JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 3:27 dk • October 30th, 2025
Karbonsuz bir tampona eklenen floresan etiketli bir bakteri kültürü ile başlayın.
Bakterileri peletlemek ve süpernatanı atmak için santrifüjleyin.
Peleti, hafif bir deterjan içeren taze, karbonsuz bir tamponda yeniden süspanse edin.
Karbon kaynağının olmaması büyümeyi durdururken, deterjan topaklanmayı önler ve hücrelerin askıda kalmasını sağlar.
Bakteri süspansiyonunu bir şırıngaya yükleyin ve bir pompaya bağlayın.
Süspansiyonu, zemine gömülü tuzaklara sahip bir kanal içeren bir mikroakışkan çipin girişine enjekte edin.
Sıvıyı kanal çıkışından yavaşça çekin.
Sıvı geri çekildikçe, kılcal kuvvetler bakterileri çıkışa doğru yönlendirir.
Bu süreçte, tek bakteri hücreleri tuzaklara yerleşerek bakteri desenlenmesine neden olur.
Kanalı sürekli olarak önceden ısıtılmış, besin açısından zengin bir et suyu ile yıkayın.
Bakteriler büyümeye devam eder ve tuzakların içinde mikro koloniler oluşturur.
Hızlandırılmış görüntüler yakalamak ve kontrollü bir ortamda bakteri üremesini analiz etmek için floresan mikroskobu kullanın.
Bir mililitre MOPS ortamını bir santrifüj şişesine pipetleyin ve 10 mikrolitre 0.132 molar potasyum fosfat ekleyin.
Gece kültürünün 100 mikrolitresini santrifüj şişesine ayırın ve kültürü iki dakika boyunca 2.300 kez g'da santrifüjleyin. Peleti %0.015 Tween 20 ve %0.01 potasyum fosfat içeren bir mililitre taze MOPS ortamında yeniden süspanse etmek için süpernatanı yavaşça atın ve bakteri süspansiyonunu bir mililitrelik bir şırıngaya yükleyin. Şırıngayı ve boru bağlantısını sabitlemek için doğrudan boruya bir iğne sokun.
Şimdi şırıngayı şırınga pompasına monte edin ve süspansiyonu, süspansiyon şablon bölgesini tuzaklarla kaplayana kadar kanalın yukarı akış kısmında bulunan girişten mikroakışkan çipe enjekte edin. Bakteri süspansiyonunu geri çekmek ve mikroskop yazılımı aracılığıyla desenleme sürecini izlemek için şırınga pompasını dakikada 0,07 ila 0,2 mikrolitre akış hızına ayarlayın. Şablon hücrelerle modellendikten sonra, mikroakışkan kanalı hızlı bir şekilde boşaltmak için geri çekme akış hızını artırın ve daha önce en az 30 dakika boyunca gazdan arındırılmış ve 30 santigrat derecede önceden ısıtılmış taze LB ile yıkayın.
Şimdi kanalı nazikçe yıkamak için şırınga pompasını dakikada iki mikrolitre akış hızına ayarlayın. Kanal doldurulduktan sonra akış hızını tekrar artırın. İstenilen büyütme ve zaman aralığında büyüyen bakterilerin görüntülerini elde edin.
Bu makale, bir mikroakışkan çip kullanılarak bakteriyel hücrelerin desenlenmesine yönelik bir yöntemi açıklamaktadır. İşlem, bakteriyel bir süspansiyonun, kılcal kuvvetlerin tekil hücreleri büyüme gözlemi için tuzaklara yönlendirdiği bir kanala enjekte edilmesini içerir.
Mikroakışkan desenleme ve tek hücreli bakteriyel büyümenin floresan tabanlı izlemesi, sıkı kontrollü koşullar altında mikrobiyal davranışların sorgulanması için yüksek çözünürlüklü bir platform sağlar. Bu yaklaşım, bireysel hücrelerin hassas izolasyonuna olanak tanıyarak, anti-infektif Ar-Ge'de erken keşif ve hedef validasyonu için kritik olan sağlam hipotez testlerini ve kantitatif analizleri destekler. Yöntemin tekrarlanabilirliği ve ölçeklenebilirliği, onu portföy genelinde tarama ve mekanik risk azaltma çalışmaları için yeniden kullanılabilir bir varlık konumuna getirir.
Bu mikroakışkan ve floresan tabanlı iş akışı; erken keşif, deney geliştirme ve preklinik model optimizasyonu arayüzlerini entegre eder.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026