İmmünofloresan Kullanarak Fare Beynindeki Bir Presinaptik Proteinin Dağılımının Ölçülmesi

Doku gömülü bir ortama gömülü kimyasal olarak sabitlenmiş bir fare beyni dilimini alın.

Ortamı çıkarmak için dilimi tamponla yıkayın.

Membranlara nüfuz eden ve spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke eden bir çözelti ekleyin.

Çözeltiyi çıkarın.

Nöronal sinaptik proteinleri görselleştirmek için, dilimi birincil antikorlarla inkübe edin.

Bu antikorlar, belirli beyin bölgelerinin sinapslarında eksprese edilen bir presinaptik proteini ve referans belirteç olarak her yerde eksprese edilen bir sinaptik proteini hedefler.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.

Primer antikorları hedef alan florofor işaretli ikincil antikorları tanıtın.

Bağlanmamış ikincil antikorları çıkarmak için tampon ile yıkayın.

Çekirdekleri DNA bağlayıcı bir boya ile boyayın.

Tampon ile yıkayın ve dilimi uygun bir montaj ortamı kullanarak monte edin.

Dilimi konfokal bir mikroskop altında görselleştirin.

Hedef proteinin farklı beyin bölgelerindeki dağılımını analiz etmek için hedef proteinin ortalama floresan yoğunluk oranlarını ve referans işaretleyiciyi hesaplayın.

Dilimleri immün boyama için hazırlamak için, PB çözeltisini beyin dilimlerini çizmeden bir kuyudan çıkarmak için plastik bir pipet