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Medicine

सेक्स हार्मोन उत्पादन को कम करने के लिए मुराइन ऑर्किक्टॉमी और ओवरीक्टॉमी

Published: November 17, 2023 doi: 10.3791/64379
Automatic Translation
1, 1, 1, 1,2,3,4
1Department of Ophthalmology, UT Southwestern Medical Center, 2Department of Molecular Biology, UT Southwestern Medical Center, 3Hamon Center for Regenerative Science and Medicine, UT Southwestern Medical Center, 4Peter O'Donnell Jr. Brain Institute, UT Southwestern Medical Center

Summary

यह पांडुलिपि जीवित कृंतक ऑर्किक्टॉमी और अंडाशय को जल्दी से करने के लिए एक सुसंगत तरीके का वर्णन करती है।

Abstract

सेक्स हार्मोन सिग्नलिंग कई अंग प्रणालियों के साथ-साथ न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारी सहित विभिन्न बीमारियों की प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। मुराइन मॉडल सिस्टम में सेक्स हार्मोन के स्तर में हेरफेर अंगों / ऊतकों पर और रोग की प्रगति के भीतर उनके प्रभाव के अध्ययन की अनुमति देता है। ऑर्किक्टॉमी - वृषण का सर्जिकल निष्कासन - और अंडाशय - अंडाशय का सर्जिकल निष्कासन - अंतर्जात सेक्स हार्मोन को कम करने के लिए एक विधि प्रदान करता है ताकि दवा या अन्य वितरण विधियों के माध्यम से सटीक हार्मोन का स्तर प्रदान किया जा सके। यहां, हम सेक्स हार्मोन की कमी के लिए मुराइन मॉडल सिस्टम में ऑर्किक्टॉमी और ओवरीक्टॉमी दोनों के लिए तेजी से और न्यूनतम इनवेसिव तरीके प्रदान करते हैं। यह प्रोटोकॉल अंडकोश थैली के माध्यम से वृषण की शल्य चिकित्सा तैयारी और छांटने का विवरण देता है, और दाएं और बाएं पार्श्व डोरसम में दो चीरों के माध्यम से अंडाशय का छांटना है।

Introduction

वृषण और अंडाशय सेक्स हार्मोन उत्पादन के लिए जिम्मेदार प्राथमिक अंग हैं। टेस्टोस्टेरोन और एस्ट्रोजन के उत्पादन के लिए अग्रणी हार्मोनल संचार का कैस्केड एक अच्छी तरह से विशेषता वाली प्रक्रिया है जो हाइपोथैलेमस में गोनाडोट्रोपिन-रिलीजिंग हार्मोन (जीएनआरएच) 1 की रिहाई के साथ शुरू होती है। जीएनआरएच की रिहाई पिट्यूटरी ग्रंथि से ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच) और कूप-उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच) की रिहाई का कारण बनती है। जैसे ही ये हार्मोन रक्तप्रवाह में प्रवेश करते हैं, वे फिर शरीर के अन्य ऊतकों को प्रभावित करते हैं। एलएच का प्राथमिक लक्ष्य वृषण (पुरुषों में) और अंडाशय (महिलाओं में) 2 है। एलएच के जवाब में, वृषण टेस्टोस्टेरोन3 का उत्पादन और रिलीज करते हैं। इसी तरह, अंडाशय एस्ट्रोजन4 का उत्पादन करते हैं। जबकि इन हार्मोनों के इच्छित प्रभाव निषेचन के लिए कोशिकाओं और शरीर को तैयार करने और एक कार्यशील प्रजनन प्रणाली सुनिश्चित करने के लिए हैं, कई अन्य शारीरिक प्रणालियां प्रभावित हो सकती हैं।

सेक्स हार्मोन को कई शारीरिक कार्यों से जोड़ा गया है। उदाहरण के लिए, एस्ट्रोजन ओस्टियोक्लास्ट द्वारा हड्डी के पुनरुत्थान को रोककर हड्डी होमियोस्टैसिस को बनाए रखने में मदद करता है। इस कारण से, अंडाशय युक्त माउस मॉडल का उपयोग ऑस्टियोपोरोसिस 5,6,7 जैसे हड्डी रोगों के शरीर विज्ञान का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। टेस्टोस्टेरोन और एस्ट्रोजन भी कई कार्डियोवैस्कुलर और न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों के लिए अनुसंधान लक्ष्य हैं। हाल ही में, उच्च वसा वाले आहार के साथ युग्मित ऊंचा टेस्टोस्टेरोन उत्पादन संवहनी ऑक्सीडेटिव तनाव8 से जुड़ा हुआ है। मस्तिष्क में, अंडाशय के बाद एलएच में परिवर्तन नेस्थानिक स्मृति में परिवर्तन का कारण बना है। अंडाशय के बाद एस्ट्रोजेन की कमी हिप्पोकैम्पस में कोशिका मृत्यु का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल प्रणाली भी बन गई है, क्योंकि यह एपोप्टोसिस को प्रेरित कर सकती है, जिसके परिणामस्वरूप स्मृति की कमी10 हो सकती है। टेस्टोस्टेरोन ने किडनी प्रत्यारोपण के बाद माउस मॉडल और मनुष्यों दोनों में गुर्दे के विकास में भी भूमिका निभाईहै।

एक हार्मोन-वंचित मुराइन मॉडल का निर्माण विभिन्न बीमारियों या ऊतकों पर सेक्स हार्मोन और उनके हार्मोन कैस्केड के अध्ययन की अनुमति देता है। यह वृषण (ऑर्किक्टोमी) या अंडाशय (अंडाशय) के शल्य चिकित्सा हटाने से पूरा किया जा सकता है। यह प्रक्रिया किसी भी तनाव के चूहों में की जा सकती है जब वे वीनिंग उम्र (इक्कीस दिन) या किसी भी वयस्क उम्र के रूप में युवा होते हैं। अंडाशय मादा चूहों में किया जाता है, जबकि ऑर्किक्टॉमी पुरुष चूहों में किया जाता है। इन अंगों को हटाकर, एस्ट्रोजन और टेस्टोस्टेरोन के स्तर, और उनके कई डेरिवेटिव, जैसे प्रोजेस्टेरोन,12,13 को बहुत कम किया जा सकता है। चूहों में ऑर्किक्टोमी या अंडाशय करने की प्रक्रिया उचित तकनीक के साथ तेजी से और न्यूनतम आक्रामक हो सकती है। एक सुरक्षित और कुशल तरीके से इन अंगों का तेजी से छांटना सही तरीके से प्रदर्शन करने पर 100% जीवित रहने की दर के साथ माउस संख्या को न्यूनतम रखते हुए त्वरित शल्य चिकित्सा प्रसंस्करण की अनुमति दे सकता है। यहां, हम वृषण और अंडाशय के तेजी से छांटने के लिए एक प्रोटोकॉल का विस्तार करते हैं और शोधकर्ताओं को इस सर्जरी को जल्दी और सुरक्षित रूप से करने में सक्षम बनाने के लिए उचित पोस्ट-सर्जिकल निगरानी का प्रदर्शन करते हैं। हम इस प्रक्रिया को करते समय सर्जन को शारीरिक स्थलों के साथ प्रदान करने के लिए सेक्स अंगों और आसपास के ऊतकों के दृश्य उदाहरण भी शामिल करते हैं।

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Protocol

सभी पशु प्रयोगों को UTSW (APN # 2019-102840) में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।

1. म्यूरिन ऑर्किक्टोमी।

  1. एक सड़न रोकनेवाला कार्य क्षेत्र तैयार करें और सुनिश्चित करें कि आवश्यक शल्य चिकित्सा उपकरणों को निष्फल कर दिया गया है और आसानी से उपलब्ध हैं। कृंतक जीवित रहने की सर्जरी के लिए सड़न रोकनेवाला प्रथाओं का पालन करें।
  2. पुरुष माउस के वजन को रिकॉर्ड करें और संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार संज्ञाहरण की पसंदीदा विधि का प्रशासन करें। इस प्रोटोकॉल में, संज्ञाहरण को बनाए रखने के लिए एक सटीक वेपोराइज़र के माध्यम से 2% आइसोफ्लुरेन वितरित किया गया था। प्रक्रिया से पहले, संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार दर्द की दवा का प्रबंध करें। इस प्रोटोकॉल में, 1.0 मिलीग्राम / किग्रा ब्यूप्रेनोर्फिन एसआर और 5 मिलीग्राम / किग्रा मेलोक्सिकैम को चमड़े के नीचे वितरित किया गया था।
  3. एक बार जब माउस संज्ञाहरण के अधीन होता है, तो आंख की चोट, कॉर्नियल निर्जलीकरण या अल्सर के गठन से बचने के लिए जानवर की आंखों को स्नेहन आंख जेल के साथ कवर करें।
  4. आगे बढ़ने से पहले, पैर की अंगुली चुटकी प्रतिक्रिया परीक्षण करके संज्ञाहरण के उचित विमान को सुनिश्चित करें।
  5. सड़न रोकनेवाला, लिपटे हुए सर्जिकल क्षेत्र पर रखने से पहले जानवर के सर्जिकल क्षेत्र को तैयार करें।
    1. इसके बाद, क्लिपर की एक जोड़ी का उपयोग करके माउस के इंगुइनल और स्क्रोटल क्षेत्रों को शेव करें।
      नोट: लिंग से बेहतर निचले पेट को शेव करने से सर्जरी के दौरान बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति मिलेगी।
    2. एक कपास-टेप किए गए एप्लिकेटर का उपयोग करके, जानवर की त्वचा पर डिपिलेटरी क्रीम (सामग्री की तालिका देखें) की एक पतली परत लागू करें, अंडकोश और आसपास के क्षेत्र को कवर करें जो सिर्फ मुंडा हुआ था। 30 सेकंड तक प्रतीक्षा करें और क्रीम को साफ धुंध के टुकड़े से हटा दें।
    3. किसी भी शेष क्रीम और बालों को क्षेत्र से पोंछने के लिए 70% इथेनॉल से भिगोए गए धुंध स्पंज का उपयोग करें।
      नोट: इस चरण में 70% इथेनॉल डिपिलेटरी क्रीम को पूरी तरह से हटाने में सहायता करना है। सर्जिकल साइट की एंटीसेप्टिक तैयारी चरण 1.8 में की जाती है।
  6. माउस को सर्जिकल क्षेत्र में स्थानांतरित करें और सुनिश्चित करें कि ऑपरेशन के दौरान जानवर के शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए एक गर्मी स्रोत उपलब्ध है। पशु को सर्जिकल ड्रेप पर लापरवाह स्थिति में रखें और माउस के पैरों को सर्जिकल मैट पर रखने के लिए नरम चिपकने वाला टेप का उपयोग करें।
  7. यदि वृषण पेट में चढ़ता है, तो अंडकोष को नीचे उतारने के लिए पेट को ध्यान से थपथपाएं। पेट पर नीचे की ओर कोमल रोलिंग दबाव लागू करने के लिए एक घिसे हुए हाथ का उपयोग करें।
    नोट: इस सर्जरी को विच्छेदन दायरे के तहत या बढ़े हुए आवर्धन के लिए लूप की एक जोड़ी का उपयोग करना आसान है। यदि यह विच्छेदन दायरे के तहत किया जाता है, तो माउस के अंडकोश को दायरे के दृश्य क्षेत्र के नीचे रखने के लिए एक पल लें। एक नरम टेप का उपयोग माउस के पैरों या पेट को सर्जिकल क्षेत्र में रखने के लिए किया जा सकता है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि यह सही स्थान पर रहता है।
  8. बीटाडीन सर्जिकल स्क्रब (या इसी तरह के एंटीसेप्टिक स्किन प्रिपरेशन स्क्रब) के साथ त्वचा को स्क्रब करें, इसके बाद उचित त्वचा कीटाणुशोधन सुनिश्चित करने के लिए कम से कम तीन बार 70% अल्कोहल स्क्रब करें। प्रत्येक स्क्रब के लिए, बाहर की ओर रेडियल गति में स्क्रब करें, ताकि चीरा साइट के बीच को पहले स्क्रब किया जाए और शेव किए गए सर्जिकल क्षेत्र की बाहरी सीमा को अंतिम रूप से स्क्रब किया जाए।
  9. इस समय, बाँझ सर्जिकल दस्ताने पहनें। प्रक्रिया के अगले चरणों के लिए, सड़न रोकनेवाला तकनीकों का उपयोग करें। ड्रेप सामग्री में शरीर को कवर करने के लिए जानवर के ऊपर एक छोटे चीरे (सर्जिकल साइट पर फिट होने के लिए लगभग 0.5-1 इंच वर्ग तक काटा गया) के साथ एक बाँझ सर्जिकल ड्रेप के साथ माउस को कवर करें।
  10. अपने अनुमोदित संस्थागत पशु कल्याण दिशानिर्देशों का पालन करते हुए सर्जिकल स्केलपेल ब्लेड या इसी तरह के उपकरणों का उपयोग करके अंडकोश में लगभग 1 सेमी -1.5 सेमी लंबाई में एक उदर मध्य रेखा चीरा बनाएं।
  11. त्वचा की कटी हुई सीमा को पकड़ते हुए, ऊतक के नीचे से त्वचा को अलग करने के लिए एक कुंद धुँधले उपकरण का उपयोग करें। चीरे की पार्श्व, श्रेष्ठ और हीन सीमाओं पर ऐसा करने के लिए समय निकालें।
  12. अंडकोष में से एक के ऊपर केंद्रित होने के लिए त्वचा में चीरा को स्थानांतरित करने के लिए स्पैटुला और फोर्सप्स का उपयोग करके एक अंडकोष को अलग करें। यदि यह मुश्किल है, तो 1.11 पर वापस जाएं और आगे त्वचा को नीचे की परतों से अलग करें।
  13. घुमावदार बल की एक जोड़ी लें और उन्हें अंडकोष के दोनों ओर रखें। अंडकोष को बाहर निकालने के लिए एक कोमल नीचे की ओर दबाव लागू करें। मांसपेशियों की पतली, पारदर्शी परत को पकड़ें जो बल का उपयोग करके अंडकोष के शीर्ष पर है। यह क्रेमास्टर मांसपेशी है। सही मांसपेशी परत का सत्यापन इस परत और इसके परिसंचरण को देखकर किया जाता है, इसके नीचे के अंडकोष से स्वतंत्र रूप से आगे बढ़ता है।
    नोट: सही ऊतक की पहचान इसकी पारदर्शिता और अंतर्निहित ऊतकों से स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने की क्षमता से पुष्टि की जाती है।
    1. मांसपेशियों के शीर्ष को समझने तक बल का उपयोग करके मांसपेशियों के ऊतकों में हेरफेर करें। यह सबसे निचला हिस्सा होना चाहिए, जिसके नीचे वृषण और कौडा एपिडीडिमिस स्थित हों।
  14. क्रेमास्टर मांसपेशियों को बल के साथ पकड़ें और धीरे से वृषण और एपिडीडिमिस से दूर ले जाएं। वन्नास स्प्रिंग कैंची की एक छोटी जोड़ी का उपयोग करके अपने शीर्ष पर पहले अंडकोष की क्रेमास्टर मांसपेशी के माध्यम से 0.5 सेमी चीरा बनाएं।
  15. कट क्रेमास्टर मांसपेशी के पीछे के किनारे पर एक लॉकिंग क्लैंप रखें। हेमोस्टैट्स की एक संकीर्ण जोड़ी या लॉकिंग माइक्रो नीडल धारकों की एक जोड़ी का उपयोग करें। एक बार ऊतक को दबाने के बाद, निम्नलिखित प्रक्रियात्मक चरणों के दौरान ऊतक को दबाए रखने के लिए धीरे से माउस के पार्श्व पक्ष पर उपकरण बिछाएं।
  16. चरण 1.14 में किए गए चीरे की बेहतर सीमा को पकड़ने के लिए बल का उपयोग करें। जबकि क्रेमास्टर मांसपेशी के दो सिरों को वापस लिया जा रहा है, गुहा के अंदर पहुंचने और धीरे से अंडकोष को पकड़ने के लिए बल की एक और जोड़ी का उपयोग करें।
    1. मांसपेशियों में छेद के माध्यम से इसे बाहर की ओर खींचें। शल्य चिकित्सा क्षेत्र में निकी रक्त वाहिकाओं और रक्त के किसी भी संकेत को देखने के लिए सावधान रहें।
    2. अंडकोष, एपिडीडिमिस, संलग्न स्परमैटिक कॉर्ड और रक्त वाहिका स्पष्ट होगी जब ऊतक ठीक से बाहरी होते हैं।
    3. एपिडीडिमिस और अंडकोष के पुच्छल-पृष्ठीय छोर के पास, अंडकोष के क्रेमास्टर मांसपेशी से लगाव का एक रेशेदार बिंदु होता है। इस सम्मिलन बिंदु का पता लगाने के लिए बाहरी ऊतक को पार्श्व रूप से रोल करें। मांसपेशियों को नुकसान से बचने के लिए इसे अलग करें और ऊतकों के आगे अलगाव और विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति दें। क्लैंप और आंसू तकनीक का प्रदर्शन करने के लिए दो जोड़ी बल का उपयोग करें।
  17. इंगुइनल वसा पैड से अंडकोष के चारों ओर वसायुक्त ऊतक की तलाश करें। वसा पैड पर पकड़ने के लिए बल की एक जोड़ी का उपयोग करें और धीरे से इसे बाहर निकालने के लिए खींचें।
    1. वसा पैड के साथ यात्रा करने वाली रक्त वाहिका को न पकड़ें, क्योंकि इस पर खींचने से रक्तस्राव हो सकता है।
  18. स्परमैटिक कॉर्ड, रक्त वाहिकाओं और शेष वसा पैड का पता लगाएं जो बाहरी ऊतकों के समीपस्थ है और इसे दबाने के लिए हेमोस्टैट्स की एक जोड़ी का उपयोग करें। डिस्टल अंडकोष पर थोड़ा तनाव रखते हुए, स्परमैटिक कॉर्ड और रक्त वाहिकाओं को हेमोस्टैट क्लैंप से बाहर रखें।
    1. एक बार पूरा होने के बाद, धीरे-धीरे क्लैंप को समीपस्थ छोर पर छोड़ दें और रक्तस्राव के संकेतों की जांच करें। यदि मौजूद है, तो इस चरण को दोहराएँ। ऊतक के बाहर के छोर पर कोमल तनाव को पकड़ने के लिए बल की एक जोड़ी का उपयोग करना सहायक होता है।
  19. स्परमैटिक कॉर्ड के कटे हुए स्टंप को शरीर में वापस जाने दें। क्रेमास्टर मांसपेशी के दो कटे हुए सिरों को पकड़ें और उन्हें एक साथ लाएं। ऊतक में कट के आकार का आकलन करें, और 4-0 या 5-0 अवशोषक सीवन का उपयोग करके ऊतक को बंद करें। चीरा के आकार के आधार पर, 1 या 2 सीवन की आवश्यकता होगी। सीवन कैंची का उपयोग करके सीवन के अंत को 0.5 सेमी तक ट्रिम करें।
  20. दूसरे अंडकोष को हटाने के लिए अंडकोश के दूसरी ओर चरण 1.13-1.20 दोहराएं।
  21. त्वचा के चीरे को बंद करने की तैयारी करें।
    1. दोनों ऊतक स्टंप के अच्छे हेमोस्टेसिस सुनिश्चित करें। खराब हेमोस्टेसिस के परिणामस्वरूप सर्जिकल क्षेत्र में अवशिष्ट रक्तस्राव होगा। यदि ऐसा होता है, तो रक्तस्राव का पता लगाएं और जांच करें। कुंद उपकरणों के साथ ऊतकों के धीमे और सावधानीपूर्वक हेरफेर से इससे बचा जाता है।
    2. यदि सर्जिकल क्षेत्र में रक्त देखा जाता है, तो बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन के लिए क्षेत्र को सुखाने के लिए एक निष्फल कपास-टिंप एप्लिकेटर का उपयोग करें। सर्जिकल क्षेत्र से दूर किसी भी रक्त या तरल पदार्थ की सिंचाई के लिए क्षेत्र पर खारा टपकाने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें।
  22. त्वचा के चीरे के दोनों किनारों को एक साथ खींचें ताकि इसे बंद होने के लिए तैयार किया जा सके। सुनिश्चित करें कि क्रेमास्टर चीरों के सीवन वाले सिरे त्वचा के चीरे में बाहर नहीं निकल रहे हैं। यदि आवश्यक हो, तो सीवन के सिरों को और ट्रिम करें।
  23. त्वचा को बंद कर दें।
    1. यदि घाव क्लिप का उपयोग कर रहे हैं, तो त्वचा को दूर करने और इसे अंतर्निहित ऊतक से दूर खींचने के लिए बल का उपयोग करें। चीरे के ऊपर केंद्रित एक घाव क्लिप रखें। जांच ें कि त्वचा अच्छी तरह से फिसल गई है। यदि चीरा थोड़ा बड़ा है ताकि एक घाव क्लिप इसे पर्याप्त रूप से बंद न कर सके, तो सर्जिकल त्वचा गोंद को चीरे के बेहतर और हीन भागों पर लागू किया जा सकता है।
    2. यदि सीवन का उपयोग कर रहे हैं, तो अंतर्निहित ऊतक को पकड़ने के बिना, त्वचा के माध्यम से आवश्यक संख्या में सीवन रखें। इस प्रकार के चीरे को 4-0 गैर-अवशोषक सीवन सामग्री का उपयोग करके 2-3 एकल बाधित सीवन की आवश्यकता होगी।
  24. किसी भी सूखे रक्त या अवशिष्ट एंटीसेप्टिक स्क्रब को हटाने के लिए नमकीन और एक निष्फल कपास-टिंप एप्लिकेटर के साथ शल्य चिकित्सा स्थल के चारों ओर की त्वचा को धीरे से साफ करें।

2. म्यूरिन ओवरीक्टॉमी

  1. एक सड़न रोकनेवाला कार्य क्षेत्र तैयार करें और सुनिश्चित करें कि आवश्यक शल्य चिकित्सा उपकरणों को निष्फल कर दिया गया है और आसानी से उपलब्ध हैं। कृंतक जीवित रहने की सर्जरी के लिए सड़न रोकनेवाला प्रथाओं का पालन करें।
  2. महिला माउस के वजन को रिकॉर्ड करें और अपने संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार संज्ञाहरण की पसंदीदा विधि का प्रशासन करें। इस प्रोटोकॉल में, संज्ञाहरण को बनाए रखने के लिए एक सटीक वेपोराइज़र के माध्यम से 2% आइसोफ्लुरेन वितरित किया गया था। प्रक्रिया से पहले, अपने संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार दर्द की दवा का प्रशासन करें। इस प्रोटोकॉल में, 1.0 मिलीग्राम / किग्रा ब्यूप्रेनोर्फिन एसआर और 5 मिलीग्राम / किग्रा मेलोक्सिकैम को चमड़े के नीचे वितरित किया गया था।
  3. आंखों की चोट, कॉर्नियल निर्जलीकरण या अल्सर के गठन से बचने के लिए जानवर की आंखों पर चिकनाई आई जेल का प्रशासन करें। सुनिश्चित करें कि ऑपरेशन के दौरान जानवर के शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए एक गर्मी स्रोत उपलब्ध है। पैर की अंगुली चुटकी प्रतिक्रिया की जांच करके संज्ञाहरण के उचित विमान को सुनिश्चित करें।
  4. सर्जिकल क्षेत्र में रखने से पहले जानवर के सर्जिकल क्षेत्र को तैयार करें।
    1. क्लिपर की एक जोड़ी का उपयोग करके जानवर की पीठ के डोरसोलेटरल क्षेत्र पर बालों को धीरे से शेव करें। कूल्हों की बेहतर सीमा के ऊपर और पसली पिंजरे की हीन सीमा के नीचे के क्षेत्र से बालों को हटा दें, साथ ही साथ इन स्थलों के बीच के क्षेत्रों को भी।
    2. एक कपास-टिंप एप्लिकेटर का उपयोग करके, जानवर की त्वचा पर डिपिलेटरी क्रीम की एक परत लागू करें, जो उस क्षेत्र को कवर करता है जिसे अभी शेव किया गया था। 30 सेकंड तक प्रतीक्षा करें और क्रीम को धुंध के टुकड़े से हटा दें, जो महीन बाल बचे हुए हैं।
    3. सर्जिकल क्षेत्र से किसी भी शेष क्रीम और बालों को पोंछने के लिए 70% इथेनॉल-भिगोए हुए धुंध स्पंज का उपयोग करें।
      नोट: इस चरण में 70% इथेनॉल डिपिलेटरी क्रीम को पूरी तरह से हटाने में सहायता करना है। सर्जिकल साइट की एंटीसेप्टिक तैयारी चरण 2.5 में की जाती है।
  5. सर्जिकल क्षेत्र में जानवर को पार्श्व स्थिति में रखें (एक समय में एक अंडाशय को हटाने के लिए चीरा लगाने के लिए) और सुनिश्चित करें कि गर्मी का स्रोत उपलब्ध है। बीटाडीन सर्जिकल स्क्रब (या इसी तरह के एंटीसेप्टिक त्वचा तैयारी स्क्रब) के साथ ऑपरेटिव क्षेत्र को स्क्रब करें, इसके बाद उचित त्वचा कीटाणुशोधन सुनिश्चित करने के लिए कम से कम तीन बार 70% अल्कोहल लें। प्रत्येक स्क्रब के लिए, बाहर की ओर रेडियल गति में स्क्रब करें, इसलिए चीरे के बीच को पहले स्क्रब किया जाता है और शेव किए गए सर्जिकल क्षेत्र की बाहरी सीमा को सबसे अंत में स्क्रब किया जाता है।
  6. इस समय, बाँझ सर्जिकल दस्ताने पहनें। प्रक्रिया के अगले चरणों के लिए, सड़न रोकनेवाला तकनीकों का उपयोग करें। जानवर के ऊपर एक छोटे से चीरे के साथ एक सर्जिकल ड्रेप रखें (सर्जिकल साइट को फिट करने के लिए ड्रेप में लगभग 0.5-1 इंच वर्ग काटें) ताकि शरीर ड्रेप सामग्री में कवर हो जाए।
  7. माउस के कूल्हों और पसलियों के बीच आधे बिंदु को ढूंढकर सर्जिकल चीरा के लिए आदर्श स्थान का पता लगाएं ( चित्र 2 देखें)। इस स्थान पर त्वचा को बल के साथ पकड़ें और त्वचा में 1.0 सेमी चीरा लगाएं।
