LED illuminator | New York Microscope Company | OPCL-31 | |
| Plantar Test System with InfraRed Emitter, i. e. Hargreaves Apparatus | Ugo Basile | 37370-001 and 37370-002 | |
| Scalpel Handle No. 3 | VWR | 25607-947 | |
| Small animal heating pad | Valley Vet Supply | 47375 | |
| Student Vannas spring scissors, straight blade | Fine Science Tools | 91500-09 | |
| Table top animal research portable anesthesia workstation “PAM” | Patterson Scientific | AS-01-0007 | |
| Von Frey Filaments | Ugo Basile | 37450-275 |
References
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