Summary
Denne protokol beskriver en musemodel af ablation af adrenerg innervering ved at identificere og resektere den overlegne cervikale ganglion.
Abstract
Voksende beviser tyder på, at det sympatiske nervesystem spiller en vigtig rolle i kræftprogression. Adrenerg innervering regulerer spytkirtelsekretion, døgnrytme, makuladegeneration, immunfunktion og hjertefysiologi. Murinkirurgisk sympathektomi er en metode til at studere virkningerne af adrenerg innervering ved at muliggøre fuldstændig, ensidig adrenerg ablation, samtidig med at behovet for gentagen farmakologisk intervention og de tilhørende bivirkninger undgås. Imidlertid er kirurgisk sympatektomi hos mus teknisk udfordrende på grund af den lille størrelse af den overlegne cervikale ganglion. Denne undersøgelse beskriver en kirurgisk teknik til pålideligt at identificere og resektere den overlegne cervikale ganglion for at ablate det sympatiske nervesystem. Den vellykkede identifikation og fjernelse af ganglion valideres ved at afbilde de fluorescerende sympatiske ganglier ved hjælp af en transgen mus, identificere Horners syndrom efter resektion, farvning for adrenerge markører i de resekterede ganglier og observere nedsat adrenerg immunfluorescens i målorganerne efter sympathektomi. Denne model muliggør fremtidige studier af kræftprogression såvel som andre fysiologiske processer reguleret af det sympatiske nervesystem.
Introduction
Flere undersøgelser har rapporteret, at nerverne i tumormikromiljøet spiller en aktiv rolle i at støtte tumorprogression. Ablation af adrenerge sympatiske nerver har vist sig at forringe tumorudvikling og formidling i prostata- og gastrisk cancer in vivo 1,2,3, mens den farmakologiske blokade af adrenerge receptorer hæmmer tumorvækst i hoved- og halskræft4. Sympatisk neural involvering er også blevet beskrevet i pancreas, cervikal og basalcellekarcinom progression 5,6,7.
Inden for det sympatiske nervesystem er den overlegne cervikale ganglion (SCG) den eneste ganglion i den sympatiske bagagerum, der inderverer hovedet. SCG regulerer forskellige fysiologiske funktioner, såsom spytsekretion og døgnrytme, og inderverer direkte de cervikale lymfeknuder 8,9,10. SCG har også været impliceret i patologiske processer såsom makuladegeneration11 og progression af aorta dissektion12. Derudover er resektion af SCG blevet rapporteret at forværre iskæmi reperfusionsinduceret akut nyreskade13 og også ændre tarmmikrobiota hos rotter14.
Den fuldstændige ablation af SCG i en musemodel ville repræsentere en værdifuld eksperimentel teknik til at muliggøre forskning i kræft og autonomt nervesystem. Mens mange undersøgelser har udnyttet farmakologisk adrenerg receptorblokade som en adrenerg ablation 15,16,17,18,19,20, tillader kirurgisk resektion fuldstændig ensidig adrenerg ablation, samtidig med at behovet for gentagen farmakologisk intervention og de tilhørende bivirkninger undgås 21,22,23.
Kirurgisk resektion af SCG er blevet beskrevet hos rotter24, og de fleste rapporter, der studerer effekten af overlegen cervikal ganglionektomi (SCGx), har anvendt rottemodellen. Sammenlignet med rottemodellen er SCGx teknisk mere udfordrende i mus på grund af SCG'ens lille størrelse. Imidlertid er mus forholdsvis lettere at håndtere, mere omkostningseffektive og mere modtagelige for genetisk manipulation. Garcia et al. var en af de første til at rapportere SCGx hos mus, og det viste sig at påvirke insulinfrigivelse25. For nylig beskrev Ziegler et al. SCGx i mus baseret på den offentliggjorte teknik beskrevet for rotter24,26. Denne og andre artikler beskriver en metode, hvor den fælles halspulsåre (CCA) først identificeres og dissekeres, og SCG efterfølgende fjernes fra bifurkationen af CCA21,22,27,28. I denne artikel beskrives en mindre invasiv og sikrere teknik hos mus, der undgår dissektion af CCA og derved minimerer den mest alvorlige komplikation ved denne procedure - blødning fra en skade på CCA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De dyreprocedurer, der er beskrevet her, blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee på Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Otte uger gamle mandlige og kvindelige NSG-mus blev brugt her. Dyrene blev hentet fra en kommerciel kilde (se materialetabel). Instrumenterne steriliseres, den kirurgiske arbejdsflade desinficeres, dyrets hudoverflade desinficeres, og kirurgen bærer sterile handsker under hele proceduren.
1. Klargøring af musene og præoperativ opsætning
- Dagen før operationen bedøves musen med 2% isofluran i et induktionskammer (3,75 i bredden x 9 i dybden x 3,75 i højden, se materialetabel).
BEMÆRK: Et kirurgisk anæstesiplan opnås normalt på 3-5 min, afhængigt af det enkelte dyr. Annæstesiens tilstrækkelighed vurderes ved hjælp af en knivspids, og isofluranprocenten øges efter behov.- Barber det ventrale aspekt af nakken eller brug et kemisk hårfjerningsmiddel i henhold til producentens anvisninger (se materialetabel).
- På operationsdagen bedøves musen med 2% isofluran i et induktionskammer. Annæstesiens tilstrækkelighed vurderes ved hjælp af en knivspids, og isofluranprocenten øges efter behov.
- Administrer 2 mg/kg meloxicam subkutant til forebyggende systemisk analgesi. Påfør topisk oftalmisk salve (se materialetabel) for at forhindre okulære skader og tørhed under anæstesi.
- Placer musen under et dissekerende mikroskop på sin dorsale side og sørg for termisk støtte. Oprethold inhalationsanæstesi med 2% -2,5% isofluran ved hjælp af en præcisionsfordamper og næsekegle. Fastgør forsigtigt begge forben med allergivenlig tape (se materialetabel).
- Rens det barberede, ventrale aspekt af nakken med povidon-jod, og tør derefter af med 70% alkohol. Gentag denne proces to gange mere. Sørg for, at det kirurgiske sted er fri for løse hår.
BEMÆRK: Et par korte buede tang kan også bruges. Sørg for at bruge et par fine eller oftalmiske tang til at arbejde tilstrækkeligt i dette trange rum. Yderligere præoperativ opsætning kan inkluderes i henhold til de institutionelle retningslinjer.
2. Dissektion
- Lav et 1,5 cm midterlinie hudsnit på det ventrale aspekt af halsen ved hjælp af en lille saks fra ca. 2 mm under hagen til 2 mm over brysthakket.
- Træk kanterne af huden sideværts med tang for at udsætte de underliggende fascia og submandibulære spytkirtler. Adskil huden fra den underliggende fascia ved at indsætte spids saks under huden på hver side og sprede sig. Træk de submandibulære kirtler ned caudalt med tang for at afsløre de underliggende muskler.
- Find krydset mellem den bageste mave af den digastriske muskel og omohyoid muskel (figur 1A, sort cirkel). Den forreste jugular vene ses løbe i længderetningen og lateralt til omohyoid muskel.
BEMÆRK: Omohyoidmusklen dækker luftrøret i længderetningen, mens den digastriske muskel ligger på tværs ved luftrørets kraniale aspekt (figur 1C).- Indsæt spidsen af 45° vinklede pincet ved dette kryds, lateralt til den forreste jugularvene, for at gennembore og sprede en åbning i den overliggende dybe cervikale fascia.
- Hold dette vindue, der blev oprettet i trin 2.3.1, åbent med de 45° vinklede pincet. Udvid denne åbning bredere ved at udføre spredningsmanøvrer med et par buede tang i den anden hånd.
3. Identifikation og resektion af ganglion
- Find den overlegne cervikale ganglion (SCG) på sidevæggen i det afslørede rum. Det fremstår som et rundt, perlevæv.
BEMÆRK: Hvis SCG ikke identificeres, skal vævene i dette rum undersøges mere lateralt og overlegent. SCG kan let forveksles med fedt, som ofte er til stede i denne region. Fedt har et lidt gult skær, mens SCG derimod ser perlehvidt ud. - Mens du opretholder åbningen med pincet med den anden hånd, skal du forsigtigt tage fat i SCG med tang og trække den ud af åbningen for at bringe den bedre til syne.
