Den mikroskopiska-observation narkotika känslighet (MODS)-analysen är en låg kostnad, låg-tech-verktyget för högpresterande upptäckt av tuberkulos (tbc) och multiresistent tuberkulos (MDRTB). Denna video beskriver MODS flytande mediekulturen metod.
Patienter med aktiv lungtuberkulos (tbc) smitta 10-15 andra personer per år, vilket gör att diagnostisera aktiv TBC viktigt att både bota patienten och förhindra nya infektioner. Dessutom innebär uppkomsten av multiresistent tuberkulos (MDRTB) som upptäckt av resistens är nödvändigt för att stoppa spridningen av resistenta stammar. Den mikroskopiska-observation narkotika känslighet (MODS)-analysen är en låg kostnad, låg-tech-verktyget för högpresterande detektering av TB och MDRTB. Försvarsministerierna analysen är baserad på tre principer: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) växer snabbare i flytande medier än på fasta medier 2) mikroskopiska MTB tillväxt kan upptäckas tidigare i flytande medier än att vänta på den makroskopiska utseende kolonier på fasta medier och att tillväxten är karakteristisk för MTB, så att den kan särskiljas från atypiska mykobakterier eller svamp-eller bakterieangrepp 3) droger isoniazid och rifampicin kan införlivas i MODS-analysen för att möjliggöra samtidig direkt detektion av MDRTB, undanröja behovet av subkulturen för att utföra en indirekt drog resistensbestämning. Konkurrerande nuvarande diagnostiken försvåras av låg känslighet med slem cellprov, långa väntetider till diagnos med fasta medier kultur, oöverkomliga kostnader med befintliga likvida mediekultur metoder, och behovet av att göra subkultur för indirekta drog resistensbestämning för att upptäcka MDRTB. Däremot har den generiska MODS metoden en hög känslighet för TBC och MDRTB, är en relativt snabb kultur-metoden, ger samtidig testning drog känslighet för MDRTB, och är tillgänglig för begränsade resurser inställningar på strax under $ 3 för testning för tuberkulos och MDRTB.
Försvarsministerierna analysen riktar sig till begränsade resurser inställningar. För första gången, ger MODS möjligheten för snabb flytande kultur upptäckt av tuberkulos och multiresistent tuberkulos till begränsade resurser inställningar på strax under $ 3 per test. MODS är en icke-patentskyddad, iterativ metod och MODS community är alltid intresserade av förbättringar som andra laboratorier har lyckats göra.
Ett återkommande bekymmer är biosäkerhet av flytande mediekulturen av tuberkulos eftersom vätska kan s…
Vi vill tacka för Sean Fitzwater och Carmen Giannina Luna Colombo för tuberkulos tillväxt tidsförlopp video segmentet. Vi tackar Marty Roper för hennes grundliga och bra feedback under redigering och medförfattare till användarguiden, som det nu gällande protokollet togs mestadels ordagrant. Produktionen av denna video har finansierats av NIH / Fogarty International Center http://www.fic.nih.gov/ David AJ Moore bidragit som en Wellcome Trust Clinical Research Fellow i tropisk medicin och docent i infektionssjukdomar vid Imperial College London (Fellowship utmärkelse nummer 078067/Z/05). Mark F. Brady bidragit som en NIH / Fogarty International Center Research Fellow.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Refrigerator/ freezer | Equipment | to store pre-prepared broth and antibiotic stocks | ||
Vortex | Equipment | to aid sputum decontamination | ||
Centrifuge | Equipment | for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; does not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed) | ||
Incubator (37 degree C) | Equipment | for culture; need not be CO2 enriched | ||
Inverted light microscope | Microscope | to read MODS plates | ||
Autoclave | Equipment | to sterilize media, PBS and used plates | ||
Balance | Equipment | to weigh isoniazid, rifampicin and NALC | ||
Middlebrook 7H9 broth (Difco) | Reagent | Fisher | DF0713-17-9 | 500gr/bottle; culture media base |
Casitone (pancreatic digest casein) | Reagent | Fisher | DF0259‐17‐9 | 500gr/bottle; culture media base |
Glycerol (glycerin) lyophilized | Reagent | Sigma | G‐33‐500 | 500ml/bottle; culture media base |
PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) | Reagent | Fisher | B4345114 | 6 bottles/pack; antibiotic media supplement |
OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) | Reagent | Fisher | B11886 | 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement |
Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) | Reagent | Sigma | D-2650 | 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock |
Antibiotic stocks: isoniazid | Reagent | Sigma | I-3377 | 50gr/bottle; direct susceptibility testing |
Antibiotic stocks: rifampicin | Reagent | Sigma 99 | R-3501 | 1gr/bottle; direct susceptibility testing |
Sodium hydroxide (pellets) | Reagent | Sigma | 221465 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) | Reagent | Sigma | S-4641 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
N-acetyl-L-cysteine | Reagent | Sigma | A-7250 | 50gr/bottle; sputum decontamination |
Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 | Reagent | Sigma | P0662 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 | Reagent | Sigma | S0876 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
Sodium hypochlorite | Reagent | household bleach | to discard contaminated waste | |
15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) | Consumable | Fisher | 14‐959‐49B | 500ea/case; for sputum decontamination and concentration |
24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) | Consumable | Fisher | 08-772-1 | 50 plates/case; for culture and reading |
Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) | Consumable | for biosecurity to contain 24 well plate | ||
Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) | Consumable | VWR | 47729-583 | 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth |
Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) | Consumable | Fisher | 05‐669‐22 | 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks |
0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue | Consumable | Fisher | SLGL 025 OS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow | Consumable | Fisher | SLGV 033 RS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ | Consumable | Fisher | 13‐678‐20C | 720ea/case; to mix PANTA with media mix |
Aerosol barrier tips 1000‐1300μl | Consumable | Fisher | 02‐707‐51 | 1000ea/pk; to dispense media into plate |
USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips | Consumable | Fisher | 1111‐0006 | 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks |