Summary

न्युट्रोफिल अलगाव प्रोटोकॉल

Published: July 23, 2008
doi:

Summary

Neutrophils सूजन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के साइट पर आने के लिए सबसे पहले कोशिकाओं के बीच हैं, और उनके कार्यों और तंत्र इन विट्रो में बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है. हम एक मानक घनत्व ढाल जुदाई विधि पूरे रक्त का उपयोग व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जुदाई मीडिया से मानव neutrophils अलग प्रदर्शित करता है.

Abstract

न्युट्रोफिल polymorphonuclear granulocytes (PMN) मनुष्यों में और सूजन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के साइट पर आने के लिए सबसे पहले कोशिकाओं के बीच सबसे प्रचुर मात्रा में leukocytes में हैं. सूजन में उनकी महत्वपूर्ण भूमिका के कारण, हरकत, cytokine उत्पादन, phagocytosis, और ट्यूमर कोशिका का मुकाबला जैसे न्युट्रोफिल कार्य बड़े पैमाने पर अध्ययन कर रहे हैं. Neutrophils के विशिष्ट कार्यों विशेषताएँ के लिए, उन्हें अन्य रक्त कोशिकाओं से अलग की एक साफ, तेज, और विश्वसनीय विधि के लिए इन विट्रो अध्ययन में वांछनीय है, खासकर के बाद से neutrophils अल्पकालिक हैं और संग्रह के 2-4 घंटे के भीतर प्रयोग किया जाना चाहिए. यहाँ, हम एक मानक घनत्व ढाल जुदाई विधि पूरे रक्त का उपयोग व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जुदाई मीडिया है कि सोडियम metrizoate और Dextran 500 का एक मिश्रण है से मानव neutrophils अलग प्रदर्शित करता है. प्रक्रिया layering घनत्व ढाल मध्यम, centrifugation न्युट्रोफिल परत की जुदाई, और अवशिष्ट एरिथ्रोसाइट्स के lysis पर पूरे रक्त के होते हैं. कोशिकाओं तो धो रहे हैं, गिना, और इच्छित एकाग्रता के लिए बफर में resuspended. जब सही ढंग से प्रदर्शन किया, इस विधि के लिए>> 95% व्यवहार्यता के साथ 95% neutrophils के नमूने उपज के लिए दिखाया गया है.

Protocol

न्युट्रोफिल अलगाव प्रोटोकॉल कमरे के तापमान पर सभी अभिकर्मकों लाओ. न्युट्रोफिल अपकेंद्रित्र ट्यूब में अलगाव मीडिया के 5.0 मिलीलीटर लीजिए. ध्यान जुदाई मीडिया से अधिक रक्त की परत 5.0 मिलीलीटर. इस क?…

Discussion

घनत्व ढाल जुदाई विधि सोडियम metrizoate और Dextran 500 का एक मिश्रण का उपयोग कर पूरे रक्त से मानव neutrophils अलग करने के लिए प्रयोग किया जाता है. इस विधि mononuclear Boyum (1968) द्वारा ल्युकोसैट जुदाई तरीका है जो न्युट्रोफिल जुदाई के लिए Ferrante और पे?…

Acknowledgements

एनआईएच R01 HL56621 से अनुदान.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Lymphocyte Poly(R) Reagent Cedarlane Labs   PolymorphprepTM can be used as an alternative
Hank’s Balanced Salt Solution without Calcium Chloride Reagent Invitrogen Gibco    
Human Serum Albumin Reagent ZLB Bioplasma    
Red Cell Lysis Buffer Reagent Roche Diagnostics    
Centrifuge Tool      
Vortexer Tool      
Pasteur Pipettes and bulb Tool      
PolymorphprepTM Reagent Axis-Shield PoC   Alternative reagent to Lymphocyte-Poly (R)
Syringe Filter Other Millipore SLGV033RS Millex-GV, 0.22 µm, PVDF, 33 mm, gamma-sterilizable
Hank’s Balance Salt Solution with Calcium Chloride Reagent Invitrogen Gibco    

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Cite This Article
Oh, H., Siano, B., Diamond, S. Neutrophil Isolation Protocol. J. Vis. Exp. (17), e745, doi:10.3791/745 (2008).

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