Summary
Bu protokol, superior servikal ganglionu tanımlayarak ve rezeke ederek adrenerjik innervasyonun ablasyonunun bir fare modelini tanımlamaktadır.
Abstract
Artan kanıtlar, sempatik sinir sisteminin kanserin ilerlemesinde önemli bir rol oynadığını göstermektedir. Adrenerjik innervasyon tükürük bezi sekresyonunu, sirkadiyen ritmi, makula dejenerasyonunu, bağışıklık fonksiyonunu ve kalp fizyolojisini düzenler. Murin cerrahi sempatektomi, tekrarlanan farmakolojik müdahale ve ilişkili yan etkilere ihtiyaç duyulmadan tam, tek taraflı adrenerjik ablasyona izin vererek adrenerjik innervasyonun etkilerini incelemek için bir yöntemdir. Bununla birlikte, farelerde cerrahi sempatektomi, superior servikal ganglionun küçük boyutu nedeniyle teknik olarak zordur. Bu çalışma, sempatik sinir sistemini ablate etmek için superior servikal ganglionu güvenilir bir şekilde tanımlamak ve rezeke etmek için bir cerrahi tekniği tanımlamaktadır. Ganglionun başarılı bir şekilde tanımlanması ve çıkarılması, floresan sempatik gangliyonların transgenik bir fare kullanılarak görüntülenmesi, rezeksiyon sonrası Horner sendromunun tanımlanması, rezeke edilen gangliyonlarda adrenerjik belirteçlerin boyanması ve sempatektomiyi takiben hedef organlarda azalmış adrenerjik immünofloresansın gözlemlenmesiyle doğrulanır. Bu model, sempatik sinir sistemi tarafından düzenlenen diğer fizyolojik süreçlerin yanı sıra kanser ilerlemesinin gelecekteki çalışmalarını mümkün kılar.
Introduction
Çok sayıda çalışma, tümör mikroçevresindeki sinirlerin tümör ilerlemesini desteklemede aktif bir rol oynadığını bildirmiştir. Adrenerjik sempatik sinirlerin ablasyonunun prostat ve mide kanserinde in vivo 1,2,3'te tümör gelişimini ve yayılımını bozduğu gösterilirken, adrenerjik reseptörlerin farmakolojik blokajı baş ve boyun kanserinde tümör büyümesini inhibe eder4. Sempatik nöral tutulum pankreas, servikal ve bazal hücreli karsinom progresyonunda da tanımlanmıştır 5,6,7.
Sempatik sinir sistemi içinde, superior servikal ganglion (SCG), sempatik gövdenin başı innerve eden tek ganglionudur. SCG, tükürük salgısı ve sirkadiyen ritim gibi çeşitli fizyolojik fonksiyonları düzenler ve servikal lenf düğümlerini doğrudan innerve eder 8,9,10. SCG ayrıca makula dejenerasyonu11 ve aort diseksiyonu12'nin ilerlemesi gibi patolojik süreçlerde de rol oynamaktadır. Ek olarak, SCG'nin rezeksiyonunun iskemi reperfüzyonuna bağlı akut böbrek hasarını13 şiddetlendirdiği ve ayrıca sıçanlarda bağırsak mikrobiyotasını değiştirdiğibildirilmiştir 14.
SCG'nin bir fare modelinde tam ablasyonu, kanser ve otonom sinir sistemi araştırmalarını mümkün kılmak için değerli bir deneysel tekniği temsil edecektir. Birçok çalışmada farmakolojik adrenerjik reseptör blokajı adrenerjik ablasyon olarak kullanılırken 15,16,17,18,19,20, cerrahi rezeksiyon tam, tek taraflı adrenerjik ablasyona izin verirken, tekrarlanan farmakolojik müdahale ihtiyacını ve ilişkili yan etkileri önler 21,22,23.
SCG'nin cerrahi rezeksiyonu sıçanlardatanımlanmıştır 24 ve superior servikal ganglionektominin (SCGx) etkisini inceleyen çoğu rapor sıçan modelini kullanmıştır. Sıçan modeliyle karşılaştırıldığında, SCGx, SCG'nin küçük boyutu nedeniyle farelerde teknik olarak daha zordur. Bununla birlikte, farelerin kullanımı nispeten daha kolaydır, daha uygun maliyetlidir ve genetik manipülasyona daha uygundur. Garcia ve ark. farelerde SCGx'i ilk bildirenlerden biriydi ve insülin salınımınıetkilediği bulundu 25. Daha yakın zamanlarda, Ziegler ve ark. sıçanlar için açıklanan yayınlanmış tekniğe dayanarak farelerde SCGx'itanımladı 24,26. Bu ve diğer makaleler, ortak karotis arterin (CCA) ilk olarak tanımlandığı ve diseke edildiği ve daha sonra SCG'nin CCA 21,22,27,28'in çatallanmasından çıkarıldığı bir yöntemi açıklamaktadır. Bu makalede, farelerde CCA'nın diseksiyonunu önleyen ve böylece bu prosedürün en ciddi komplikasyonu olan CCA'nın yaralanmasından kaynaklanan kanamayı en aza indiren daha az invaziv ve daha güvenli bir teknik açıklanmaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Burada açıklanan hayvan prosedürleri, Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Burada sekiz haftalık erkek ve dişi NSG fareleri kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz. Aletler sterilize edilir, cerrahi çalışma yüzeyi dezenfekte edilir, hayvanın cilt yüzeyi dezenfekte edilir ve cerrah işlem boyunca steril eldiven giyer.
1. Farelerin hazırlanması ve ameliyat öncesi kurulum
- Ameliyattan önceki gün, fareyi bir indüksiyon odasında% 2 izofluran ile uyuşturun (3.75 inç genişlik x 9 derinlik x 3.75 yükseklik, Malzeme Tablosuna bakınız).
NOT: Cerrahi anestezi düzlemi, bireysel hayvana bağlı olarak genellikle 3-5 dakika içinde elde edilir. Anestezinin yeterliliğini ayak parmağı tutamıyla değerlendirin ve izofluran yüzdesini uygun şekilde artırın.- Boynun ventral yönünü tıraş edin veya üreticinin talimatlarına göre kimyasal bir epilasyon maddesi kullanın (bkz.
- Ameliyat gününde, fareyi bir indüksiyon odasında% 2 izofluran ile uyuşturun. Anestezinin yeterliliğini ayak parmağı tutamıyla değerlendirin ve izofluran yüzdesini uygun şekilde artırın.
- Önleyici sistemik analjezi için deri altına 2 mg / kg meloksikam uygulayın. Anestezi altında oküler yaralanmaları ve kuruluğu önlemek için topikal oftalmik merhem uygulayın ( Malzeme Tablosuna bakınız).
- Fareyi sırt tarafında bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve termal destek sağlayın. Hassas bir buharlaştırıcı ve burun konisi kullanarak% 2 -% 2.5 izofluran ile inhalasyon anestezisini koruyun. Her iki ön ayağı hipoalerjenik bantla nazikçe sabitleyin (bkz.
- Boynun traş edilmiş, ventral yönünü povidon-iyot ile temizleyin ve ardından% 70 alkolle silin. Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın. Ameliyat bölgesinde gevşek saç bulunmadığından emin olun.
NOT: Bir çift kısa kavisli forseps de kullanılabilir. Bu kapalı alanda yeterince çalışmak için bir çift ince veya oftalmik forseps kullandığınızdan emin olun. Kurumsal yönergelere göre ek ameliyat öncesi kurulum dahil edilebilir.
2. Diseksiyon
- Çenenin yaklaşık 2 mm altından sternal çentiğin 2 mm yukarısına kadar küçük bir makas kullanarak boynun ventral yönünde 1,5 cm'lik orta hat cilt kesisi yapın.
- Altta yatan fasya ve submandibular tükürük bezlerini ortaya çıkarmak için cildin kenarlarını forseps ile yanal olarak geri çekin. Her iki taraftaki derinin altına sivri uçlu makas sokarak ve yayarak cildi alttaki fasyadan ayırın. Altta yatan kasları ortaya çıkarmak için submandibular bezleri forseps ile kaudal olarak aşağı çekin.
- Digastrik kas ve omohyoid kasın arka göbeğinin kavşağını bulun (Şekil 1A, siyah daire). Anterior juguler ven uzunlamasına ve omohyoid kasın lateralinde uzandığı görülür.
NOT: Omohyoid kas trakeayı uzunlamasına kaplarken, digastrik kas trakeanın kraniyal yönünde enine uzanır (Şekil 1C).- 45° açılı forsepsin ucunu, üstteki derin servikal fasyadaki bir açıklığı delmek ve yaymak için bu kavşağa, ön juguler venin lateraline yerleştirin.
- Adım 2.3.1'de oluşturulan bu pencereyi 45° açılı forseps ile açık tutun. Diğer elinizde bir çift kavisli forseps ile yayma manevraları yaparak bu açıklığı daha da genişletin.
3. Ganglionun tanımlanması ve rezeksiyonu
- Ortaya çıkan boşluğun lateral duvarındaki superior servikal ganglionu (SCG) bulun. Yuvarlak, inci gibi bir doku olarak görünür.
NOT: SCG tanımlanmamışsa, bu boşluktaki dokuların daha yanal ve üst olarak incelenmesi gerekir. SCG, bu bölgede sıklıkla bulunan yağ ile kolayca karıştırılabilir. Yağın hafif sarı bir tonu vardır, aksine SCG inci beyazı görünür. - Diğer elinizle forseps ile açıklığı korurken, SCG'yi forseps ile nazikçe kavrayın ve daha iyi görünmesi için açıklıktan dışarı çekin.
- SCG göründükten sonra, SCG'nin hala çevre dokulara bağlı olduğu lateral tabanını kavrayın. Diğer elinizi kullanarak, SCG'yi ventral ve kaudal yönde yavaşça ve nazikçe geri çekin.
- Ganglionu yavaş yavaş avulse etmek için SCG'yi birkaç kez geri çekin. Geride artık ganglion kalıntısı kalmadığından emin olmak için bu manevra sırasında gangliyonu sağlam tutun.
NOT: Bu adım sırasında kanama olabileceğinden gangliyonu hafifçe çekin. Küçük bir kanama meydana gelirse, açıklığın üzerinde 30 s ila 1 dakika boyunca basınç tutmak için oksitlenmiş rejenere selüloz veya küçük bir steril gazlı bez şeridi kullanın. Ardından, gazlı bezi yavaşça kaldırın ve yeniden değerlendirin. Kanama durana kadar açıklık üzerinde basınç tutma işlemini gerektiği kadar tekrarlayın.
- Ganglionu yavaş yavaş avulse etmek için SCG'yi birkaç kez geri çekin. Geride artık ganglion kalıntısı kalmadığından emin olmak için bu manevra sırasında gangliyonu sağlam tutun.
- Gangliyonun tabanını tutan diğer forsepsleri yavaşça serbest bırakın. Kan birikintisine bakarak kanama olup olmadığını kontrol edin.
NOT: Şu anda hafif sızma normaldir. Prosedürü kapatmadan ve bitirmeden önce izleyin ve kalıcı veya önemli bir kanama olmadığından emin olun. Böyle bir durumda, adım 3.3.1'de açıklandığı gibi açıklığın üzerinde baskı tutun. - Tükürük bezlerini normal anatomik pozisyonlarına geri getirin. Basit kesintili 5-0 naylon sütürler kullanarak cildi yaklaştırın ve kapatın (bkz.
- Anesteziden tam olarak iyileşmeyi sağlamak için fareyi tek başına temiz bir kafese yerleştirin.
NOT: Farenin anesteziden tamamen uyanması 5-15 dakika sürebilir. Sternal yaslığı korumak için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar fareyi gözetimsiz bırakmayın. Tamamen iyileşene kadar fareyi diğer farelerle birlikte bir kafese koymayın. Fareyi 72 saat boyunca en az 24 saatte bir ameliyat sonrası iyileşme açısından değerlendirin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu protokol, bir fare modelinde SCG'nin cerrahi olarak çıkarılmasını açıklar. Şekil 2 , CCA, anterior juguler ven ve SCG dahil olmak üzere anatomik işaretleri göstermektedir. Diseksiyonda (Şekil 2A), sağ anterior juguler ven trakeanın lateral sınırı boyunca uzanırken görülebilir. Anterior juguler venden daha derinde yer aldığından, sol CCA ve bunun internal karotis arter (İKA) ve eksternal karotis artere (ECA) bifurkasyonu venin lateralinde sadece belli belirsiz görülür. Bunu NSG'de incelerken. Floresan mikroskop altında kırmızı floresan nöronlara sahip B6-P0TdDomates transgenik faresi (Schwann hücrelerinin floresan kırmızısı olduğu bir P0-Cre TdTomato faresi, yayınlanmamış çalışma), floresan vagus sinirinin CCA'ya lateral olarak aktığı görülebilir ve floresan SCG, CCA'nın anterior juguler venin lateralinde çatallanmasında görülebilir (Şekil 2B).
Normal bir farede ve transgenik bir farede SCG'nin rezeksiyonundan sonra, rezeke edilen doku, floresan olmayan SCG kontrolüne (Şekil 3A) kıyasla kırmızı floresansı ve adrenerjik sinirler için bir belirteç olan tirozin hidroksilaz (TH) için immünofloresan boyama ile doğrulandı13,29 (Şekil 3B).
Prosedür doğru bir şekilde yapılırsa, fare tam bilincini geri kazandıktan hemen sonra ameliyattan hemen sonra ipsilateral Horner sendromu geliştirir24. Horner sendromunun bir belirtisi olan göz kapağının düşmesi olan pitozis gözlendi (Şekil 4B).
Submandibuler tükürük bezi, SCG tarafından innerve edilen dokulardan biridir. Başarılı SCGx'i doğrulamak için, sağ SCGx'i takiben sağ submandibuler tükürük bezinde TH için immünofloresan boyama yapıldı ve TH sinir boyaması olmadan adrenerjik sinyallemenin başarılı ablasyonunu doğruladı (noktalı çizginin sağ tarafı, Şekil 5A). Buna karşılık, sol kontrol submandibular bezi (SCGx yok) adrenerjik girişini ve sağlam TH sinir boyamasını korudu (noktalı çizginin sol tarafı, Şekil 5A). Bu bulgular niceleme ile doğrulanmıştır (Şekil 5B). Bu dokularda norepinefrin 13,30,31'in ELISA miktar tayini, kontrol sahte cerrahi tarafının aksine, SCGx tarafındaki submandibular bezde norepinefrin ekspresyonunda önemli bir azalma olduğunu doğruladı (Şekil 6). Her ikisi için de niceleme, eşleştirilmemiş, iki kuyruklu bir Student t-testi ile analiz edildi.
