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Biology

Handaufzuchtmethode für Weißbüschelaffenbabys

Published: June 9, 2023 doi: 10.3791/65296
Automatic Translation
1,2, 1, 1,2, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1,2, 1,2, 1,2, 1, 1,3, 1,4, 1,2,4, 1,2,4
1Department of Neurology of the Second Affiliated Hospital and Interdisciplinary Institute of Neuroscience and Technology, School of Medicine, Zhejiang University, 2Key Laboratory of Biomedical Engineering of Ministry of Education, College of Biomedical Engineering and Instrument Science, Zhejiang University, 3Rehabilitation Medicine Center, Rehabilitation & Sports Medicine Research Institute of Zhejiang Province, Department of Rehabilitation Medicine, Zhejiang Provincial People’s Hospital, Affiliated People’s Hospital, Hangzhou Medical College, 4NHC and CAMS Key Laboratory of Medical Neurobiology, MOE Frontier Science Center for Brain Science and Brain-Machine Integration, School of Brain Science and Brain Medicine, Zhejiang University

Summary

Hier beschreiben wir eine Handaufzuchtmethode zur Aufzucht von Weißbüschelaffenbabys in einem Tierbrutkasten. Diese Methode erhöht die Überlebensrate von Weißbüschelaffen-Säuglingen erheblich, was die Möglichkeit bietet, die Entwicklung von Weißbüschelaffen-Säuglingen mit ähnlichem genetischen Hintergrund zu untersuchen, die in verschiedenen postnatalen Umgebungen aufwachsen.

Abstract

Der Weißbüschelaffe (Callithrix jacchus) ist ein kleiner und sehr sozialer Neuweltaffe mit hohen Fortpflanzungsraten, der sich als überzeugendes nicht-menschliches Primatenmodell für die biomedizinische und neurowissenschaftliche Forschung erwiesen hat. Einige Weibchen bringen Drillinge zur Welt; Die Eltern können jedoch nicht alle erziehen. Um diese Säuglinge zu retten, haben wir eine Handaufzuchtmethode für neugeborene Weißbüschelaffen entwickelt. In diesem Protokoll beschreiben wir die Rezeptur des Futters, die Zeit für die Fütterung, die Konfiguration der Temperatur und Luftfeuchtigkeit sowie die Anpassung der von Hand aufgezogenen Säuglinge an die Umgebung der Kolonie. Diese Handaufzuchtmethode erhöht die Überlebensrate von Weißbüschelaffen-Säuglingen signifikant (ohne Handaufzucht: 45%; mit Handaufzucht: 86%) und bietet die Möglichkeit, die Entwicklung von Weißbüschelaffen-Säuglingen mit ähnlichem genetischen Hintergrund zu untersuchen, die in verschiedenen postnatalen Umgebungen aufwachsen. Da die Methode praktisch und einfach anzuwenden ist, gehen wir davon aus, dass sie auch in anderen Laboren angewendet werden könnte, die mit Weißbüschelaffen arbeiten.

Introduction

Der Weißbüschelaffe (Callithrix jacchus) ist ein kleiner und baumbewohnender Neuweltaffe, der aus Süd- und Mittelamerika stammt. Die Verwendung von Weißbüschelaffen in der biomedizinischen Forschung hat in den letzten Jahrzehnten rapide zugenommen, was auf mehrere wichtige Vorteile von Weißbüschelaffen im Vergleich zu anderen nichtmenschlichen Primaten (NHPs) zurückzuführen ist, darunter ihre geringere Körpergröße, einfachere Handhabung und Zucht in Gefangenschaft, kürzere Tragzeit, frühere sexuelle Reifung und geringeres Zoonoserisiko 1,2,3,4,5,6 . Der Weißbüschelaffe hat eine ähnliche Gehirnstruktur und Gehirnfunktion wie der Mensch und zeigt ein reiches Repertoire an Lautäußerungen und ein sehr soziales Verhalten mit reichen Emotionen. Es ist ein überzeugendes NHP-Modell für verschiedene Arten von neurowissenschaftlichen Studien, wie z. B. Studien zur sensorischen Verarbeitung 7,8,9,10,11,12,13,14, zur stimmlichen Kommunikation 15,16,17,18,19, Modelle zur Rückenmarksverletzung 20,21,22,23, Parkinson-Krankheit 24,25,26,27,28 und altersbedingte Krankheiten 29. Im Vergleich zu anderen NHPs hat der Weißbüschelaffe eine relativ hohe Reproduktionsrate, was für die transgene Modifikation nützlich seinkönnte 30,31,32. Dieser Primat wird auch häufig in der Pharmakologie, Angiographie sowie in Erreger- und Immunstudien eingesetzt 33,34,35,36,37,38,39. Das Angebot an Weißbüschelaffen ist jedoch vor allem in China nach wie vor sehr begrenzt und kann den schnell wachsenden Bedarf der wissenschaftlichen Forschung nicht decken.

In Weißbüschelaffenkolonien werden die erwachsenen Tiere ein- bis zweimal täglich gefüttert, und einige wenige Einrichtungen ändern die Ernährung für junge Weißbüschelaffen40. In der Regel klammern sich Weißbüschelaffenbabys für die tägliche Pflege fest an den Körper des Vaters oder der älteren Geschwister und werden der Mutter mehrmals täglich zur Milch gereicht. Einige Weißbüschelaffenweibchen bringen Drillinge zur Welt, und in diesem Fall können ein oder zwei Säuglinge aufgrund von Milchmangel nicht überleben. Darüber hinaus kümmern sich einige Eltern nicht um ihre Säuglinge, weil ihnen die Erfahrung in der Pflege fehlt oder aus anderen unbekannten Gründen. Das ist für viele Labore ein großer Verlust. Einige Studien haben über Methoden des Ernährungsmanagements für erwachsene Weißbüschelaffen in Gefangenschaft berichtet 40,41,42 unter Verwendung von Lebensmitteln und Formeln mit unterschiedlichen Makronährstoffzusammensetzungen, Vitaminen und Mineralien sowie über verschiedene Fütterungsprotokolle zur Anreicherung (püriert, geliert, gereinigt oder in Dosen)2,41. Eine frühere Studie berichtete über eine kollaborative Aufzuchtmethode für Weißbüschelaffen-Drillinge43, bei der die Betreuer einen Säugling pro Tag nehmen, ihn den ganzen Tag über von Hand füttern und am nächsten Tag gegen einen anderen der Drillinge austauschen. Obwohl diese Methode es den Säuglingen ermöglicht, elterliche Fürsorge zu erhalten, erfordert sie eine erfahrene Pflegekraft, um den Säugling jeden Tag aus dem Körper der Eltern zu nehmen, und ist arbeitsintensiv. Bisher gibt es keine Studie, die über eine detaillierte, schrittweise Handaufzuchtmethode für neugeborene Weißbüschelaffen berichtet.

Das Ziel der aktuellen Studie ist es, eine Handaufzuchtmethode für diejenigen bereitzustellen, die an der Entwicklung von Weißbüschelaffen interessiert sind, aber nur über begrenzte Ressourcen verfügen. Im Gegensatz zur bisherigen kollaborativen Aufzuchtmethode43 ist die jetzige Methode eine Alternative, die die Familie des Säuglings weniger stört und leicht zu erlernen ist. Basierend auf den Grundregeln des Stillens und 5 Jahren Praxis beschreibt diese Arbeit eine Handaufzuchtmethode für die Aufzucht von Weißbüschelaffenbabys, die die Zubereitung des Futters, einen Zeitplan für die Fütterung, die Konfiguration der Temperatur und Luftfeuchtigkeit des Tierbrutkastens sowie die Anpassung der Jungtiere an die Umgebung der Kolonie umfasst.

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Protocol

Alle experimentellen Verfahren wurden vom Animal Use and Care Committee der Zhejiang University genehmigt und folgten den Richtlinien der National Institutes of Health (NIH).

1. Unterbringung und Viehzucht44

  1. Stellen Sie den Kolonieraum mit einem Tag/Nacht-Zyklus von 12 Stunden zu 12 Stunden, einer Temperatur von 26-28 °C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 45 % bis 55 % ein.
  2. Paaren Sie männliche und weibliche Weißbüschelaffen im Alter von 2-6 Jahren und halten Sie sie in Käfigen (850 mm x 800 mm x 800 mm) mit ausreichend Platz und frischer Luft mit einem 24-Stunden-Belüftungssystem.
  3. Stellen Sie Ruhebretter, Schaukeln, Sitzstangen und Hängematten in den Käfigen bereit.
  4. Füttern Sie das Weißbüschelaffenpaar zweimal täglich mit frischem Wasser und 30-40 g Futter, einschließlich Getreide, Eiern, Süßkartoffeln, Honig, Obst, Gemüse und Mehlwürmern.
    HINWEIS: Tierärzte und Versuchsleiter müssen die Tiereinrichtung mindestens einmal täglich inspizieren, um sicherzustellen, dass kranke Personen sofort diagnostiziert und behandelt werden.

2. Vorbereitung vor der Geburt der Weißbüschelaffen-Säuglinge

  1. Pflege der trächtigen Weißbüschelaffen
    ANMERKUNG: Der Zeitpunkt der Empfängnis wurde durch Abtasten diagnostiziert (typischerweise 10-20 Tage nach Beginn der Embryonalperiode), und wir bezogen uns auch auf die Fortpflanzungsgeschichte der tierischen Probanden.
    1. Sorgen Sie für einen größeren Raum und minimale menschliche Störung für die Brutpaare.
    2. Füttern Sie die Brutpaare mit zusätzlichem Futter wie Mehlwürmern, Eiern, Joghurt und Trockenfrüchten, um die Ernährung der Weibchen zu gewährleisten.
    3. Kümmere dich um die trächtigen Weißbüschelaffen und kontrolliere sie häufig, um sie auf ihre Geburt vorzubereiten.
      HINWEIS: Die Tragzeit des Weißbüschelaffen wird auf 148 Tage ±4,3 Tage geschätzt 45.
  2. Bereiten Sie die folgenden Gegenstände vor: einen Brutkasten für Tiere (855 mm [B] x 470 mm [L] x 440 mm [H]), Einweg-Windeleinlagen (M/L-Größen), Babyfeuchttücher, Plüschtiere (Abbildung 1A), Spielzeugrollen (Abbildung 1B), Klettergerüste (Abbildung 1B), Decken (10 cm x 10 cm, Abbildung 1C) und eine elektronische Waage (Genauigkeit von 0,2 g, Abbildung 1F).
    HINWEIS: Um ein Aufhängen von Tieren zu vermeiden, sollten die Plüschtiere keine Schlaufenstrukturen haben.
  3. Zubereitung von Lebensmitteln und Fütterungsgeräten
    1. Bereiten Sie folgende Artikel vor: Babynahrung (geeignet für Kinder im Alter von 0 bis 12 Monaten), Babyreispaste (geeignet für Kinder im Alter von 0 bis 6 Monaten), Wasserkocher, Becherglas (100 ml), Heizkissen, Wiegeschale aus Kunststoff (80 mm x 80 mm x 22 mm, Abbildung 1D), sterile Zentrifugenröhrchen (50 ml), sterile Einwegspritzen (1-5 ml), intravenöse Injektoren (für maßgefertigte Fließsauger) (Abbildung 1E), und Tupfer (80-100 cm).
      HINWEIS: Um einen Sauger für die Fütterung herzustellen, wird ein Schnitt 1 cm vom Ende eines intravenösen Injektors entfernt, der an einer Spritze befestigt ist (Abbildung 1E).
  4. Vorbereitung des Aufzeichnungsformulars
    1. Bereiten Sie für jedes Weißbüschelaffenbaby ein Formular vor, das in der Regel mehrere Seiten lang ist, um grundlegende Informationen wie Name, Geburtsdatum, Geburtsgewicht, Eltern, andere grundlegende Informationen von Interesse wie Kopfumfang und Schwanzlänge, Zuchtinformationen wie Brutdatum und -zeit, die Menge (ml) der Nahrungsaufnahme, den Stuhlzustand (ja/nein, hart/locker) sowie die Temperatur und Luftfeuchtigkeit des Inkubators.
      HINWEIS: In der Regel wird das Körpergewicht zweimal täglich gemessen und aufgezeichnet, einmal vor der ersten Mahlzeit und einmal vor der letzten Mahlzeit.

Figure 1
Abbildung 1: Fotos der Gegenstände im Inkubator und der Fütterungswerkzeuge und des Zubehörs. a) Plüschtiere; (B) Spielzeugrollen und Klettergerüste; (C) Decke; d) Wiegeschale aus Kunststoff; (E) intravenöser Injektor und Spritze mit einem speziell angefertigten Zuführnippel; (F) elektronische Waage; (G) Betreuungsperson mit persönlicher Schutzausrüstung. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

3. Handaufzucht

  1. Reinigen und sterilisieren Sie den Raum vor dem Entbindungstermin.
    1. Sprühen Sie hypochlorige Säure oder 75%igen Ethylalkohol auf den Boden und den Tisch, lassen Sie sie 30 Sekunden einwirken, wischen Sie dann den Tisch ab und wischen Sie den Boden.
  2. Stellen Sie die Temperatur des Inkubators auf 35 °C und die Luftfeuchtigkeit auf 40 % ein. Um den Grundtemperaturbedarf von Weißbüschelaffen zu simulieren, wie Tabelle 1 zeigt, sollte die Temperatur des Inkubators vor dem 14. Tag nach der Geburt (P14) in der Regel bei 35 °C gehalten und ab P15 alle 3 Tage um 0,5 °C gesenkt werden. Halten Sie die Luftfeuchtigkeit im Inkubator bei 40%-45%, was nahe an der Luftfeuchtigkeit der Kolonie liegt und das Fell der Säuglinge trocken hält.
  3. Kacheln Sie eine Einweg-Windelunterlage, um das Gehäuse des Inkubators abzudecken.
  4. Um den Stress der Säuglinge zu minimieren, legen Sie ein paar Decken und Plüschtiere in den Inkubator, bevor Sie die kleinen Weißbüschelaffen einführen, die dazu neigen, die erwachsenen Weißbüschelaffen zu imitieren.
    HINWEIS: Die Decken und Plüschtiere werden vor Gebrauch für 1 Tag in den häuslichen Käfig der Zuchtpaare gelegt.
  5. Legen Sie die Krallenaffenbabys in den Inkubator und legen Sie sie auf die Plüschtiere, sobald sie von ihren Eltern im häuslichen Käfig getrennt sind.
    HINWEIS: Um soziale Isolation zu vermeiden und in Übereinstimmung mit dem Tierschutz, werden in der Regel zwei Säuglinge zusammen für die Handaufzucht ausgewählt.
    1. Tragen Sie vor dem Füttern sterilisierte persönliche Schutzausrüstung (PSA, Abbildung 1G).
    2. Ein paar Decken auf 35 °C erwärmen.
    3. Halten Sie das Weißbüschelaffenbaby vorsichtig mit warmen Decken und ermitteln Sie das Gewicht des Tieres als Geburtsgewicht.
    4. Legen Sie das Weißbüschelaffenbaby in den Inkubator mit warmen Decken.
    5. Machen Sie Aufzeichnungen, wie in Schritt 2.4 beschrieben.
  6. Mischen Sie die Futterzutaten und füttern Sie das Weißbüschelaffenbaby.
    1. 5 g Säuglingsnahrung in 30 ml 50 °C heißem Wasser in einem 50 ml sterilen Zentrifugenröhrchen auflösen.
      HINWEIS: Weißbüschelaffenbabys in unterschiedlichem postnatalen Alter benötigen unterschiedliche Futterrezepte. Tabelle 2 enthält die verschiedenen Dosierungen von Säuglingsnahrung, Reispaste und Wasser im postnatalen Alter von P1 bis P60. Die Dosierung reicht in der Regel für 1 Tag. Mixen Sie die Zutaten vor der ersten Mahlzeit und bewahren Sie den Rest der Lebensmittel in einem 4 °C warmen Kühlschrank auf. Erhitzen Sie die Speisen bei jeder Mahlzeit auf 30-35 °C.
    2. Nehmen Sie 1 ml Nahrung mit einer 1-ml-Spritze auf und deckeln Sie die Spritze mit einem speziell angefertigten Zuführnippel ab.
      HINWEIS: Wählen Sie eine Spritze in der richtigen Größe aus, siehe Tabelle 2.
    3. Halten Sie die Lebensmitteltemperatur mit dem Heizkissen bei 30-35 °C.
    4. Erwärmen Sie die Hände vor dem Füttern und halten Sie das Weißbüschelaffenbaby mit einer warmen Decke in einer Hand vorsichtig im Inkubator.
    5. Stecken Sie den Fütterungssauger in den Mund des Weißbüschelaffenbabys, während der Kopf des Weißbüschelaffenbabys sanft mit Daumen und Zeigefinger der Haltehand der Pflegeperson gehalten wird, und drücken Sie das Futter langsam mit konstanter Geschwindigkeit aus der Spritze.
      HINWEIS: Schieben Sie das Futter niemals schneller, als das Weißbüschelaffenbaby schluckt. Schnelles Pressen kann zum Ersticken führen, da die Nahrung aus der Nase durch den Rachen austritt. Dies kann zu Krankheiten wie Lungenentzündungen führen, die sogar zum Tod führen können. Wenn das Futter überläuft, wird das Weißbüschelaffenbaby Schwierigkeiten haben. Beenden Sie in diesem Fall die Fütterung und wischen Sie das Futter vorsichtig vom Gesicht des Tieres. Füttern Sie weiter, nachdem sich der Weißbüschelaffe normal verhält.
  7. Nachdem das Weißbüschelaffenbaby eine angemessene Menge an Nahrung zu sich genommen hat, wischen Sie seinen Anus mit einem Tupfer mit warmem Wasser ab, das sowohl den Anus reinigt als auch den Stuhlgang fördert.
  8. Beobachte das Tier einige Minuten lang und überprüfe die Fortbewegung und den Stuhlgang des Tieres.
  9. Notieren Sie die Fütterungszeit, die Menge (ml) der Nahrungsaufnahme, den Stuhlgang (ja/nein, hart/lose) sowie die Temperatur und Luftfeuchtigkeit des Inkubators.
    HINWEIS: Wickeln Sie das Weißbüschelaffenbaby während des Wiegens in warme Decken, um zu vermeiden, dass das Kind friert oder sich verletzt.
  10. Halten Sie das Gehäuse des Inkubators sauber, indem Sie feste Fäkalien aufheben oder auf eine neue Einweg-Windelunterlage umsteigen.
  11. Füttern Sie das Weißbüschelaffenbaby vor P50 gemäß den Schritten 3.3-3.7 und verwenden Sie die Dosierung der Futterbestandteile sowie die Fütterungszeit und -häufigkeit gemäß Tabelle 2.
  12. Ab P50 ist der junge Weißbüschelaffe in der Regel bereit zum freiwilligen Fressen.
    1. Verwenden Sie Wiegeschalen aus Kunststoff anstelle von Spritzen. Bereiten Sie das Essen zu, indem Sie die Lebensmittelzutaten direkt in der Schale mischen. Die Beträge sind Tabelle 2 zu entnehmen.
    2. Stellen Sie den Futternapf in den Inkubator und fixieren Sie den Boden, falls er umgedreht wird. Beobachten Sie einige Minuten lang, um sicherzustellen, dass die Krallenaffenbabys das Futter fressen. Leiten Sie das Tier die ersten Male an, freiwillig zu fressen, indem Sie das Tier zum Futternapf locken und sein Maul dazu bringen, das Futter mehrmals zu berühren.
      HINWEIS: Lassen Sie die Nase des Tieres niemals das Futter berühren. In der Regel lernt das Tier an 1 Tag freiwillig zu fressen.

4. Akklimatisierung vor der Rückkehr der jungen Weißbüschelaffen in die Kolonie

HINWEIS: Normalerweise ist die Handaufzucht beendet, wenn die jungen Weißbüschelaffen lernen, sich selbst zu ernähren. Es gibt einige Anpassungsverfahren, die durchgeführt werden müssen, bevor sie in den Heimatkäfig der Weißbüschelaffenkolonie zurückgebracht werden.

  1. Bringen Sie die jungen Weißbüschelaffen aus dem Tierbrutkasten in kleine Käfige (45 cm x 45 cm x 40 cm), die einem Vogelkäfig ähneln. Hängen Sie eine Wasserflasche (50 ml) an jeden kleinen Käfig.
  2. Bringen Sie die kleinen Käfige mit den jungen Weißbüschelaffen in die Kolonie und positionieren Sie sie in der Nähe des Familienkäfigs.
  3. Füttern Sie die kleinen Weißbüschelaffen 1 Woche lang separat mit einer Plastikwiegeschale und mischen Sie das Futter nach den täglichen Rezepten, die für die gesamte Kolonie zubereitet werden.
  4. Notieren Sie einmal täglich das Körpergewicht und den Stuhlgang.

5. Weißbüschelaffenbabys, die in den Familienkäfig zurückkehren

HINWEIS: Nachdem sie 7-10 Tage im kleinen Käfig gelebt haben, passen sich die jungen Weißbüschelaffen in der Regel gut an die Umgebung der Kolonie an und zeigen keine Angst mehr.

  1. Setzen Sie die kleinen Weißbüschelaffen morgens wieder in den Familienkäfig.
  2. Beobachten Sie die Tiere mindestens 15 Minuten lang, um sicherzustellen, dass es zwischen den Familienmitgliedern und den Neuankömmlingen nicht zu Beißen, Kämpfen oder Verfolgungsjagden kommt.
    HINWEIS: Wenn es zu Beißen, Kämpfen oder Jagen kommt, trennen Sie den Säugling so schnell wie möglich von den anderen. und versuchen Sie, den Säugling an einem anderen Tag noch einmal zu seiner Familie zurückzubringen. Wenn der Fehler erneut auftritt, wählen Sie eine andere Familie aus, um ihn zu pflegen. Die Familiengruppen, die über reiche Erziehungserfahrung verfügen, sind die erste Wahl für die Pflege. Lege ein Plüschtier in einen neuen Käfig, um das Affenbaby zu begleiten, wenn es keine Familie akzeptiert.
  3. Hören Sie auf, die jungen Weißbüschelaffen separat zu füttern, und beginnen Sie, sie mit dem Futter für die Kolonie zu füttern.
  4. Achten Sie 1 Woche lang genau auf die Aktivität der jungen Weißbüschelaffen, nachdem sie in den Familienkäfig zurückgekehrt sind.
  5. Messen Sie alle 2 Tage das Körpergewicht der männlichen Weißbüschelaffen und machen Sie eine Aufzeichnung. Wenn sie an Gewicht verlieren, füttern Sie sie mit einer Spritze im Familienkäfig.
  6. Tägliche Pflege der Weißbüschelaffenbabys, wie auch der Weißbüschelaffen in der Kolonie.

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Representative Results

Das Körpergewicht ist ein wichtiger Indikator für die Körperentwicklung von Tieren und wird in diesem Protokoll als Indikator für den Gesundheitszustand der Weißbüschelaffen verwendet. In dieser Arbeit nahmen die Körpergewichte der von Hand aufgezogenen Tiere mit zunehmendem Alter allmählich zu (Abbildung 2A, n = 16), ähnlich wie die Gewichte der Neugeborenen in einer früheren Studie46. Um die Störung der Brutfamilien in der Kolonie so gering wie möglich zu halten, haben wir die jungen Weißbüschelaffen in der Kolonie nicht jeden Tag gewogen. Wir erhielten die Gewichte der von den Eltern aufgezogenen Tiere 1 Monat nach der Geburt und später und verglichen diese mit den Gewichten der von Hand aufgezogenen Säuglinge im gleichen Alter. Es gab keine signifikanten Unterschiede im Körpergewicht zwischen den von den Eltern aufgezogenen Säuglingen und den von Hand aufgezogenen Säuglingen (P30, Handaufzuchtgruppe, 52,25 g ± 2,10 g, n = 18; Koloniegruppe, 57,34 g ± 2,77 g, n = 7; t = −1,3417, P = 0,1928; P60, Handaufzuchtgruppe, 91,76 g ± 3,44 g, Koloniegruppe, 93,06 g ± 4,68 g; t= −0,2019, P = 0,8424; t-Test des Schülers) (Abbildung 2B).

