L'observation microscopique-sensibilité aux médicaments (MODS) de dosage est un faible coût, faible technicité outil de haute performance de détection de la tuberculose (TB) et la tuberculose multirésistante (tuberculose à bacilles multirésistants). Cette vidéo décrit le liquide MODS la méthode de culture des médias.
Les patients atteints de tuberculose pulmonaire (TB) active infecter d'autres personnes de 10 à 15 par an, ce qui rend le diagnostic de tuberculose active essentielle à la fois à guérir le patient et la prévention des nouvelles infections. Par ailleurs, l'émergence de la tuberculose multirésistante (tuberculose à bacilles multirésistants) signifie que la détection de la résistance aux médicaments est nécessaire pour arrêter la propagation de souches résistantes aux médicaments. L'observation microscopique-sensibilité aux médicaments (MODS) de dosage est un faible coût, faible technicité outil de haute performance de détection de la tuberculose et TB-MR. Le test MODS est basé sur trois principes: 1) de Mycobacterium tuberculosis (MTB) croît plus vite dans les milieux liquides que sur milieu solide 2) la croissance VTT microscopiques peuvent être détectés plus tôt dans les milieux liquides que d'attendre que l'aspect macroscopique des colonies sur milieu solide, et que la croissance est caractéristique de VTT, qui lui permet d'être distinguée de la contamination mycobactéries ou fongiques ou bactériennes atypiques 3) les médicaments isoniazide et la rifampicine peuvent être incorporés dans le test MODS pour permettre une détection directe simultanée de tuberculose à bacilles multirésistants, éliminant la nécessité d'une sous-culture à effectuer un test de drogue indirects susceptibilité. La concurrence des diagnostics actuels sont entravés par une faible sensibilité aux frottis de crachats, de longs délais jusqu'à ce diagnostic avec la culture médiatique solide, avec des coûts prohibitifs des méthodes existantes de liquide milieux de culture, et la nécessité de ne sous-culture pour les tests de sensibilité aux médicaments indirectes pour détecter la tuberculose multirésistante. En revanche, la méthode non-propriétaires MODS a une sensibilité élevée pour la tuberculose et tuberculose à bacilles multirésistants, est une méthode de culture relativement rapide, offre simultanée des tests de sensibilité aux médicaments pour la tuberculose multirésistante, et est accessible aux ressources limitées à un peu moins 3 $ pour les tests pour la tuberculose et TB-MR.
Le test MODS est destiné aux ressources limitées. Pour la première fois, MODS apporte la capacité de détection rapide de la culture liquide de la tuberculose et la tuberculose multirésistante aux ressources limitées à un peu moins de 3 $ par test. MODS est un non-propriétaires, méthodologie itérative, et la communauté MODS est toujours intéressé à l'amélioration d'autres laboratoires ont réussi à faire.
Une préoccupation récurrente est la biosécurité de la culture des milieux liquides de la tuberculose,…
Nous tenons à remercier Sean Fitzwater et Carmen Luna Giannina de Colombo pour le segment de croissance de tuberculose vidéo time-lapse. Nous tenons à remercier Marty Roper pour sa rétroaction approfondie et un excellent cours de l'édition et co-auteur du Guide de l'utilisateur, à partir de laquelle le protocole actuel a été prise essentiellement verbatim. La production de cette vidéo a été financée par le NIH / Fogarty International Center http://www.fic.nih.gov/ David Moore AJ contribué en tant que boursier de recherche clinique de Wellcome Trust en Médecine Tropicale et Reader en maladies infectieuses de l'Imperial College de Londres (Fellowship 078067/Z/05 plusieurs prix). Mark F. Brady contribué tant que boursier du NIH / Fogarty International Research Center.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Refrigerator/ freezer | Equipment | to store pre-prepared broth and antibiotic stocks | ||
Vortex | Equipment | to aid sputum decontamination | ||
Centrifuge | Equipment | for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; does not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed) | ||
Incubator (37 degree C) | Equipment | for culture; need not be CO2 enriched | ||
Inverted light microscope | Microscope | to read MODS plates | ||
Autoclave | Equipment | to sterilize media, PBS and used plates | ||
Balance | Equipment | to weigh isoniazid, rifampicin and NALC | ||
Middlebrook 7H9 broth (Difco) | Reagent | Fisher | DF0713-17-9 | 500gr/bottle; culture media base |
Casitone (pancreatic digest casein) | Reagent | Fisher | DF0259‐17‐9 | 500gr/bottle; culture media base |
Glycerol (glycerin) lyophilized | Reagent | Sigma | G‐33‐500 | 500ml/bottle; culture media base |
PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) | Reagent | Fisher | B4345114 | 6 bottles/pack; antibiotic media supplement |
OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) | Reagent | Fisher | B11886 | 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement |
Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) | Reagent | Sigma | D-2650 | 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock |
Antibiotic stocks: isoniazid | Reagent | Sigma | I-3377 | 50gr/bottle; direct susceptibility testing |
Antibiotic stocks: rifampicin | Reagent | Sigma 99 | R-3501 | 1gr/bottle; direct susceptibility testing |
Sodium hydroxide (pellets) | Reagent | Sigma | 221465 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) | Reagent | Sigma | S-4641 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
N-acetyl-L-cysteine | Reagent | Sigma | A-7250 | 50gr/bottle; sputum decontamination |
Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 | Reagent | Sigma | P0662 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 | Reagent | Sigma | S0876 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium hypochlorite | Reagent | household bleach | to discard contaminated waste | |
15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) | Consumable | Fisher | 14‐959‐49B | 500ea/case; for sputum decontamination and concentration |
24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) | Consumable | Fisher | 08-772-1 | 50 plates/case; for culture and reading |
Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) | Consumable | for biosecurity to contain 24 well plate | ||
Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) | Consumable | VWR | 47729-583 | 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth |
Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) | Consumable | Fisher | 05‐669‐22 | 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks |
0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue | Consumable | Fisher | SLGL 025 OS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow | Consumable | Fisher | SLGV 033 RS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ | Consumable | Fisher | 13‐678‐20C | 720ea/case; to mix PANTA with media mix |
Aerosol barrier tips 1000‐1300μl | Consumable | Fisher | 02‐707‐51 | 1000ea/pk; to dispense media into plate |
USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips | Consumable | Fisher | 1111‐0006 | 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks |