Summary

Der MODS Verfahren zur Diagnose von Tuberkulose und multiresistente Tuberkulose

Published: August 11, 2008
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Summary

Die mikroskopische Beobachtung-Drug-Anfälligkeit (MODS) Test ist ein low-cost, low-tech Werkzeug für High-Performance-Nachweis von Tuberkulose (TB) und multiresistenter Tuberkulose (MDRTB). Dieses Video beschreibt die MODS flüssigen Medien Kultur-Methode.

Abstract

Patienten mit aktiver Lungentuberkulose (TB) infiziert 10-15 anderen Personen pro Jahr, was die Diagnose einer aktiven TB unerlässlich, sowohl Heilung des Patienten und die Verhinderung neuer Infektionen. Darüber hinaus bedeutet die Entstehung von multiresistenten Tuberkulose (MDRTB), die Detektion von Resistenzen ist notwendig für die Ausbreitung von resistenten Stämmen. Die mikroskopische Beobachtung-Drug-Anfälligkeit (MODS) Test ist ein low-cost, low-tech Werkzeug für High-Performance-Nachweis von TB und MDRTB. Der MODS Test basiert auf drei Prinzipien: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) wächst schneller in flüssigen Medien als auf festen Medien 2) mikroskopische MTB Wachstum kann früher in flüssigen Medien als das Warten auf das makroskopische Aussehen der Kolonien auf festen Medien erkannt werden, und dass das Wachstum ist charakteristisch für MTB, so dass sie von atypischen Mykobakterien oder Pilz-oder Bakterienbefall 3) unterschieden werden die Medikamente Isoniazid und Rifampicin in den MODS Test kann aufgenommen werden, um für den gleichzeitigen direkten Nachweis von MDRTB ermöglichen, so dass kein Bedarf für Subkultur zu erfüllen eine indirekte Sensibilitätstest testen. Konkurrierende aktuelle Diagnostik zeichnen sich durch geringe Empfindlichkeit mit Sputum, lange Wartezeiten bis zur Diagnose mit festen Medien Kultur, prohibitiv hohen Kosten mit vorhandenen flüssigen Medien Kultur Methoden und die Notwendigkeit, Subkultur für indirekte Drogen Empfindlichkeitsprüfung zu MDRTB erkennen Sie behindert. Im Gegensatz dazu hat die nicht-proprietäre MODS-Methode eine hohe Empfindlichkeit für TB und MDRTB, ist eine relativ schnelle Kultur-Methode ermöglicht die gleichzeitige Medikament Empfindlichkeitsprüfung für MDRTB, und ist zugänglich mit beschränkten Ressourcen knapp 3 $ für den Test für TB und MDRTB.

Protocol

Stammlösungen Phosphatpuffer Lager Mix 950ml Natrium dibasischen Lösung (9.47g von Natriumdihydrogenphosphat in 1000ml destilliertem Wasser gelöst) mit 950ml Kaliumphosphat einbasischen Lösung (9.07g Kaliumphosphat einbasischen in 1000ml destilliertem Wasser gelöst) und rühren; zurückzuhalten 50ml jeder Lösung anpassen pH ggf. Der pH-Wert auf 6,8 ± 0,2: add Natriumdihydrogenphosphat-Lösung auf pH-Wert anzuheben, fügen Kaliumphosphat einbasischen Lösung für niedrige…

Discussion

Der MODS Test ist mit beschränkten Ressourcen angestrebt. Zum ersten Mal bringt MODS die Fähigkeit zur schnellen flüssigen Kultur Erkennung von Tuberkulose und multiresistenten Tuberkulose mit beschränkten Ressourcen knapp 3 $ pro Test. MODS ist ein nicht-proprietäres, iterative Methodik und die MODS-Community ist immer in Verbesserungen, die andere Labors haben es geschafft, interessiert.

Ein immer wiederkehrendes Problem ist die Biosicherheit von flüssigen Medien Kultur der Tuberkulose, weil Flüssigkeiten verschüttet oder …

Acknowledgements

Wir möchten Sean Fitzwater und Carmen Giannina Luna Colombo für die Tuberkulose-Wachstum Zeitraffer-Video-Segment zu bestätigen. Wir danken Marty Roper für ihre gründliche und sehr gutes Feedback während der Bearbeitung und Co-Autor der User Guide, von der die aktuelle Protokoll übernommen meist wörtlich wurde. Die Produktion dieses Video wurde von den NIH / Fogarty International Center finanziert http://www.fic.nih.gov/ David AJ Moore trug als Wellcome Trust Clinical Research Fellow in Tropenmedizin und Reader in Infectious Diseases am Imperial College London (Fellowship Auszeichnung Zahl 078067/Z/05). Mark F. Brady beigetragen als NIH / Fogarty International Center Research Fellow.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Refrigerator/ freezer Equipment     to store pre-prepared broth and antibiotic stocks
Vortex Equipment     to aid sputum decontamination
Centrifuge Equipment     for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; does not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed)
Incubator (37 degree C) Equipment     for culture; need not be CO2 enriched
Inverted light microscope Microscope     to read MODS plates
Autoclave Equipment     to sterilize media, PBS and used plates
Balance Equipment     to weigh isoniazid, rifampicin and NALC
Middlebrook 7H9 broth (Difco) Reagent Fisher DF0713-17-9 500gr/bottle; culture media base
Casitone (pancreatic digest casein) Reagent Fisher DF0259‐17‐9 500gr/bottle; culture media base
Glycerol (glycerin) lyophilized Reagent Sigma G‐33‐500 500ml/bottle; culture media base
PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) Reagent Fisher B4345114 6 bottles/pack; antibiotic media supplement
OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) Reagent Fisher B11886 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement
Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) Reagent Sigma D-2650 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock
Antibiotic stocks: isoniazid Reagent Sigma I-3377 50gr/bottle; direct susceptibility testing
Antibiotic stocks: rifampicin Reagent Sigma 99 R-3501 1gr/bottle; direct susceptibility testing
Sodium hydroxide (pellets) Reagent Sigma 221465 500gr/bottle; sputum decontamination
Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) Reagent Sigma S-4641 500gr/bottle; sputum decontamination
N-acetyl-L-cysteine Reagent Sigma A-7250 50gr/bottle; sputum decontamination
Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 Reagent Sigma P0662 500gr/bottle; sputum decontamination
Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 Reagent Sigma S0876 500gr/bottle; sputum decontamination
Sodium hypochlorite Reagent household bleach   to discard contaminated waste
15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) Consumable Fisher 14‐959‐49B 500ea/case; for sputum decontamination and concentration
24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) Consumable Fisher 08-772-1 50 plates/case; for culture and reading
Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) Consumable     for biosecurity to contain 24 well plate
Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) Consumable VWR 47729-583 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth
Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) Consumable Fisher 05‐669‐22 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks
0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue Consumable Fisher SLGL 025 OS 50 units/case; to filter antibiotic stocks
0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow Consumable Fisher SLGV 033 RS 50 units/case; to filter antibiotic stocks
Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ Consumable Fisher 13‐678‐20C 720ea/case; to mix PANTA with media mix
Aerosol barrier tips 1000‐1300μl Consumable Fisher 02‐707‐51 1000ea/pk; to dispense media into plate
USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips Consumable Fisher 1111‐0006 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks

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Cite This Article
Brady, M. F., Coronel, J., Gilman, R. H., Moore, D. A. The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. J. Vis. Exp. (18), e845, doi:10.3791/845 (2008).

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