  8. मांसपेशियों के ऊतकों के नीचे की त्वचा को अलग करने के लिए एक कुंद टिप वाले उपकरण (जांच, सर्जिकल स्पैटुला, या कुंद टिप वाले हेमोस्टैट्स) का उपयोग करें। चीरे की पार्श्व, श्रेष्ठ और हीन सीमाओं पर ऐसा करने के लिए समय निकालें।
  9. पेट की डोरसोलेटरल मांसपेशी दीवार का पता लगाएं। यदि आवश्यक हो, तो त्वचा और मांसपेशियों की परतों के बीच स्थित वसा ऊतक को हटा दें। परिपक्व चूहों में, यह वसा ऊतक अधिक प्रमुख है। मांसपेशियों की दीवार को उजागर करते हुए, इस वसा ऊतक को माउस के पुच्छल छोर की ओर ले जाएं।
    1. वसा ऊतक को पेट की दीवार से रंग से विभेदित किया जाता है: वसायुक्त ऊतक पीला सफेद दिखाई देता है और अधिक सतही होता है, जबकि पेट की दीवार गुलाबी दिखाई देती है और वसायुक्त ऊतक की तुलना में गहरी होती है।
  10. पेट की दीवार को चूहे के दांत के बल से पकड़ें और उसमें 0.5 सेमी का चीरा लगाएं।
  11. इस चीरे की एक सीमा को एक जोड़ी बल के साथ पकड़ें, शरीर की गुहा के अंदर पहुंचने के लिए दूसरी जोड़ी का उपयोग करें, और अंडाशय, गर्भाशय सींग और वसा पैड ढूंढें। मांसपेशियों को अंतर्निहित ऊतक से अलग करने और इसे बाहरी करने के लिए मांसपेशियों की दीवार में चीरा के माध्यम से धीरे से खींचें। गर्भाशय के सींग और अंडाशय के बीच संक्रमण का पता लगाएं।
  12. क्रश और आंसू तकनीक का प्रदर्शन करके अंडाशय को अलग करें।
    1. गर्भाशय के सींग के बाहर के छोर पर एक क्लैंप रखें और दूसरे क्लैंप को पहले से ठीक बाहर रखें। दोनों क्लैंप के साथ दृढ़ दबाव लागू करते समय, अधिक दूर वाले को शरीर से दूर ले जाएं, उनके बीच के संबंध को फाड़ दें। रक्तस्राव और ऊतक क्षति को कम करने के लिए, इस प्रक्रिया के दौरान समीपस्थ क्लैंप को स्थिर रखें और सावधान रहें कि इसे शरीर से दूर न खींचें।
    2. वैकल्पिक रूप से, एक कैटरी का उपयोग करें। गर्भाशय के सींग को वांछित कैटरी बिंदु के समीप दबाने के लिए बल या हेमोस्टैट्स की एक जोड़ी का उपयोग करें। ऊतकों को अलग करने के लिए एक कैटरी टूल का उपयोग करें।
  13. धीरे से और धीरे-धीरे समीपस्थ क्लैंप को छोड़ें और रक्तस्राव के संकेतों की जांच करें।
  14. ऊतक स्टंप को शरीर की गुहा में पीछे हटने दें। पेट की दीवार को पकड़ें और धीरे से ऊपर की ओर खींचें। टिशू स्टंप को अंदर की ओर मजबूर न करें, क्योंकि इससे रक्तस्राव की संभावना बढ़ जाती है।
  15. मांसपेशियों की दीवार में चीरे की सीमाओं का पता लगाएं और इसे सीवन करने की तैयारी के लिए उन्हें एक साथ लाएं।
  16. 4-0 अवशोषक सीवन सामग्री का उपयोग करके पेट की मांसपेशियों की दीवार में 1-2 एकल बाधित सीवन रखें। सीवन कैंची का उपयोग करके सीवन के अंत को 0.5 सेमी तक ट्रिम करें।
  17. त्वचा को अपनी प्राकृतिक विश्राम अवस्था में लौटने की अनुमति देकर चीरा बंद करें और फिर इसे ऊपर की ओर ले जाएं, सावधान रहें कि अंतर्निहित ऊतक या सीवन सामग्री के सिरों को न पकड़ें। उल्टी त्वचा पर 1-2 घाव क्लिप रखें। आपके संस्थागत दिशानिर्देशों के आधार पर, त्वचा को 4-0 गैर-अवशोषक सीवन सामग्री का उपयोग करके भी बंद किया जा सकता है।
  18. दूसरे अंडाशय को हटाने के लिए, माउस की स्थिति को दूसरे पार्श्व पक्ष को ऊपर की ओर रखने के लिए स्विच करें। माउस की स्थिति को बदलते समय सौम्य रहें ताकि चरण 2.17 से घाव की त्वचा पर बहुत अधिक दबाव न पड़े।
  19. इस तरफ, चरण 2.5 - 2.17 दोहराएं।
  20. किसी भी सूखे रक्त या अवशिष्ट एंटीसेप्टिक स्क्रब को हटाने के लिए नमकीन और एक निष्फल कपास-टिंप एप्लिकेटर के साथ शल्य चिकित्सा स्थल के चारों ओर की त्वचा को धीरे से साफ करें।

3. पोस्ट-ऑपरेटिव देखभाल

  1. अपने संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार, ऑपरेशन के बाद 72 घंटे तक दर्द की दवा दें। जानवरों की शल्य चिकित्सा प्रक्रिया का दस्तावेजीकरण करें, उपयोग की जाने वाली तारीख, समय, एनेस्थेटिक और एनाल्जेसिक को ध्यान में रखते हुए। यहां, ब्यूप्रेनोर्फिन धीमी गति से रिलीज होता है और मेलोक्सिकैम को प्री-ऑपरेटिव रूप से प्रशासित किया जाता है।
  2. जानवरों की सर्जरी के पूरा होने के बाद, उन्हें एक सूखे पेपर तौलिया के साथ पंक्तिबद्ध एक साफ पिंजरे में स्थानांतरित करें। इस पिंजरे को गर्मी स्रोत पर 2/3 रखें, पिंजरे के अन्य 1/3 हिस्से को गर्मी से दूर छोड़ दें। चूहों को एक पिंजरे में एक साथ न रखें जब तक कि वे संज्ञाहरण से ठीक न हो जाएं।
  3. जानवर को सामान्य पशु बिस्तर के साथ एक साफ पिंजरे में वापस रखने से पहले पिंजरे के चारों ओर स्वतंत्र रूप से चलने की क्षमता हासिल करने की अनुमति दें। इस समय, चूहों को एक साथ रखा जा सकता है यदि वे सभी संज्ञाहरण से ठीक हो गए हैं।
  4. सर्जरी के बाद पहले कई दिनों के लिए, सुनिश्चित करें कि नम भोजन और पानी आसानी से सुलभ है। पिंजरे के तल पर कुछ नम भोजन रखें। अक्सर माउस सर्जिकल साइट पर जांच करें और संक्रमण या रक्तस्राव के किसी भी लक्षण की तलाश करें।
  5. सर्जरी के बाद, सुनिश्चित करें कि चूहों को या तो अकेले या अन्य जानवरों के साथ रखा जाता है जो एक ही प्रक्रिया से एक साथ गुजरे हैं। सर्जरी के बिना एक ही पिंजरे में स्थित सर्जरी से उबरने वाला माउस एक खतरा पेश कर सकता है और इससे बचा जाना चाहिए।
  6. उन चूहों के लिए जो अंडाशय से गुजर चुके हैं और पीठ के डोरसोलेटरल किनारों पर घाव क्लिप हैं, उपचार के पहले सप्ताह के दौरान माउस के घाव क्लिप को इग्लू पर पकड़े जाने की संभावना को कम करने के लिए पिंजरे से किसी भी कृंतक इग्लू आवास को हटा दें।
  7. उपचार समय के पहले 72 घंटे के माध्यम से हर 12 घंटे में संक्रमण, दर्द या सर्जिकल जटिलताओं के संकेतों के लिए जानवर की निगरानी करते रहें।
  8. सर्जरी के 10-14 दिन बाद घाव क्लिप रिमूवर टूल का उपयोग करके घाव क्लिप को हटा दें।

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Representative Results

यहां प्रस्तुत प्रक्रिया सी 57बीएल / 6 जे पृष्ठभूमि में एक से तीन महीने के चूहों में की जाती है। नर चूहों का वजन 16-28 ग्राम था, और महिला चूहों का वजन प्रक्रिया के समय 14-24 ग्राम था। इस प्रक्रिया को कई उम्र के चूहों के लिए लागू करने के लिए अनुकूलित किया गया है, वयस्कता के माध्यम से।

सर्जिकल ऑर्किक्टॉमी में वेंट्रल स्क्रोटल थैली में एक एकल त्वचा चीरा शामिल है, जैसा कि चित्र 1 ए में दर्शाया गया है। दोनों वृषण को एक समय में एक बार में हटा दिया जाता है और वास डेफेरेंस और स्पर्मेटिक रक्त वाहिकाओं के माध्यम से अलग कर दिया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप वृषण और संलग्न एपिडीडिमिस को हटा दिया जाता है (चित्रा 1 बी)। हटाए गए सामग्री में वृषण, एपिडीडिमिस और इंगुइनल वसा पैड शामिल हैं, जो चित्रा 1 सी में दिखाए गए हैं। अंडकोष के सफल निष्कासन की पुष्टि हटाए गए ऊतकों के दृश्य अवलोकन और शरीर की गुहा को बंद करने से पहले ऊतक स्टंप के अच्छे हेमोस्टेसिस को सुनिश्चित करके की जा सकती है। ऑर्किक्टॉमी की सफलता को अच्छी तरह से बरामद चूहों के अवलोकन से मापा जा सकता है जो ठीक किए गए चीरा साइटों का प्रदर्शन करते हैं (चित्रा 1 डी)। ऑर्किक्टॉमी से गुजरने वाले चूहे प्रक्रिया के एक सप्ताह बाद माउस सीरम में मापा टेस्टोस्टेरोन के स्तर में कमी का भी प्रदर्शन करेंगे (चित्रा 1 ई)।

सर्जिकल द्विपक्षीय अंडाशय मादा चूहों के बाएं और दाएं डोरसम में चीरे लगाकर किया जाता है (चित्रा 2 ए)। पार्श्व चीरा दृष्टिकोण का उपयोग किया जा सकता है यदि केवल एक अंडाशय को हटाया जाना है। इस दृष्टिकोण में, पेट की दीवार को इंजेक्शन दिया जाता है, और डिम्बग्रंथि वसा पैड स्थित होता है। वसा पैड, अंडाशय, डिम्बग्रंथि वाहिनी, और डिस्टल गर्भाशय सींग, जैसा कि चित्र 2 बी में दर्शाया गया है, को बाहरी बनाया जाता है, इसके बाद डिस्टल गर्भाशय सींग को अलग किया जाता है। इस तकनीक के परिणामस्वरूप अंडाशय और डिंबवाहिनी को हटा दिया जाता है। अंडाशय और डिम्बग्रंथि वाहिनी को डिस्टल गर्भाशय सींग को शामिल किए बिना हटाया जा सकता है, लेकिन एक जोखिम है कि कोई भी शेष डिम्बग्रंथि कोशिकाएं माउस को एस्ट्रस चक्रों में रखना जारी रखेंगी। डिस्टल गर्भाशय सींग को शामिल करने से यह सुनिश्चित होता है कि पूर्ण अंडाशय और वाहिनी को हटा दिया जाता है, सेक्स हार्मोन की कमी होगी, और चूहे अब चक्र नहीं करेंगे। चित्रा 2 सी शरीर से बाहर विच्छेदित मुराइन महिला प्रजनन अंगों का एक उदाहरण दर्शाता है। यह देखा जा सकता है कि अंडाशय स्वयं आसपास के ऊतकों की तुलना में बहुत छोटे होते हैं। एक विच्छेदन क्षेत्र या लूप इन ऊतकों की पहचान में सहायता करता है। चित्रा 2 डी गर्भाशय वसा पैड से ऊतक के साथ विच्छेदन दायरे के तहत डिम्बग्रंथि शरीर रचना को प्रदर्शित करता है, जिससे बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति मिलती है। इस प्रक्रिया की सफलता को अच्छी तरह से बरामद चूहों के अवलोकन से मापा जा सकता है जो ठीक किए गए चीरा साइटों का प्रदर्शन करते हैं (चित्रा 2 ई)।

ओवरीक्टॉमी सर्जरी सुरक्षित और कुशल है जब तेजी से और आसपास के ऊतकों में न्यूनतम गड़बड़ी के साथ किया जाता है। यहां उल्लिखित प्रक्रिया का पालन करने से यह सुनिश्चित होता है कि त्वचा और पेट की दीवार चीरा सही ढंग से तैनात है, जिससे गर्भाशय के ऊतकों के त्वरित स्थान की अनुमति मिलती है। पसली पिंजरे की हीन सीमा और पैर की हड्डियों की बेहतर सीमा की पहचान करना सुनिश्चित करता है कि चीरा रुचि के ऊतक के पास बनाया गया है। एक चीरा बनाना जो पसलियों की अवर सीमा और पैर की हड्डियों की बेहतर सीमा के बीच लगभग आधा है और रीढ़ की हड्डी के लगभग 1.5 सेमी पार्श्व में स्थित है, पार्श्व चीरा दृष्टिकोण करते समय सर्जिकल साइट की अच्छी स्थिति की अनुमति देता है (चित्रा 2 ए)।

गर्भाशय शोष के अवलोकन द्वारा सर्जिकल अंडाशय की पुष्टि दिखाई जाती है। चित्रा 2 एफ 6 महीने के माउस से विच्छेदित गर्भाशय के सींग को दर्शाता है, जबकि चित्रा 2 जी 6 महीने के माउस से गर्भाशय के सींग को दर्शाता है जो तीन महीने की उम्र में सर्जिकल अंडाशय से गुजरा था। अंडाशय गर्भाशय का सींग पतला दिखाई देता है और बाहर के छोर पर अंडाशय से लगाव का अभाव होता है। सर्जिकल तकनीक की पुष्टि की यह विधि प्रभावी रूप से दिखाती है कि अंडाशय को हटाने के परिणामस्वरूप गर्भाशय के ऊतकों का शोष हुआ।

एक बार जब ऊतकों की सफलतापूर्वक पहचान और उत्पादन हो जाता है, तो घावों को बंद करके और सावधानीपूर्वक पोस्ट-ऑपरेटिव निगरानी करके सर्जरी पूरी की जा सकती है। उत्तरजीविता सर्जरी करते समय अच्छे परिणाम सुनिश्चित करने में उचित सड़न रोकनेवाला तकनीक14 महत्वपूर्ण है। जैसे ही माउस चीरों से ठीक होना शुरू होता है, दर्द और शल्य चिकित्सा जटिलताओं के संकेतों को देखने के लिए निगरानी की जाती है। एक संभावित सर्जिकल जटिलता ऊतक को संक्रमित करने या हेरफेर करने की कोशिश करते समय रक्त वाहिकाओं को पोकिंग या निकिंग के कारण आंतरिक रक्तस्राव है। यह सर्जिकल साइट के चारों ओर की त्वचा के नीचे लगातार लाल, फ्लश उपस्थिति द्वारा निरूपित किया जाता है। इस तरह की जटिलताओं से बचने के लिए चीरा साइटों के उचित स्थानीयकरण और सर्जिकल माइक्रोस्कोप या लूप के उपयोग से सर्जन की दृष्टि में सहायता मिलती है। सर्जरी के बाद पहले तीन दिनों के लिए हर 12 घंटे में दृश्य परीक्षा की सिफारिश की जाती है। सफल सर्जरी के परिणामस्वरूप स्वच्छ, उपचार घाव होंगे (चित्रा 1 डी, 2 ई)।

Figure 1
चित्र 1: पुरुष मुराइन ऑर्किक्टोमी । (ए) एक नर माउस को अंडकोष को हटाने के लिए अंडकोश की थैली में एक सर्जिकल चीरा के स्थान के साथ लापरवाह स्थिति में दिखाया गया है, जिसे लाल रंग में दिखाया गया है। (बी) ऑर्किक्टॉमी सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान ली गई छवि हरे रंग में अलगाव के बिंदु को दर्शाती है। (सी) एक पुरुष माउस से विच्छेदित वृषण, वसा पैड और एपिडीडिमिस। (डी) ऑर्किक्टॉमी के बाद अंडकोश चीरा के ऊपर एक अच्छी तरह से ठीक घाव क्लिप के साथ एक नर चूहा। (ई) एलिसा प्रक्षेप द्वारा निर्धारित एनजी / एमएल में माउस सीरम टेस्टोस्टेरोन एकाग्रता। दोनों समूह 9 सप्ताह के चूहों का प्रतिनिधित्व करते हैं। सर्जिकल ऑर्किक्टॉमी 8 सप्ताह की उम्र में किए गए थे। एन = 3 चूहे प्रति समूह। नमूने तीन प्रतियों में चलाए गए थे। सीरम के नमूने कार्डियक पंचर द्वारा एकत्र किए गए थे और विश्लेषण के समय तक जमे हुए थे। *, पी < 0.05। त्रुटि पट्टियाँ = SEM. कृपया इस आंकड़े का बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: महिला मुराइन अंडाशय। (ए) पृष्ठीय पार्श्व पक्ष से एकल अंडाशय को हटाने के लिए सर्जिकल चीरा साइट के साथ पार्श्व स्थिति में दिखाया गया एक मादा माउस, लाल रंग में दिखाया गया है। अन्य महत्वपूर्ण शारीरिक स्थलों पर प्रकाश डाला गया है। (बी) सर्जरी के दौरान ली गई छवि बाहरी अंडाशय, डिंबवाहिनी और डिस्टल गर्भाशय सींग को हरे रंग में दिखाए गए अलगाव के बिंदु के साथ दर्शाती है। (सी) एक मादा माउस से विच्छेदित गर्भाशय के सींग, अंडाशय और वसा पैड। (डी) वसा पैड से वसा के साथ विच्छेदित अंडाशय, डिम्बग्रंथि वाहिनी और गर्भाशय के सींग के बाहर के हिस्से का एक करीबी दृश्य, जिससे अंडाशय के बेहतर दृश्य की अनुमति मिलती है। (ई) अंडाशय के बाद चीरे के ऊपर एक अच्छी तरह से ठीक घाव क्लिप के साथ एक मादा चूहा। (एफ) विच्छेदित माउस गर्भाशय सींग। (जी) विच्छेदित माउस गर्भाशय सींग 3 महीने बाद अंडाशय प्रक्रिया के बाद, गर्भाशय शोष को दर्शाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: मुराइन अंडाशय और ऑर्किक्टॉमी के लिए ग्राफिकल सार। पुरुष चूहों के लिए ऑर्किक्टॉमी प्रक्रिया का एक सचित्र प्रतिनिधित्व जिसमें वृषण और अंडाशय को हटाने की प्रक्रिया शामिल है, जिसमें अंडाशय को हटाना शामिल है, दोनों के परिणामस्वरूप एक सेक्स हार्मोन समाप्त माउस मॉडल होता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

वृषण और अंडाशय के सर्जिकल निष्कासन नियंत्रित हार्मोन अभाव के तहत मुराइन फिजियोलॉजी का अध्ययन करने की अनुमति देता है। यह तकनीक विज्ञान के कई क्षेत्रों के लिए महत्वपूर्ण है, जिसमें न्यूरोडीजेनेरेशन, खनिज चयापचय, कार्डियोवैस्कुलर और प्रजनन स्वास्थ्य 15,16,17,18,19,20,21 शामिल हैं। यहां, हम सेक्स हार्मोन को कम करने के लिए उत्तरजीविता सर्जरी का उपयोग करके मुराइन अंडाशय और वृषण के तेज, सुरक्षित और प्रभावी निष्कासन के लिए एक प्रोटोकॉल का विस्तार करते हैं। जब एक अनुभवी सर्जन द्वारा किया जाता है, तो इन प्रक्रियाओं में कम से कम 5 मिनट लग सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप चूहों में जीवित रहने की दर बहुत अधिक होती है।

माउस सर्जरी की योजना बनाते समय कुछ विचारों में सबसे अच्छा चीरा साइट और जानवर का शरीर विज्ञान शामिल है। ऑर्किक्टॉमी के मामले में, माउस टेस्टिस को पेट के माध्यम से मध्य रेखा उदर चीरा13 द्वारा भी हटाया जा सकता है। यह तकनीक न केवल पेरिटोनियल गुहा को खोलती है, बल्कि इंगुइनल वसा पैड की त्वरित पहचान पर भी निर्भर करती है। नए सर्जनों के लिए, इस तकनीक को तेजी से करना मुश्किल है। जब चूहे बहुत छोटे होते हैं, तो वसा पैड भी कम विकसित होते हैं और इसलिए, पता लगाना अधिक कठिन होता है। इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित स्क्रोटल दृष्टिकोण उन शोधकर्ताओं के लिए एक उपयुक्त विकल्प है जो माउस सर्जरी के लिए नए हैं, छोटे, युवा चूहों पर काम कर रहे हैं, या जो पेट के चीरे द्वारा पेरिटोनियल गुहा में अन्य अंगों को परेशान करने की संभावना को कम करना चाहते हैं।

सर्जिकल अंडाशय में एक या दोनों अंडाशय को हटाना शामिल है। अधिकांश शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के लिए, सुरक्षित और तेज़ तरीकों में आमतौर पर त्वचा और अंतर्निहित प्रावरणी में चीरा लगाना जितना संभव हो उतना छोटा बनाना शामिल होता है। यह कम सीवन और घाव क्लिप और तेजी से उपचार की अनुमति देता है। जबकि चीरों को छोटा करने में सक्षम होना एक कौशल है जो अभ्यास के साथ आता है, चीरे के स्थान के बारे में आश्वस्त होना फायदेमंद है। चित्रा 2 ए सबसे अच्छा चीरा बिंदुओं का पता लगाने के तरीके का एक उदाहरण दर्शाता है। छोटे माउस शरीर रचना विज्ञान के कारण, अंडाशय यकृत के पास होगा, और माउस के बाईं ओर, प्लीहा के पास। गलती से इन अंगों की जांच और खींचने से अवांछित रक्तस्राव या नुकसान हो सकता है। हम इस तकनीक में सहायता करने और प्रतिकूल जटिलताओं की संभावना को कम करने के लिए सही चीरा स्थान और आसपास के शारीरिक स्थलों की पहचान के लिए एक विस्तृत मार्गदर्शिका प्रदान करते हैं।

यहां, हम एक उदाहरण प्रदान करते हैं कि शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के एक सप्ताह से भी कम समय बाद चूहों में परिसंचारी हार्मोन के स्तर को प्रभावी ढंग से गिराने के लिए इस प्रक्रिया का उपयोग कैसे किया जा सकता है, साथ ही प्रक्रिया के बाद समय के साथ शेष गोनाडल ऊतक एट्राफकैसे होते हैं। पिछले तरीकों और शोध में विस्तार से बताया गया है कि रजोनिवृत्ति या एंड्रोपॉज माउस मॉडल उत्पन्न करने के लिए ये कैसे किया जा सकता है, लेकिन इनमें से कई चूहों12,22 के बजाय चूहे के मॉडल में किए जाते हैं। जबकि चूहों और चूहों में समान शारीरिक रचना होती है, मुराइन प्रणाली में छोटी शारीरिक संरचनाएं होती हैं। यहां, हम एक विधि प्रदान करते हैं जो 3 सप्ताह की उम्र के माउस मॉडल में मज़बूती से काम करती है। कुल मिलाकर, ये दो प्रोटोकॉल जीवित कृंतक ऑर्किक्टॉमी और अंडाशय को जल्दी से करने, माउस शरीर रचना विज्ञान को पहचानने और शल्य चिकित्सा जटिलताओं को कम करने के लिए एक सुसंगत तरीके का प्रतिनिधित्व करते हैं, जिससे लगातार और प्रभावी परिणामों के लिए आधार बनता है।

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Disclosures

हितों का कोई टकराव नहीं।

Acknowledgments

हम सर्जिकल प्रशिक्षण और प्रोटोकॉल समीक्षा में उनकी मदद के लिए टेक्सास साउथवेस्टर्न मेडिकल सेंटर पशु संसाधन केंद्र विश्वविद्यालय को धन्यवाद देते हैं। हम उनकी अमूल्य सहायता के लिए वर्ट लैब सहायता टीम को धन्यवाद देते हैं। इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच P30EY030413) से धन द्वारा समर्थित किया गया है। Biorender.com उपयोग कार्टून स्केमैटिक्स के निर्माण के लिए किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1mL Syringe BD 309659
30G 1/2" Needle BD 305106
AutoClip System Fine Science Tools 12020-00
Betadine Solution Fisher Scientific NC0158124
Cotton-Tipped Applicators Fisher Scientific 10-000-692
Double -ended Micro Spatula Fine Science Tools 10091-12
Galilean Loupes Fine Science Tools 28050-30 Optional, can provide better clarity during procedure
Gauze Sponges, 4"x4" Fisher Scientific 13-761-52
Graefe Forceps Fine Science Tools 11150-10
High Temp Cautery Kit Fine Science Tools 18010-00 Using the fine tip attachment
Needle Holders Fine Science Tools 12001-13
PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN Covetrus 29242 4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best
Rodent Warming pad Kent Scientific RT-0515
Sterile Alcohol Prep Pads Fisher Scientific 22-363-750
Straight Locking Micro Needle Holders Fine Science Tools 12060-01
Surgical Scissors Fine Science Tools 140-60-09
Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge Fine Science Tools 15000-08
Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream Amazon N/A
Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue  Amazon #9861-900

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Rowe, A. A., Issioui, Y., Johnny, B., Wert, K. J. Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production. J. Vis. Exp. (201), e64379, doi:10.3791/64379 (2023).

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