Figure 2
Abbildung 2: Körpergewichte der von Hand aufgezogenen Weißbüschelaffen und der von den Eltern aufgezogenen Weißbüschelaffen in der Kolonie. (A) Das Körpergewicht jedes von Hand aufgezogenen Säuglings. Die grauen Linien zeigen das individuelle Körpergewicht an, und die orangefarbene Kurve zeigt den Bevölkerungsdurchschnitt an. (B) Vergleich der Körpergewichte zwischen den von Hand aufgezogenen Säuglingen (orange) und den von den Eltern aufgezogenen Säuglingen (grün) bei P30 und P60. Die grauen Kreise stellen Einzelpersonen dar. Die Daten, die als Mittelwert ± SEM. ns angezeigt werden, zeigen keinen signifikanten Unterschied. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Tabelle 1. Konfiguration der Temperatur im Tierinkubator. Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.

Tabelle 2: Fütterungsrezepte. Die Spalten unter "Lebensmittelzutaten" geben das Milchrezept für 1 Tag an. Zum Beispiel mischen wir an den Tagen 1-14 nach der Geburt 5 g Babymilchpulver und 30 ml Wasser vor der ersten Mahlzeit und nehmen jedes Mal 0,5-1,5 ml dieser Milch zur Fütterung ein. Die Dosierungen von "Säuglingsmilchpulver" und "Reispaste" gelten für die Pulverformen. Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.

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Discussion

Der Weißbüschelaffe ist ein sehr nützliches NHP-Modell für die biomedizinische und neurowissenschaftliche Forschung. Die Ressourcen der Weißbüschelaffen sind jedoch zu begrenzt, um den schnell wachsenden Bedarf zu decken. In dieser Arbeit haben wir eine Handaufzuchtmethode entwickelt, die nicht nur die Überlebensrate von Weißbüschelaffen-Säuglingen erhöht, sondern auch die Möglichkeit bietet, ihre postnatale Entwicklung zu untersuchen. Diese Handaufzuchtmethode ist praktisch und leicht zu erlernen und lässt sich daher leicht auf andere Labore anwenden, die mit Weißbüschelaffen arbeiten.

Einige angeborene Defekte entwickeln sich in der Regel in den ersten 2 Lebenswochen. Bisher haben wir mehrere Fälle von neugeborenen Weißbüschelaffen mit angeborenen Defekten am Augenlid, der Lunge, dem Darm und dem Gehirn identifiziert, die selten bis P14 überleben. Daher ist P1-14 ein kritischer Zeitraum für das Aussortieren gesunder neugeborener Weißbüschelaffen, die durch die Handaufzuchtmethode aufgezogen werden können. Wenn Weißbüschelaffenbabys aufgrund von Nachlässigkeit oder Milchmangel aus dem Körper ihrer Eltern fallen, können sie nicht überleben. So hilft die Handaufzucht, ihr Leben zu retten. In dieser Arbeit betrug die Überlebensrate ohne Handaufzucht 45 % (n = 13/29) und stieg auf 86 % (n = 25/29), nachdem wir die Handaufzuchtmethode angewendet hatten.

Es gibt mehrere kritische Punkte zu beachten. Die Betreuer müssen während des Fütterns geduldig sein; Ein zu schnelles Drücken der Spritze ist nicht gut, da es den jungen Weißbüschelaffen nicht erlaubt, zu schlucken, was zu Ersticken oder Ileus führen und somit die Atemwege oder das Verdauungssystem der Tiere beeinträchtigen kann. Die Pflegekräfte müssen während der Fütterung sanft und leise sein, um den Stress für die Jungtiere zu minimieren, da Stress das Darmmikrobiom erheblich beeinträchtigen kann und mit chronischem Durchfall bei Weißbüschelaffen verbunden ist47,48. Während der Handaufzucht müssen sich alle Menschen in der Nähe der Weißbüschelaffenbabys durchweg behutsam verhalten. Manchmal macht man beim eiligen Öffnen der Tür des Inkubators plötzlich laute Geräusche, die die Säuglinge erschrecken und zu einer Stressreaktion führen können.

Das Körpergewicht der Tiere muss täglich überwacht werden, denn das Körpergewicht ist ein wichtiger Indikator für den Gesundheitszustand eines Tieres. Unterernährung, Überfütterung, Mangelernährung oder Dyspepsie können durch eine Veränderung des Körpergewichts schnell erkannt werden. Es wurde bereits berichtet, dass Weißbüschelaffen mit niedrigem Körpergewicht anfälliger für gleichzeitige Knochen- und Magen-Darm-Erkrankungen sind49. Im Allgemeinen blieben die Körpergewichte der männlichen Weißbüschelaffen im P1-5-Stadium konstant und stiegen bei der Handaufzucht allmählich um 1-4 g pro Tag an. Ab P5 müssen die Betreuer, wenn keine Zunahme oder ein allmählicher Verlust des Körpergewichts über 2 Tage beobachtet wird, wachsam sein und die Futterzutaten sowie die Körpertemperatur und den Ausscheidungsstatus der Tiere überprüfen. In diesem Fall ist es sinnvoll, Probiotika hinzuzufügen.

Es ist nicht notwendig, die Tiere über Nacht zu füttern. Wir haben versucht, die Weißbüschelaffenbabys alle 2 bis 4 Stunden rund um die Uhr zu füttern und stellten fest, dass dies das Wachstum der Weißbüschelaffenbabys nicht förderte (Daten nicht gezeigt). Mangelnde körperliche Bewegung oder Überfütterung können metabolische Syndrome wie Fettleibigkeit hervorrufen, die mit Dyslipidämie, verändertem Glukosestoffwechsel und Insulinresistenz bei Weißbüschelaffen in Verbindung gebracht wird50,51,52. Die Säuglinge müssen beim Füttern und Wiegen vor allem in den ersten Tagen nach der Geburt warm gehalten werden. Wir fanden heraus, dass ein Säugling Durchfall hatte, nachdem er sich erkältet hatte. Durchfall schwächt schnell die Vitalität des Tieres und reduziert das Körpergewicht.