Şekil 1: Sol anterior juguler ven anatomik bir dönüm noktası görevi görür. (A) Sol ön juguler ven (mavi ok) uzunlamasına ve omohyoid kasın lateral kenarı boyunca aktığı görülebilir. Digastrik ve omohyoid kasların arka göbeğinin açısı arasındaki derin servikal fasyayı delerken, piercing ayrıca anterior juguler venin (siyah daire) lateralinde olmalıdır. (B) Derin servikal fasya hafifçe gerildiğinde, vagus siniri (beyaz ok) ve çatallanması (kırmızı ok) ile ortak karotis arter de görülebilir. (C) (B)'nin stilize edilmiş çizimi. Ölçek çubuğu = 100 μm. Kısaltma: M = kas. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Floresan nöronlara sahip transgenik bir farede SCG ve anatomik işaretlerle ilişkisi. (A) Kırmızı floresan nöronlara sahip transgenik bir farede diseksiyon, sağ ortak karotis arteri (çatallanmasını gösteren kırmızı ok) ve ön juguler veni gösterir. Ortak karotis arter, eksternal karotis arter (ECA) ve internal karotis arter (İKA) olarak ikiye ayrılır. Sarı ok, ortak karotis artere lateral olarak uzanan vagus sinirini gösterir. Ortak karotis arter ile vagus siniri arasındaki mesafe, bu görüntüdeki tüm yapıları yakalamak için farenin kafası döndürüldüğünde burada daha geniş görünür. (B) Floresan görüntüleme ile incelenen aynı diseksiyon. Vagus siniri (sarı ok) kırmızı floresansa sahiptir ve yine ortak karotis artere yanal olarak koşarken görülür (çatallanmasını gösteren kırmızı ok). Floresan SCG, karotis arterin (sarı ok ucu) çatallanmasında bulunur. Anterior juguler ven (mavi ok) ortak karotis artere medial uzanır. Bu yapıların üzerindeki derin servikal fasya, parıldayan yansıması ile görülebilir. Ölçek çubuğu = 1 mm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Rezeke edilen ganglionun mikroskobik görüntüleri . (A) Floresan mikroskobu altında superior servikal gangliyonlar rezeke edildi. Solda, normal bir fareden rezeke edilen SCG'nin floresan olmayan bir kontrol görevi gördüğünü göstermektedir. Sağda, kırmızı floresan nöronlara sahip transgenik bir fareden rezeke edilen bir floresan SCG gösterilmektedir. Ölçek çubuğu = 500 μm. (B) Rezeke edilen kırmızı floresan ganglionda (P0) adrenerjik sinirler için bir belirteç olan tirozin hidroksilaz (TH) için immünofloresan boyama. Ölçek çubuğu = 100 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: SCGx'i takiben Horner sendromunun gelişimi. (A) SCGx'ten önce normal bir fare. (B) Horner sendromunun bir belirtisi olan ipsilateral SCGx'i takiben göz kapağının düşmesi olan pitozis (siyah ok) gelişimi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 5: SCGx'e karşı sahte cerrahiden sonra hedef dokudaki adrenerjik belirteç için immünofloresan ve buna karşılık gelen H&E boyama. (A) Solda, SCGx veya sahte cerrahi sonrası submandibular tükürük bezinde tirozin hidroksilaz (TH) için immünofloresan boyama. Doğru, aynı dokunun karşılık gelen H & E boyaması. Ölçek çubuğu = 200 μm. (B) TH boyamanın miktarının belirlenmesi. Veriler ortalama ± SEM'i temsil etmektedir. Eşleştirilmemiş, iki kuyruklu Student t-testi ile istatistiksel analiz, p < 0.0001. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 6: SCGx'e karşı sahte cerrahiden sonra tükürük bezinde norepinefrin miktarının ELISA miktar tayini. Veriler ortalama ± SEM'i temsil etmektedir. Eşleştirilmemiş, iki kuyruklu Student t-testi ile istatistiksel analiz, p < 0.0001. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokol, SCG girişinin cerrahi tek taraflı ablasyonu için bir fare modelini açıklar. Bu teknik, çeşitli ortamlarda adrenerjik innervasyonun etkilerini incelemeye izin verir. Ek olarak, rezeke edilen sempatik ganglion, in vitro deneyler için 3D matrigel kültüründe de büyütülebilir30.