- Når SCG er i betragtning, skal du tage fat i SCG'ens laterale base, hvor den stadig er fastgjort til det omgivende væv. Brug den anden hånd til langsomt og forsigtigt at trække SCG tilbage i ventral og kaudale retning.
- Træk SCG tilbage flere gange for gradvist at avulse ganglionen lidt efter lidt. Hold ganglionen intakt under denne manøvre for at sikre, at der ikke efterlades resterende ganglionrester.
BEMÆRK: Træk forsigtigt i ganglionen, da der kan forekomme blødning i dette trin. Hvis der opstår mindre blødning, skal du bruge oxideret regenereret cellulose eller en lille strimmel sterilt gaze til at holde trykket over åbningen i 30 s til 1 min. Løft derefter langsomt gasbindet og vurder igen. Gentag processen med at holde trykket over åbningen efter behov, indtil blødningen er stoppet.
- Træk SCG tilbage flere gange for gradvist at avulse ganglionen lidt efter lidt. Hold ganglionen intakt under denne manøvre for at sikre, at der ikke efterlades resterende ganglionrester.
- Slip langsomt de andre tang, der holder bunden af ganglionen. Kontroller for blødning ved at kigge efter blodpooling.
BEMÆRK: Let oser på dette tidspunkt er normalt. Overvåg og sørg for, at der ikke er nogen vedvarende eller signifikant blødning, før du lukker og afslutter proceduren. Hvis dette sker, skal du holde trykket over åbningen som beskrevet i trin 3.3.1. - Flyt spytkirtlerne tilbage til deres normale anatomiske positioner. Tilnærm og luk huden ved hjælp af enkle afbrudte 5-0 nylonsuturer (se materialetabel).
- Placer musen i et rent bur af sig selv for at muliggøre fuld genopretning fra anæstesi.
BEMÆRK: Det kan tage 5-15 min for musen at vågne helt fra bedøvelsen. Efterlad ikke musen uden opsyn, før den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystliggende. Placer ikke musen i et bur med andre mus, før den er kommet sig helt. Vurder musen til postkirurgisk genopretning mindst en gang hver 24. time i 72 timer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne protokol beskriver kirurgisk fjernelse af SCG i en musemodel. Figur 2 illustrerer de anatomiske vartegn, herunder CCA, den forreste jugular vene og SCG. Med dissektion (figur 2A) kan den højre forreste jugularvene ses løbe langs luftrørets laterale grænse. Da den er placeret dybere end den forreste jugulære vene, ses venstre CCA og dens bifurcation i den indre halspulsåre (ICA) og den eksterne halspulsåre (ECA) kun svagt lateralt til venen. Når man undersøger dette i NSG. B6-P0TdTomat transgen mus (en P0-Cre TdTomat mus, hvor Schwann-cellerne er fluorescerende rødt, upubliceret arbejde) med røde fluorescerende neuroner under et fluorescerende mikroskop, den fluorescerende vagusnerve kan ses løbe lateralt til CCA, og den fluorescerende SCG kan ses ved bifurcation af CCA, lateralt til den forreste jugular vene (figur 2B).
Efter resektion af SCG i en normal mus og en transgen mus blev det resekterede væv bekræftet af dets røde fluorescens sammenlignet med den ikke-fluorescerende SCG-kontrol (figur 3A) og immunofluorescerende farvning for tyrosinhydroxylase (TH), en markør for adrenerge nerver 13,29 (figur 3B).
Hvis proceduren udføres korrekt, udvikler musen ipsilateral Horners syndrom umiddelbart efter operationen efter at have genvundet fuld bevidsthed24. Ptose, øjenlågets hængende, blev observeret, hvilket er tegn på Horners syndrom (figur 4B).
Den submandibulære spytkirtel er et af vævene innerveret af SCG. For at validere vellykket SCGx blev immunofluorescensfarvning for TH udført på højre submandibulære spytkirtel efter højre SCGx og bekræftede den vellykkede ablation af den adrenerge signalering med fraværende TH-nervefarvning (højre side af den stiplede linje, figur 5A). I modsætning hertil opretholdt den venstre kontrol submandibulære kirtel (ingen SCGx) sin adrenerge indgang og intakte TH-nervefarvning (venstre side af den stiplede linje, figur 5A). Disse resultater blev bekræftet ved kvantificering (figur 5B). ELISA-kvantificering af noradrenalin 13,30,31 i disse væv bekræftede yderligere en signifikant reduktion i noradrenalinekspression i den submandibulære kirtel på siden af SCGx i modsætning til kontrolskinkirurgisiden (figur 6). Kvantificeringen for begge blev analyseret af en uparret, tohalet studerendes t-test.
Figur 1: Den venstre forreste jugular vene tjener som et anatomisk vartegn. (A) Den venstre forreste jugular vene (blå pil) kan ses løbe i længderetningen og langs den laterale kant af omohyoid muskel. Ved gennemboring af den dybe cervikale fascia mellem vinklen på den bageste mave i de digastriske og omohyoide muskler, skal piercingen også være lateral til den forreste jugular vene (sort cirkel). (B) Når den dybe cervikale fascia er let strakt, kan vagusnerven (hvid pil) og den fælles halspulsåre med dens bifurcation (rød pil) også ses. (C) Stiliseret illustration af (B). Skalastang = 100 μm. Forkortelse: M = muskel. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: SCG og dens relation til anatomiske landemærker i en transgen mus med fluorescerende neuroner. (A) Dissektion i en transgen mus med røde fluorescerende neuroner, der illustrerer den højre fælles halspulsåre (rød pil, der peger på dens bifurcation) og den forreste jugular vene. Den fælles halspulsåre bifurcates i den ydre halspulsåre (ECA) og indre halspulsåren (ICA). Den gule pil peger på vagusnerven, der løber sideværts til den fælles halspulsåre. Afstanden mellem den fælles halspulsåre og vagusnerven ser bredere ud her, da musens hoved drejes for at fange alle strukturerne i dette billede. (B) Den samme dissektion undersøgt med fluorescerende billeddannelse. Vagusnerven (gul pil) har rød fluorescens og ses igen løbe sideværts til den fælles halspulsåre (rød pil, der peger på dens bifurcation). Den fluorescerende SCG er placeret ved bifurcation af halspulsåren (gul pilespids). Den forreste jugular vene (blå pil) løber medial til den fælles halspulsåre. Den dybe cervikale fascia, der ligger over disse strukturer, kan ses med sin glitrende refleksion. Vægtstang = 1 mm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Mikroskopiske billeder af den resekterede ganglion . (A) Resekterede overlegne cervikale ganglier under fluorescerende mikroskopi. Til venstre vises SCG resekteret fra en normal mus, der tjener som en ikke-fluorescerende kontrol. Til højre vises en fluorescerende SCG resekteret fra en transgen mus med røde fluorescerende neuroner. Skalastang = 500 μm. (B) Immunofluorescerende farvning for tyrosinhydroxylase (TH), en markør for adrenerge nerver, i den resekterede røde fluorescerende ganglion (P0). Skalabjælke = 100 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Udvikling af Horners syndrom efter SCGx. (A) En normal mus før SCGx. (B) Udviklingen af ptosis (sort pil), hængende øjenlåg, efter ipsilateral SCGx, hvilket er et tegn på Horners syndrom. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 5: Immunofluorescens og tilsvarende H&E-farvning for den adrenerge markør i målvævet efter SCGx versus skinkirurgi. (A) Venstre, immunofluorescensfarvning for tyrosinhydroxylase (TH) i den submandibulære spytkirtel efter SCGx eller skinkirurgi. Til højre, den tilsvarende H&E-farvning af det samme væv. Skalabjælke = 200 μm. (B) Kvantificering af TH-farvningen. Data repræsenterer gennemsnitlig ± SEM. Statistisk analyse ved uparret, tosidet Student's t-test, p < 0,0001. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 6: ELISA-kvantificering af noradrenalin i spytkirtlen efter SCGx versus skinkirurgi. Data repræsenterer gennemsnit ± SEM. Statistisk analyse ved uparret, tosidet Student's t-test, p < 0,0001. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokol beskriver en musemodel til kirurgisk ensidig ablation af SCG-input. Denne teknik giver mulighed for at studere virkningerne af adrenerg innervering i forskellige indstillinger. Derudover kan den resekterede sympatiske ganglion også dyrkes i 3D matrigel kultur til in vitro forsøg30.