Die Griffkraft und die Körpertemperatur sind die wichtigsten Indikatoren für den Gesundheitszustand von Weißbüschelaffenbabys, die sorgfältig überwacht werden müssen. Wann immer ein Weißbüschelaffenbaby gefüttert wird, greift es nach der Decke oder dem Finger des Futtertiers. Die Griffkraft ist in der Regel geschwächt, wenn das Tier Durchfall hat. Sobald dies geschieht, sollte man dem Futter erbsengroße Probiotika hinzufügen und den betroffenen Säugling 3 Tage lang ernähren, bis der Durchfall verschwunden ist. Wenn der Durchfall länger als 3 Tage anhält, sollte man anstelle von Probiotika Montmorillonit-Pulver hinzufügen. Im Gegensatz dazu, wenn der Säugling Verstopfung hat, sollte man seinen Anus vorsichtig mit einem in warmes Wasser getauchten Tupfer abwischen, um den Stuhlgang zu fördern, und bei Bedarf sollte Lactulose verwendet werden. Hinzu kommt, dass die Körpertemperatur des Weißbüschelaffenbabys in der Regel höher ist als die des Menschen. Ist die Temperatur des Tieres niedriger als normal, was oft mit einer geschwächten Griffkraft einhergeht, muss das Verhalten des Tieres genau beobachtet und die Fütterung entsprechend angepasst werden.

Wenn die Weißbüschelaffenbabys zu klettern beginnen, müssen sie im Brutkasten unter Aufsicht des Züchters mit Klettergerüsten und Spielzeugrollen ausgestattet werden. Die Tiere dürfen ab P25 vor und nach jeder Mahlzeit das Klettern üben. Bei P50 können die jungen Weißbüschelaffen gut klettern und springen, was eine Voraussetzung für das freiwillige Fressen ist. Weißbüschelaffenbabys knirschen gerne mit den Zähnen, indem sie auf Decken, Plüschtiere oder Einweg-Windeleinlagen beißen, aber diese können kleine Schlaufen bilden, die aufgrund der Selbststrangulation ihr Leben bedrohen. Daher sollten gerissene Teile und Gewinde umgehend gereinigt werden, um Verletzungen oder Todesfälle zu vermeiden.

Manchmal kann das Fütterungsverfahren aufgrund von Unterschieden in Appetit, Vitalität und Umweltbedingungen leicht modifiziert werden. Wenn ein Weißbüschelaffenbaby stark genug ist, wird es wahrscheinlich vor P25 mit dem Klettern beginnen, vor P50 das freiwillige Essen lernen und sogar vor P60 zur Familie zurückkehren. In der Zwischenzeit senken wir die Temperatur im Inkubator jeden Tag oder alle 2 Tage um 0,5 °C, damit sich das Weißbüschelaffenbaby an die gleiche Temperatur wie in der Kolonie gewöhnen kann, bevor es schließlich in den Käfig zurückkehrt. Wenn ein Weißbüschelaffenbaby für einen bestimmten Zeitraum einen schlechten Appetit hat, muss weniger Futter pro Mahlzeit, aber mit einer höheren Häufigkeit pro Tag bereitgestellt werden, und der Inkubator muss länger warm gehalten werden als die Kolonie. In der aktuellen Studie wurden 88,9 % (n = 16/18) der Säuglinge erfolgreich von den leiblichen Eltern aufgenommen, 11,1 % (n = 2/18) wurden von anderen Familien aufgenommen und keines wurde abgelehnt.

Die Untersuchung von juvenilen Weißbüschelaffen mit unterschiedlichen Familienstrukturen zeigt Unterschiede in ihrer sozialen und geistigen Entwicklung; In der Tat können soziale Interaktionen zwischen Eltern und Kindern und zwischen Gleichaltrigen während der Entwicklung die soziale Gehirnfunktion formen 53,54,55. Ob ein oder zwei Tiere für die Handaufzucht ausgewählt werden, hängt daher von den Zielen des Versuchs ab. Unser Labor zieht in der Regel zwei Säuglinge von Hand auf, wenn möglich, um sowohl den Anforderungen des Tierschutzes gerecht zu werden als auch mehr Säuglingen zum Überleben zu verhelfen. Auch die kollaborative Aufzucht von Weißbüschelaffen-Drillingen43 ist eine gute Wahl. Von Hand aufgezogene Weißbüschelaffen mit begrenzten elterlichen Interaktionen eignen sich möglicherweise nicht für Experimente zur Untersuchung des Sozialverhaltens.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Handaufzuchtmethode in der aktuellen Studie Anweisungen zur Fütterung von Weißbüschelaffenbabys von P1 bis P60 liefert. Mit diesem Protokoll dauert es ~15 Minuten, bis ein erfahrener Züchter ein Weißbüschelaffenbaby manuell füttert. Der erfolgreiche Betrieb hängt von mehreren Faktoren ab, darunter die richtige Temperatur des Futters und der Umgebung, die Fütterungszeit und -technik sowie die Ausscheidung der Tiere nach den Mahlzeiten. Diese Methode ist praktikabel und leicht zu erlernen. Es wurde mit 5 Jahren Praxis kontinuierlich optimiert. Diese Methode kann auch auf andere Laboratorien angewendet werden, die mit Weißbüschelaffen arbeiten.

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Disclosures

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Acknowledgments

Die Autoren danken Mingxuan Li für die Bearbeitung der Grammatik und den Feinschliff der frühen Version dieses Manuskripts. Diese Arbeit wurde von der Zhejiang Province Natural Science Foundation of China (LD22H090003) unterstützt; die Natural Science Foundation of China (32170991 und 32071097), STI2030-Großprojekte 2021ZD0204100 (2021ZD0204101) und 2022ZD0205000 (2022ZD0205003); und das MOE Frontier Science Center for Brain Science & Brain-Machine Integration, Zhejiang University.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
animal incubator RCOM, Korea MX - BL600N, 855 mm (W) x 470 mm (L) x 440 mm (H)
baby milk powder Meadjohnson, America suitable for 0-12 months of age, executive standard - GB25596
baby rice paste HEINZ, China suitable for 0-6 months of age, executive standard - GB10769
baby wipes babycare, China soft
beaker ShuNiu, China 100 mL
blankets Grace, China 10 cm × 10 cm, soft
climbing frame WowWee, China firm and no small circular structures
disposable diaper pads Hi Health Pet, China either M or L size
disposable sterile syringe Cofoe, China 1 mL, 2.5 mL, 3 mL, 5 mL, 10 mL
electronic scale YouSheng, China measuring range from 0 to 6,000 g with precision of 0.2 g
intravenous injector HD, China 0.55 mm x 20 mm needle
kettle FGA, China warm-keeping kettle 1,500 mL
lactulose BELCOL, China to solve constipation
plastic weighing dish SKSLAB, China 80 mm x 80 mm x 22 mm, used as a bowl
plush toy Lebiyou, China soft
probiotic powder G-Pet, China to regulate gastrointestinal environment
sterile centrifuge tube NEST, China 50 mL
swab OYEAH, China 80 - 100 mm
toy roller WowWee, China firm and no small circular structures

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References

  1. Miller, C. T., et al. Marmosets: A neuroscientific model of human social behavior. Neuron. 90 (2), 219-233 (2016).
  2. Ross, C. N., Colman, R., Power, M., Tardif, S. Marmoset metabolism, nutrition, and obesity. ILAR Journal. 61 (2-3), 179-187 (2020).
  3. Kishi, N., Sato, K., Sasaki, E., Okano, H. Common marmoset as a new model animal for neuroscience research and genome editing technology. Development, Growth & Differentiation. 56 (1), 53-62 (2014).
  4. Prins, N. W., et al. Common marmoset (Callithrix jacchus) as a primate model for behavioral neuroscience studies. Journal of Neuroscience Methods. 284, 35-46 (2017).
  5. Tokuno, H., Watson, C., Roberts, A., Sasaki, E., Okano, H. Marmoset neuroscience. Neuroscience Research. 93, 1-2 (2015).
  6. Hodges, J. K., Henderson, C., Hearn, J. P. Relationship between ovarian and placental steroid production during early pregnancy in the marmoset monkey (Callithrix jacchus). Journal of Reproduction and Fertility. 69 (2), 613-621 (1983).
  7. Troilo, D., Judge, S. J. Ocular development and visual deprivation myopia in the common marmoset (Callithrix jacchus). Vision Research. 33 (10), 1311-1324 (1993).
  8. Mitchell, J. F., Leopold, D. A. The marmoset monkey as a model for visual neuroscience. Neuroscience Research. 93, 20-46 (2015).
  9. Hung, C. C., et al. Functional MRI of visual responses in the awake, behaving marmoset. NeuroImage. 120, 1-11 (2015).
  10. Gao, L., Kostlan, K., Wang, Y., Wang, X. Distinct subthreshold mechanisms underlying rate-coding principles in primate auditory cortex. Neuron. 91 (4), 905-919 (2016).
  11. Gao, L., Wang, X. Subthreshold activity underlying the diversity and selectivity of the primary auditory cortex studied by intracellular recordings in awake marmosets. Cerebral Cortex. 29 (3), 994-1005 (2019).
  12. Gao, L., Wang, X. Intracellular neuronal recording in awake nonhuman primates. Nature Protocols. 15, 3615-3631 (2020).
  13. Wang, X., et al. Corticofugal modulation of temporal and rate representations in the inferior colliculus of the awake marmoset. Cerebral Cortex. 32 (18), 4080-4097 (2022).
  14. Wang, X., et al. Selective corticofugal modulation on sound processing in auditory thalamus of awake marmosets. Cerebral Cortex. 33 (7), 3372-3386 (2022).
  15. Kajikawa, Y., et al. Coding of FM sweep trains and twitter calls in area CM of marmoset auditory cortex. Hearing Research. 239 (1-2), 107-125 (2008).
  16. Choi, D., Bruderer, A. G., Werker, J. F., et al. Sensorimotor influences on speech perception in pre-babbling infants: Replication and extension of Bruderer et al. Psychonomic Bulletin & Review. 26 (4), 1388-1399 (2019).
  17. Eliades, S. J., Miller, C. T. Marmoset vocal communication: Behavior and neurobiology. Developmental Neurobiology. 77 (3), 286-299 (2017).
  18. Roy, S., Zhao, L., Wang, X. Distinct neural activities in premotor cortex during natural vocal behaviors in a New World primate, the common marmoset (Callithrix jacchus). Journal of Neuroscience. 36 (48), 12168-12179 (2016).
  19. Simões, C. S., et al. Activation of frontal neocortical areas by vocal production in marmosets. Frontiers in Integrative Neuroscience. 4, 123 (2010).
  20. Iwanami, A., et al. Transplantation of human neural stem cells for spinal cord injury in primates. Journal of Neuroscience Research. 80 (2), 182-190 (2005).
  21. Schorscher-Petcu, A., Dupré, A., Tribollet, E. Distribution of vasopressin and oxytocin binding sites in the brain and upper spinal cord of the common marmoset. Neuroscience Letters. 461 (3), 217-222 (2009).
  22. Bowes, C., Burish, M., Cerkevich, C., Kaas, J. Patterns of cortical reorganization in the adult marmoset after a cervical spinal cord injury. Journal of Comparative Neurology. 521 (15), 3451-3463 (2013).
  23. Kondo, T., et al. Histological and electrophysiological analysis of the corticospinal pathway to forelimb motoneurons in common marmosets. Neuroscience Research. 98, 35-44 (2015).
  24. Nash, J. E., et al. Antiparkinsonian actions of ifenprodil in the MPTP-lesioned marmoset model of Parkinson's disease. Experimental Neurology. 165 (1), 136-142 (2000).
  25. van Vliet, S. A., et al. Neuroprotective effects of modafinil in a marmoset Parkinson model: Behavioral and neurochemical aspects. Behavioural Pharmacology. 17 (5-6), 453-462 (2006).
  26. van Vliet, S. A., Vanwersch, R. A., Jongsma, M. J., Olivier, B., Philippens, I. H. Therapeutic effects of Delta9-THC and modafinil in a marmoset Parkinson model. European Neuropsychopharmacology. 18 (5), 383-389 (2008).
  27. Philippens, I. H., t Hart, B. A., Torres, G. The MPTP marmoset model of parkinsonism: a multi-purpose non-human primate model for neurodegenerative diseases. Drug Discovery Today. 15 (23-24), 985-990 (2010).
  28. Santana, M. B., et al. Spinal cord stimulation alleviates motor deficits in a primate model of Parkinson disease. Neuron. 84 (4), 716-722 (2014).
  29. Tardif, S. D., Mansfield, K. G., Ratnam, R., Ross, C. N., Ziegler, T. E. The marmoset as a model of aging and age-related diseases. ILAR Journal. 52 (1), 54-65 (2011).
  30. Sasaki, E., et al. Generation of transgenic non-human primates with germline transmission. Nature. 459, 523-527 (2009).
  31. Sasaki, E. Prospects for genetically modified non-human primate models, including the common marmoset. Neuroscience Research. 93, 110-115 (2015).
  32. Park, J. E., Sasaki, E. Assisted reproductive techniques and genetic manipulation in the common marmoset. ILAR Journal. 61 (2-3), 286-303 (2020).
  33. Smith, D., Trennery, P., Farningham, D., Klapwijk, J. The selection of marmoset monkeys (Callithrix jacchus) in pharmaceutical toxicology. Laboratory Animals. 35 (2), 117-130 (2001).
  34. Smith, T. E., Tomlinson, A. J., Mlotkiewicz, J. A., Abbott, D. H. Female marmoset monkeys (Callithrix jacchus) can be identified from the chemical composition of their scent marks. Chemical Senses. 26 (5), 449-458 (2001).
  35. Jagessar, S. A., et al. Induction of progressive demyelinating autoimmune encephalomyelitis in common marmoset monkeys using MOG34-56 peptide in incomplete freund adjuvant. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 69 (4), 372-385 (2010).
  36. Kap, Y. S., Laman, J. D., 't Hart, B. A. Experimental autoimmune encephalomyelitis in the common marmoset, a bridge between rodent EAE and multiple sclerosis for immunotherapy development. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 5 (2), 220-230 (2010).
  37. Carrion, R., Patterson, J. L. An animal model that reflects human disease: The common marmoset (Callithrix jacchus). Current Opinion in Virology. 2 (3), 357-362 (2012).
  38. Jagessar, S. A., et al. Overview of models, methods, and reagents developed for translational autoimmunity research in the common marmoset (Callithrix jacchus). Experimental Animals. 62 (3), 159-171 (2013).
  39. Feng, Z., et al. Biologically excretable aggregation-induced emission dots for visualizing through the marmosets intravitally: Horizons in future clinical nanomedicine. Advanced Materials. 33 (17), 2008123 (2021).
  40. Goodroe, A., et al. Current practices in nutrition management and disease incidence of common marmosets (Callithrix jacchus). Journal of Medical Primatology. 50 (3), 164-175 (2021).
  41. Power, M. L., Koutsos, L. Chapter 4 - Marmoset nutrition and dietary husbandry. The Common Marmoset in Captivity and Biomedical Research. Marini, R., Wachtman, L., Tardif, S., Mansfield, K., Fox, J. , Academic Press. Cambridge, MA. 63-76 (2019).
  42. Gore, M. A., et al. Callitrichid nutrition and food sensitivity. Journal of Medical Primatology. 30 (3), 179-184 (2001).
  43. Hearn, J. P., Burden, F. J. Collaborative' rearing of marmoset triplets. Laboratory Animals. 13 (2), 131-133 (1979).
  44. Cao, X., et al. Effect of a high estrogen level in early pregnancy on the development and behavior of marmoset offspring. ACS Omega. 7 (41), 36175-36183 (2022).
  45. Watakabe, A., et al. Application of viral vectors to the study of neural connectivities and neural circuits in the marmoset brain. Developmental Neurobiology. 77 (3), 354-372 (2017).
  46. Takahashi, D. Y., et al. The developmental dynamics of marmoset monkey vocal production. Science. 349 (6249), 734-738 (2015).
  47. Malukiewicz, J., et al. The gut microbiome of exudivorous marmosets in the wild and captivity. Scientific Reports. 12 (1), 5049 (2022).
  48. Shigeno, Y., et al. Comparison of gut microbiota composition between laboratory-bred marmosets (Callithrix jacchus) with chronic diarrhea and healthy animals using terminal restriction fragment length polymorphism analysis. Microbiology and Immunology. 62 (11), 702-710 (2018).
  49. Baxter, V. K., et al. Serum albumin and body weight as biomarkers for the antemortem identification of bone and gastrointestinal disease in the common marmoset. PLoS One. 8 (12), e82747 (2013).
  50. Tardif, S. D., et al. Characterization of obese phenotypes in a small nonhuman primate, the common marmoset (Callithrix jacchus). Obesity. 17 (8), 1499-1505 (2009).
  51. Wachtman, L. M., et al. Differential contribution of dietary fat and monosaccharide to metabolic syndrome in the common marmoset (Callithrix jacchus). Obesity. 19 (6), 1145-1156 (2011).
  52. Power, M. L., Ross, C. N., Schulkin, J., Ziegler, T. E., Tardif, S. D. Metabolic consequences of the early onset of obesity in common marmoset monkeys. Obesity. 21 (12), E592-E598 (2013).
  53. Shimizu, K., et al. Peer-social response in 4 juvenile marmosets represented the emotional development traits depending on family structure. Neuroscience Research. 65, S244 (2009).
  54. Schultz-Darken, N., Braun, K. M., Emborg, M. E. Neurobehavioral development of common marmoset monkeys. Developmental Psychobiology. 58 (2), 141-158 (2016).
  55. Gultekin, Y. B., Hage, S. R. Limiting parental feedback disrupts vocal development in marmoset monkeys. Nature Communications. 8, 14046 (2017).

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