SCGx ile ilgili çalışmalar çoğunlukla sıçanlarda gerçekleştirilmiştir, çünkü daha büyük anatomileri daha kolay anatomik görselleştirme ve diseksiyona izin verir. Farelerde SCGx daha önce Ziegler ve ark.26 tarafından tarif edilmiş ve diğer çalışmalarda21,22,27,28 kısaca bildirilmiş olsa da, teknik, SCG'nin rezeksiyonundan önce CCA'nın açığa çıktığı ve diseke edildiği sıçanlarda kullanılana dayanıyordu. Sıçan modelinin aksine, farelerde CCA daha küçük ve daha incedir, bu da diseksiyonu daha zor hale getirir ve bu nedenle CCA'dan majör kanamanın ciddi komplikasyonlarına daha yatkındır. Ek olarak, CCA'nın maruz kalması, sternokleidomastoid kasın yer değiştirmesinin yanı sıra tükürük bezinin diseksiyonu ve lateral rotasyonu da dahil olmak üzere daha kapsamlı bir manipülasyon gerektirir26. Buna karşılık, mevcut yöntem, anatomik dönüm noktası olarak CCA yerine anterior juguler veni kullanır. CCA ile karşılaştırıldığında, anterior juguler ven daha yüzeysel yerleşimlidir ve kraniyal olarak daha fazla uzanır (Şekil 2A). Bu birkaç avantaj sunar. İlk olarak, bu dönüm noktası, tükürük bezi ve sternokleidomastoid kasın diseksiyonu ve yer değiştirmesi olmadan daha kolay görülür ve bu da ameliyatı daha az invaziv hale getirir; Bu nedenle, bu protokol sadece tükürüğün hafifçe aşağı çekilmesini gerektirir (adım 2.2). Minimal diseksiyon ayrıca hayvan için ameliyat süresini ve anestezi süresini kısaltır. Ayrıca, CCA'nın kapsamlı diseksiyonundan kaçınarak, bu, ciddi vakalarda büyük ve ölümcül kanamaya yol açabilecek CCA'ya zarar verme olasılığını en aza indirir. SCG, CCA'nın çatallanmasında yer aldığından CCA'nın manipülasyonu kaçınılmazdır, ancak bu bölgeye, CCA'nın hemen üzerindeki fasyayı açmak yerine anterior juguler venin yanındaki bir piercing ile posteromediyal olarak yaklaşarak, bu protokol bu ana arter ile teması ve dolayısıyla yaralanma riskini en aza indirir.
Bu ameliyatı gerçekleştirirken iki büyük zorlukla karşılaşılır. Birincisi, özellikle anatomik işaretlerin çok küçük boyutu ve fare modellerinde ganglionun kendisi göz önüne alındığında, SCG'nin başarılı bir şekilde tanımlanmasıdır. Bu nedenle, yer işaretlerinin dikkatli bir şekilde incelenmesi ve tanımlanması esastır. Adım 2.3'te, derin servikal fasyayı digastrik ve omohyoid kasların arka göbeği açısında delmek için açılı forseps yerleştirilmelidir. Bu adım sırasında, anterior juguler ven genellikle omohyoid kasın lateral kenarı boyunca uzanırken görülür ve giriş noktasının medialinde tutulmalıdır (Şekil 1); bu önemli bir dönüm noktasıdır ve SCG'yi bulmak için doğru alana girilmesine yardımcı olacaktır. SCG bu boşluğun lateral bölgesinde görülmüyorsa, dokuların daha lateral ve superior olarak araştırılması gerekir. Bu diseksiyon sırasında, karotis kılıfı, çevre dokuların kanamasını önlemek ve bu yapının SCG medialini tanımlamaya yardımcı olmak için görüş alanının lateralinde görüntülenir.
Bu prosedür için ikinci büyük zorluk, kanama riskini yönetmektir. SCG'ye bitişik, CCA, eksternal karotid arter ve internal juguler ven dahil olmak üzere çok sayıda kritik vasküler yapı vardır. Deneyimlerimize göre, kanama meydana gelirse, ameliyat sonrası değil, intraoperatif olarak karşılaşılır. Adım 3.4'te forsepsin açılması aşamasında kanama ile karşılaşılabilir. Damarların yaralanması, ganglionu çevreleyen damarlardan ve dokulardan soymaya ve nazikçe avulse etmeye çalışırken meydana gelebilir. Aktif kanama hemen görülmeyebilir, çünkü o bölgedeki damarların yakınına bir çift forseps kımpanlanır. Bu nedenle, forseps serbest bırakıldıktan sonra kanama tespit edilebilir ve ganglion çıkarıldıktan sonra bölgeyi dikkatlice incelemek önemlidir. Büyük bir damardaki yırtılmaya bağlı nadir görülen kan kaybı durumunda, hızlı kanama hızı nedeniyle bölge üzerinde baskı tutmak boşunadır. Bu durumda, ameliyat sonlandırılmalı ve fareye ötenazi yapılmalıdır.
SCG tanımlamasının zorlukları ve olası kanama komplikasyonları göz önüne alındığında, deneysel sağkalım ameliyatını gerçekleştirmeden önce anatomiye aşina olmak için kadavra farelerde SCG diseksiyonu ve çıkarılması yapılması önerilir.
Bu yöntem cerrahın elinden de etkilenebilir. İşlemin cerrahın baskın eli ile aynı tarafta gerçekleştirilmesi daha kolaydır. Örneğin, farenin sağ tarafında SCGx yaparken, cerrahın sol eli gangliyonun tabanını kavramak için kullanılacak ve sağ el ganglionu soymak için kullanılacak, bu da ameliyatın sağ elle daha fazla incelik gerektireceği anlamına geliyor. Bilateral SCGx yapılacaksa, daha fazla zaman alabilir ve cerrahın baskın olmayan tarafında gerçekleştirmek için daha fazla eğitim gerektirebilir.
SCGx'in bir fare modelindeki bu cerrahi tekniği, sempatik sinir sisteminin hem onkolojik hem de fizyolojik ortamlardaki etkilerini inceleyen gelecekteki deneysel çalışmalara olanak tanır. Fare modeli, düşük maliyet, kullanım kolaylığı ve genetik manipülasyona elverişlilik dahil olmak üzere diğer in vivo modellere göre birçok avantaja sahiptir ve böylece daha güçlü deneysel modellerin oluşturulmasını sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Acknowledgments
Q. W., NIH T32CA009685 tarafından desteklendi. R. J. W., NIH R01CA219534 tarafından desteklendi. Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi Çekirdek Tesisleri, NIH P30CA008748 tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody | EMD Millipore | AB152 | |
| Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment | Akorn | 59399-162-35 | |
| Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile | Covidien | 1806 | |
| Derf Needle Holder | Thomas Scientific | 1177K00 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| ETHILON Nylon Suture | Ethicon | 698H | |
| Fine Scissors - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Hypoallergenic Surgical Tape | 3M Blenderm | 70200419342 | |
| Induction Chamber, 2 Liter | VetEquip | 941444 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Nair | Church & Dwight Co., Inc | 40002957 | chemical hair removing agent |
| NORADRENALINE RESEARCH ELISA | Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics) | BA E-5200 | |
| NSG Mouse | Jackson Laboratory | JAX:005557 | |
| Povidone-Iodine Swabstick | PDI | S41350 | |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 |
References
- Magnon, C., et al. Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression. Science. 341 (6142), 1236361 (2013).
- Zhao, C. M., et al.
- Zahalka, A. H., et al. Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer. Science. 358 (6361), 321-326 (2017).
- Amit, M., et al. Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer. Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).
- Renz, B. W., et al. Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness. Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).
- Lucido, C. T., et al. Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes. Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).
- Peterson, S. C., et al. Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches. Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).
- Maronde, E., Stehle, J. H. The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets. Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).
- Yamazaki, S., et al.
- Huang, J., et al. S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs. Scientific Reports. 3 (1), 1114 (2013).
- Dieguez, H. H., et al. Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice. Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643 (2020).
- Liu, H., et al. Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of β-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats. Life Sciences. 193, 200-206 (2018).
- Zhang, W., et al. The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats. Frontiers in Medicine. 9, 792000 (2022).
- Zhang, W., et al. Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats. American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).
- Wang, X., et al. β-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control. Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).
- Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls β-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice. Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).
- Smith, B., Butler, M. The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse. The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).
- Sucharov, C. C., et al. β-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease. Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).
- Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).
- Grisanti, L. A., et al. Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury. JCI Insight. 5 (9), 99485 (2019).
- Alito, A. E., et al. Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation. Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).
- Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice. Ophthalmology & Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).
- Haug, S. R., Heyeraas, K. J. Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats. Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).
- Savastano, L. E., et al. A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy. Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).
- Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices. Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).
- Ziegler, K. A., et al. Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice. Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).
- Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain. Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).
- Dieguez, H. H., et al. Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice. Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641 (2018).
- Zhang, B., et al. Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells. Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).
- Pirzgalska, R. M., et al. Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine. Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).
- Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo. Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).
