Ozmotik Kaçınma Testi Kullanarak Transgenik Solucanlarda Kemokaçınma Davranışını İnceleyin

Nematodlarda, kemosensoriyel - ASH - nöronları, kimyasal kovucuların neden olduğu çevrelerindeki ozmolarite değişikliklerini algılayabilir. Buna karşılık, bu solucanlar kovuculardan uzaklaşır ve kemoatörden kaçınma davranışına yol açar.

ASH nöronları içindeki anormal protein agregasyonu, kemoatörden kaçınma davranış değişikliklerine yol açabilir.

Solucanlarda ozmotik kaçınma davranışını incelemek için, ASH nöronlarındaki protein agregatlarına sahip transgenik nematod larvaları ile başlayın. Nematodları, protein agregasyonunu azaltan ve bazı solucanlarda kaçınma davranışını geri kazandıran biyoaktif bileşiklerle tedavi edin.

İşlem görmüş solucanları, larva aşamasında tutmak için önceden hazırlanmış, gıda içermeyen bir ortam plakasına aktarın. Plakanın merkezinde, yüksek ozmotik kuvvette bir kimyasal olan gliserol bulunur ve plakayı normal ve tuzak bölgesi olmak üzere iki bölgeye ayırmak için ozmotik bir bariyer oluşturur.

Bariyeri geçen solucanların hareketini durdurmak için tuzak bölgesini anestezi ile destekleyin. Tüm solucanları çekmek için tuzak bölgesine bir damla bütandion ekleyin ve onlara doğru hareket etmelerini sağlayın.

Protein agregasyonuna sahip solucanlar ozmotik stresi algılayamaz, bariyer çizgisini geçemez ve tuzak bölgesinde anestezi alamaz. Restore edilmiş kemokaçınma davranışına sahip solucanlar, gliserolden uzaklaşır ve normal bölge içinde kalır.

Normal bölgedeki solucan sayısı, biyoaktif bileşiklerin kemokaçınma davranışını geri kazanmadaki etkinliği ile ilişkilidir.

Ozmotik kaçınma testi için, ortada 8 molar gliserol çizgisi oluşturarak gıda içermeyen bir NGM plakasını normal ve tuzak bölgelerine bölün. Ardından, gliserol bariyerinden tuzak bölgesine geçen nematodları felç etmek için gliserol hattından yaklaşık 1 santimetre uzağa 200 milimolar bir sodyum azid hattı yayın.

Her biri yaklaşık 200 nematodları, her grup için üç kopya plakanın normal bölgesine aktarın. Ardından, nematodları çekmek için tuzak bölgesine %1'lik bir damla bütandion ekleyin. Petri kabının kapağını hemen kapatın ve 23 santigrat derecede 90 dakika inkübe edin.

Mikroskop altında her iki bölgedeki nematod sayısını puanlayın ve kaçınma indeksini hesaplayın.