Undersøgelser, der involverer SCGx, er for det meste blevet udført på rotter, da deres større anatomi giver mulighed for lettere anatomisk visualisering og dissektion. Mens SCGx hos mus tidligere er blevet beskrevet af Ziegler et al.26 og kort rapporteret i andre undersøgelser21,22,27,28, var teknikken baseret på den, der blev anvendt til rotter, hvor CCA eksponeres og dissekeres før resektion af SCG. I modsætning til rottemodellen er CCA hos mus mindre og tyndere, hvilket gør dissektionen vanskeligere og derfor mere tilbøjelig til den alvorlige komplikation af større blødning fra CCA. Derudover kræver eksponeringen af CCA mere omfattende manipulation, herunder forskydning af sternocleidomastoidmusklen samt dissektion og lateral rotation af spytkirtlen26. I modsætning hertil bruger den nuværende metode den forreste jugular vene i stedet for CCA som det anatomiske vartegn. I sammenligning med CCA er den forreste jugularvene placeret mere overfladisk og strækker sig længere kranielt (figur 2A). Dette giver et par fordele. For det første ses dette vartegn lettere uden dissektion og forskydning af spytkirtlen og sternocleidomastoid muskel, hvilket gør operationen mindre invasiv; Denne protokol kræver derfor kun, at spyttet trækkes lidt ned (trin 2.2). Den minimale dissektion forkorter også operationstiden og varigheden af anæstesi for dyret. Ved at undgå omfattende dissektion af CCA minimerer dette desuden chancerne for at skade CCA, hvilket kan føre til større og dødelig blødning i alvorlige tilfælde. Manipulation af CCA er uundgåelig, da SCG er placeret ved bifurcation af CCA, men ved at nærme sig denne region posteromedialt via en piercing ved siden af den forreste jugular vene i stedet for at åbne fascia direkte overliggende CCA, minimerer denne protokol kontakten med og derfor risikoen for skade på denne store arterie.
To store udfordringer står over for, når man udfører denne operation. Den første er den vellykkede identifikation af SCG, især i betragtning af den meget lille størrelse af de anatomiske landemærker og ganglionen selv i musemodeller. Den omhyggelige dissektion og identifikation af landemærkerne er derfor afgørende. I trin 2.3 skal vinklede tang indsættes for at gennembore den dybe cervikale fascia i vinklen på den bageste mave af de digastriske og omohyoide muskler. Under dette trin ses den forreste jugulære vene normalt løbe langs den laterale kant af omohyoidmusklen og skal holdes medial til indsættelsespunktet (figur 1); dette er et vigtigt vartegn og vil hjælpe med at komme ind i det rigtige rum for at finde SCG. Hvis SCG ikke ses i det laterale område af dette rum, skal vævene udforskes mere lateralt og overlegent. Under denne dissektion visualiseres halspulserkappen lateralt til synsfeltet for at undgå blødning af det omgivende væv og for at hjælpe med at identificere SCG-medialen til denne struktur.
Den anden store udfordring for denne procedure er at styre risikoen for blødning. Der er flere kritiske vaskulære strukturer ved siden af SCG, herunder CCA, den ydre halspulsåre og den indre jugularvene. Det er vores erfaring, at hvis der opstår blødning, opstår den intraoperativt snarere end postoperativt. Der kan forekomme blødning under opspændingen af tangen i trin 3.4. Skader på karrene er mest tilbøjelige til at forekomme, når man forsøger at skrælle og forsigtigt avulse ganglion fra de omgivende kar og væv. Aktiv blødning ses muligvis ikke med det samme, fordi et par tang er fastspændt nær karrene i dette område. Derfor kan blødning identificeres, når tangen frigives, og det er vigtigt at inspicere området omhyggeligt, efter at ganglion er fjernet. I det sjældne tilfælde af ekssanguination på grund af en rift i et større fartøj er det forgæves at holde trykket over området på grund af den hurtige blødningshastighed. I denne situation skal operationen afsluttes, og musen skal aflives.
I betragtning af udfordringerne ved SCG-identifikation og mulige blødningskomplikationer anbefales det først at øve SCG-dissektion og fjernelse på kadaveriske mus for at blive fortrolig med anatomien, inden den eksperimentelle overlevelsesoperation udføres.
Denne metode kan også blive påvirket af kirurgens håndhed. Proceduren er lettere at udføre på samme side som kirurgens dominerende hånd. For eksempel, når du udfører SCGx på højre side af musen, vil kirurgens venstre hånd blive brugt til at gribe fat i bunden af ganglionen, og højre hånd vil blive brugt til at skrælle ganglionen ud, hvilket betyder, at operationen ville kræve mere finesse med højre hånd. Hvis bilateral SCGx skal udføres, kan det være mere tidskrævende og kræve mere træning at udføre på kirurgens ikke-dominerende side.
Denne kirurgiske teknik af SCGx i en murinmodel muliggør fremtidige eksperimentelle undersøgelser, der undersøger virkningerne af det sympatiske nervesystem i både onkologiske og fysiologiske omgivelser. Musmodellen har flere fordele i forhold til andre in vivo-modeller , herunder de lave omkostninger, den lette håndtering og modtageligheden for genetisk manipulation, hvilket gør det muligt at skabe mere kraftfulde eksperimentelle modeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Q. W. blev støttet af NIH T32CA009685. R. J. W. blev støttet af NIH R01CA219534. Memorial Sloan Kettering Cancer Center Core Facilities blev støttet af NIH P30CA008748.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody | EMD Millipore | AB152 | |
| Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment | Akorn | 59399-162-35 | |
| Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile | Covidien | 1806 | |
| Derf Needle Holder | Thomas Scientific | 1177K00 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| ETHILON Nylon Suture | Ethicon | 698H | |
| Fine Scissors - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Hypoallergenic Surgical Tape | 3M Blenderm | 70200419342 | |
| Induction Chamber, 2 Liter | VetEquip | 941444 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Nair | Church & Dwight Co., Inc | 40002957 | chemical hair removing agent |
| NORADRENALINE RESEARCH ELISA | Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics) | BA E-5200 | |
| NSG Mouse | Jackson Laboratory | JAX:005557 | |
| Povidone-Iodine Swabstick | PDI | S41350 | |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 |
References
- Magnon, C., et al. Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression. Science. 341 (6142), 1236361 (2013).
- Zhao, C. M., et al.
- Zahalka, A. H., et al. Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer. Science. 358 (6361), 321-326 (2017).
- Amit, M., et al. Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer. Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).
- Renz, B. W., et al. Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness. Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).
- Lucido, C. T., et al. Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes. Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).
- Peterson, S. C., et al. Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches. Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).
- Maronde, E., Stehle, J. H. The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets. Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).
- Yamazaki, S., et al.
- Huang, J., et al. S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs. Scientific Reports. 3 (1), 1114 (2013).
- Dieguez, H. H., et al. Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice. Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643 (2020).
- Liu, H., et al. Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of β-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats. Life Sciences. 193, 200-206 (2018).
- Zhang, W., et al. The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats. Frontiers in Medicine. 9, 792000 (2022).
- Zhang, W., et al. Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats. American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).
- Wang, X., et al. β-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control. Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).
- Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls β-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice. Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).
- Smith, B., Butler, M. The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse. The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).
- Sucharov, C. C., et al. β-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease. Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).
- Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).
- Grisanti, L. A., et al. Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury. JCI Insight. 5 (9), 99485 (2019).
- Alito, A. E., et al. Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation. Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).
- Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice. Ophthalmology & Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).
- Haug, S. R., Heyeraas, K. J. Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats. Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).
- Savastano, L. E., et al. A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy. Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).
- Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices. Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).
- Ziegler, K. A., et al. Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice. Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).
- Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain. Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).
- Dieguez, H. H., et al. Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice. Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641 (2018).
- Zhang, B., et al. Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells. Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).
- Pirzgalska, R. M., et al. Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine. Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).
- Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo. Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).
