Tek Hücreli Bakteri Büyümesinin Mikroakışkan Desenleme ve Floresan Tabanlı İzlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:27 dk. • October 30th, 2025
Karbonsuz bir tampona eklenen floresan etiketli bir bakteri kültürü ile başlayın.
Bakterileri peletlemek ve süpernatanı atmak için santrifüjleyin.
Peleti, hafif bir deterjan içeren taze, karbonsuz bir tamponda yeniden süspanse edin.
Karbon kaynağının olmaması büyümeyi durdururken, deterjan topaklanmayı önler ve hücrelerin askıda kalmasını sağlar.
Bakteri süspansiyonunu bir şırıngaya yükleyin ve bir pompaya bağlayın.
Süspansiyonu, zemine gömülü tuzaklara sahip bir kanal içeren bir mikroakışkan çipin girişine enjekte edin.
Sıvıyı kanal çıkışından yavaşça çekin.
Sıvı geri çekildikçe, kılcal kuvvetler bakterileri çıkışa doğru yönlendirir.
Bu süreçte, tek bakteri hücreleri tuzaklara yerleşerek bakteri desenlenmesine neden olur.
Kanalı sürekli olarak önceden ısıtılmış, besin açısından zengin bir et suyu ile yıkayın.
Bakteriler büyümeye devam eder ve tuzakların içinde mikro koloniler oluşturur.
Hızlandırılmış görüntüler yakalamak ve kontrollü bir ortamda bakteri üremesini analiz etmek için floresan mikroskobu kullanın.
Bir mililitre MOPS ortamını bir santrifüj şişesine pipetleyin ve 10 mikrolitre 0.132 molar potasyum fosfat ekleyin.
Gece kültürünün 100 mikrolitresini santrifüj şişesine ayırın ve kültü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin