Микроскопического наблюдения восприимчивости к лекарствам (MODS) анализа является низкая стоимость, высокие технологии инструмент для высокопроизводительных выявления туберкулеза (ТБ) и множественной лекарственной устойчивостью туберкулеза (MDRTB). Это видео описывает MODS жидких питательных сред методом.
Пациенты с активным туберкулезом легких (ТБ) заразить 10-15 других лиц в год, что делает диагностики активного туберкулеза важны как для лечения пациента и предотвращение новых случаев инфицирования. Кроме того, появление множественной лекарственной устойчивостью (MDRTB) означает, что для обнаружения лекарственной устойчивости является необходимым для предотвращения распространения лекарственно-устойчивых штаммов. Микроскопического наблюдения восприимчивости к лекарствам (MODS) анализа является низкая стоимость, высокие технологии инструмент для высокопроизводительных выявление туберкулеза и MDRTB. Анализ MODS основана на трех принципах: 1) микобактерии туберкулеза (МТБ) растет быстрее, в жидких средах, чем на твердой среде 2) микроскопического роста MTB могут быть обнаружены ранее в жидких средах, не дожидаясь появления макроскопических колоний на твердых средах, а также что рост характерно MTB, что позволяет ему следует отличать от атипичных микобактерий или грибкового или бактериального загрязнения 3) препараты изониазид и рифампицин могут быть включены в анализ MODS, чтобы обеспечить одновременное прямое обнаружение MDRTB, что исключает необходимость в субкультуру для выполнения косвенный тест восприимчивость препарата. Конкурирующие текущей диагностики сдерживается низкой чувствительности посредством исследования мокроты, длительные задержки, пока диагноз с твердой питательной среды, непомерно высокой стоимостью с существующими жидких питательных средах методами и нужно сделать субкультуру для косвенного исследования чувствительности для обнаружения наркотиков MDRTB. В отличие от неимущественных MODS метод обладает высокой чувствительностью к туберкулезу и MDRTB, является относительно быстрое культуры метод обеспечивает одновременное тестирование на чувствительность препарат для MDRTB, и доступна с ограниченными ресурсами чуть менее $ 3 для проверки на туберкулез и MDRTB.
Анализ MODS ориентирован на условиях ограниченных ресурсов. В первый раз, MODS приносит способность к быстрому обнаружению жидкости культуры туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью и туберкулеза с ограниченными ресурсами чуть менее $ 3 за тест. MODS является неимущественные, итерацио?…
Мы хотели бы выразить признательность Шон Фицуотер и Кармен Джаннина Луна Коломбо по туберкулезу роста покадровой видео сегменте. Мы благодарим Марти Ропер для ее тщательного и отличную обратную связь во время редактирования и совместного редактирования руководство пользователя, от которого текущего протокола было принято главным образом дословно. Производство этого видео был профинансирован NIH / Международный центр Фогарти http://www.fic.nih.gov/ Дэвид Мур AJ, вносимого в Wellcome Trust Клинические научный сотрудник в тропической медицины и лектор по инфекционным болезням из Имперского колледжа в Лондоне (стипендия награда число 078067/Z/05). Марк Ф. Брэди, вносимого в NIH / Фогарти Международный научный центр.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Refrigerator/ freezer | Equipment | to store pre-prepared broth and antibiotic stocks | ||
Vortex | Equipment | to aid sputum decontamination | ||
Centrifuge | Equipment | for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; does not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed) | ||
Incubator (37 degree C) | Equipment | for culture; need not be CO2 enriched | ||
Inverted light microscope | Microscope | to read MODS plates | ||
Autoclave | Equipment | to sterilize media, PBS and used plates | ||
Balance | Equipment | to weigh isoniazid, rifampicin and NALC | ||
Middlebrook 7H9 broth (Difco) | Reagent | Fisher | DF0713-17-9 | 500gr/bottle; culture media base |
Casitone (pancreatic digest casein) | Reagent | Fisher | DF0259‐17‐9 | 500gr/bottle; culture media base |
Glycerol (glycerin) lyophilized | Reagent | Sigma | G‐33‐500 | 500ml/bottle; culture media base |
PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) | Reagent | Fisher | B4345114 | 6 bottles/pack; antibiotic media supplement |
OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) | Reagent | Fisher | B11886 | 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement |
Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) | Reagent | Sigma | D-2650 | 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock |
Antibiotic stocks: isoniazid | Reagent | Sigma | I-3377 | 50gr/bottle; direct susceptibility testing |
Antibiotic stocks: rifampicin | Reagent | Sigma 99 | R-3501 | 1gr/bottle; direct susceptibility testing |
Sodium hydroxide (pellets) | Reagent | Sigma | 221465 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) | Reagent | Sigma | S-4641 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
N-acetyl-L-cysteine | Reagent | Sigma | A-7250 | 50gr/bottle; sputum decontamination |
Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 | Reagent | Sigma | P0662 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 | Reagent | Sigma | S0876 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium hypochlorite | Reagent | household bleach | to discard contaminated waste | |
15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) | Consumable | Fisher | 14‐959‐49B | 500ea/case; for sputum decontamination and concentration |
24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) | Consumable | Fisher | 08-772-1 | 50 plates/case; for culture and reading |
Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) | Consumable | for biosecurity to contain 24 well plate | ||
Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) | Consumable | VWR | 47729-583 | 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth |
Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) | Consumable | Fisher | 05‐669‐22 | 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks |
0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue | Consumable | Fisher | SLGL 025 OS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow | Consumable | Fisher | SLGV 033 RS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ | Consumable | Fisher | 13‐678‐20C | 720ea/case; to mix PANTA with media mix |
Aerosol barrier tips 1000‐1300μl | Consumable | Fisher | 02‐707‐51 | 1000ea/pk; to dispense media into plate |
USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips | Consumable | Fisher | 1111‐0006 | 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks |