Name: Canlı Hücre Görüntüleme Bacillus subtilis Ve Streptococcus pneumoniae Otomatik Zaman atlamalı Mikroskopi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Öğrenin, Bacillus subtilis ve Streptococcus pneumoniae hücrelerinde otomatik zaman atlamalı floresan mikroskopi ile canlı bakteri davranışlarını ve protein dinamiklerini nasıl görüntüleyebilirsiniz.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

İş JWV grup AB Marie-Curie Reintegration Bursu, Sysmo2 Grant (NWO-ALW/ERASysBio), Horizon hibe (ZonMW) ve Veni dostluk (NWO-ALW) tarafından desteklenmektedir. OPK grubu birkaç STW hibe (NWO), SYSMO1 (IGdeJ) ve SYSMO2 hibe, bir ESF Eurocores SynBio hibe (SynMod) ve Endüstriyel Fermantasyon ve En İyi Gıda ve Beslenme için Enstitüsü Genomik Kluyver Merkezi tarafından desteklenmektedir.

<ol><li>Veening, J. W., Smits, W. K., Kuipers, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bistability%2C+epigenetics%2C+and+bet-hedging+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bistability, epigenetics, and bet-hedging in bacteria.</a> Annu. Rev Microbiol. 62, 193-193 (2008).</li>
<li>Dubnau, D., Losick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bistability+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bistability in bacteria.</a> Mol Microbiol. 61, 564-564 (2006).</li>
<li>Locke, J. C., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+movies+to+analyse+gene+circuit+dynamics+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Using movies to analyse gene circuit dynamics in single cells.</a> Nat. Rev. Microbiol. 7 (5), 383-383 (2009).</li>
<li>Veening, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bet-hedging+and+epigenetic+inheritance+in+bacterial+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Bet-hedging and epigenetic inheritance in bacterial cell development.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105 (11), 4393-4393 (2008).</li>
<li>de Jong, I. G., Veening, J. W., Kuipers, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+phosphorelay+gene+expression+as+a+source+of+heterogeneity+in+Bacillus+subtilis+spore+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Heterochronic phosphorelay gene expression as a source of heterogeneity in Bacillus subtilis spore formation.</a> J. Bacteriol. 192 (8), 2053-2053 (2010).</li>
<li>Veening, J. W., Murray, H., Errington, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mechanism+for+cell+cycle+regulation+of+sporulation+initiation+in+Bacillus+subtilis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A mechanism for cell cycle regulation of sporulation initiation in Bacillus subtilis.</a> Genes Dev. 23 (16), 1959-1959 (2009).</li>
<li>Eberhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+localization+of+choline-utilization+proteins+in+Streptococcus+pneumoniae+using+novel+fluorescent+reporter+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Cellular localization of choline-utilization proteins in Streptococcus pneumoniae using novel fluorescent reporter systems.</a> Mol Microbiol. 74 (2), 395-395 (2009).</li>
<li>Vasantha, N., Freese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme+changes+during+Bacillus+subtilis+sporulation+caused+by+deprivation+of+guanine+nucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Enzyme changes during Bacillus subtilis sporulation caused by deprivation of guanine nucleotides.</a> J Bacteriol. 144 (3), 1119-1119 (1980).</li>
<li>Stewart, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+death+in+an+organism+that+reproduces+by+morphologically+symmetric+division%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+Biol%22%5BJournal%5D)">Aging and death in an organism that reproduces by morphologically symmetric division.</a> PLoS. Biol. 3, 45-45 (2005).</li>
<li>Rosenfeld, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+regulation+at+the+single-cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene regulation at the single-cell level.</a> Science. 307 (5717), 1962-1962 (2005).</li>
<li>Guberman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PSICIC%3A+noise+and+asymmetry+in+bacterial+division+revealed+by+computational+image+analysis+at+sub-pixel+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+Comput.+Biol%22%5BJournal%5D)">PSICIC: noise and asymmetry in bacterial division revealed by computational image analysis at sub-pixel resolution.</a> PLoS. Comput. Biol. 4 (11), 1000233-1000233 (2008).</li>
<li>Montero, L. lopis P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+flow+of+genetic+information+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the flow of genetic information in bacteria.</a> Nature. 466, 77-77 (2010).</li>
<li>Avery, O. T., Macleod, C. M., McCarty, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+chemical+nature+of+the+substance+inducing+transformation+of+pneumococcal+types%3A+Induction+of+transformation+by+a+desoxyribonucleic+acid+fraction+isolated+from+pneumococcus+type+III%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types: Induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III.</a> J Exp. Med. 79, 137-137 (1944).</li>
<li>Hoskins, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+of+the+bacterium+Streptococcus+pneumoniae+strain+R6%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genome of the bacterium Streptococcus pneumoniae strain R6.</a> J Bacteriol. 183, 5709-5709 (2001).</li>
<li>Martin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+recA+gene+of+Streptococcus+pneumoniae+is+part+of+a+competence-induced+operon+and+controls+lysogenic+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The recA gene of Streptococcus pneumoniae is part of a competence-induced operon and controls lysogenic induction.</a> Mol Microbiol. 15, 367-367 (1995).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

, Pek çok diğer tek hücreli tekniklere aksine, burada açıklanan geçen zaman floresan mikroskopi yöntemi atalarının, onun davranış ve bölünme olayları ile ilgili belirli bir hücre tarihini takip kullanılabilir. Floresan etiketli hedef rehberleri veya protein ile birlikte, belirli gelişim süreçleri etkinleştirme süresi ve protein yerelleştirme yanı sıra protein dinamikleri bakteriyel gelişimi sırasında izlenebilir takip edilebilir. Yukarıda belirtildiği gibi, farklı bakteri türleri üzerinde yoğunlaşan çalışmalar, belirli bir bakteri gereklerine göre büyüme koşullarına adapte tarafından yapılabilir. Karşılaştığımız sınırlamalar büyüme koşulları ve örneklem büyüklüğü ile ilgili. Kapalı bir ortam olması nedeniyle, orta koşulları, deneme sırasında değiştirilecek. Ayrıca, deney başına dört suşlarının maksimum verimli bir şekilde takip edilebilir. Bir kaç kritik adımlar göz önüne alındığında, tek bir hücrenin analiz yöntemi, burada açıklanan herhangi bir otomatik mikroskop kullanarak kolayca uygulanabilir. Aşağıda, bu kritik adımların bir bakış verilecektir. Ayrıntılı bilgi ana metin Genel hazırlık: deney öncesinde belirli bir bakteri için gerekli olan otomatik odaklama ayarlarını kontrol etmek akıllıca olacaktır. Aynı şekilde, eğer mümkünse yaklaşık floresan görünüm için en iyi ayarları, önceden belirlenmiş olmalıdır. Ayrıca, hazırlanmış bir zaman çizgisi izleyen zaman içinde kullanıma hazır tüm malzeme (öncesi ısınma, mikroskop odasının, mikroskop ayarları programlama, hücreler istenilen büyüme aşamasında önce bir saat slayt hazırlama, bkz Şekil 1) yardımcı olur B. Büyüme TLM ve CDM subtilis: TLM ve CDM kimyasal açlık medya tanımlanan hangi B. subtilis sadece yavaş yavaş büyür. Hücreleri medya yetiştirilen zaman dilimi belirli bir gerginlik bağlı olarak uzun süreli olabilir. Birbirlerine kazık yavaş büyüme hücreleri engeller mikroskop numunesinin hazırlanması: gen çerçeve, cam slayt ve kapak kayma arasında hava kabarcıkları agaroz tabanlı orta geniş kurumasını önlemek için önlenebilir. Aynı orta / kapak kayma arayüzü için de geçerlidir. Bu hücrelerin yeteri kadar kurumaya bırakın, yüzme ve / veya çok katmanlı büyümesini önlemek için çok önemlidir Time-lapse floresan mikroskopi: Ön ısınma slayt çevre odasının yanı sıra, önemli otofokus sorunları önlemek için çok önemlidir . Bu deney sırasında (örnek yeterince kurutulmuş) alan ve odak kalmak için en yüksek şansı beri Hücreler, bir agar ped ortasında seçili olmalıdır. Deneyler başına 10 yerde maksimum hala düzgün çalışır. Seçildikten sonra ilk hücrenin sadece ilgi odağı ayarlamak için (ayrıntılar için metne bakınız) yazılımını kullanabilirsiniz. Hücreler, ilk saatlerde 30 dakika aralıklarla deney Analiz hala odak olup olmadığını kontrol edin: Bu orta arka plan floresan kanallarda benzer değerlere sahip olup olmadığını önce genişletilmiş analiz prosedürleri kontrol etmek için önemlidir. Sorun Giderme analiz etmek için film zor veya imkansız hale Küçük toz partikülleri, orta bileşenler, kirli lensler veya küçük agaroz kümeleri, yerel olarak artan floresan katkıda bulunabilir: hücreler birbirinin üstüne büyürse, bu da lamel olduğunu gösteriyor olabilir çok erken ya da orta microcolony mono tabakaları büyüme için uygun değildir bağlı. Mutlu slayt diğer hücrelere bölmek ise ilgi hücreler sürekli ölen pozisyonda UV filtre koymak olmadığını kontrol etmek isteyebilirsiniz. Aynı zamanda uzun deneyler sırasında maruz kalma süresi ya da ışık yoğunluğunu azaltmak için yardımcı olabilir.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Gene Kare </td><td> ABgene </td><td> AB-0578 </td><td> 1.7 x 2.8 cm </td></tr><tr><td> yüksek çözünürlüklü düşük erime agaroz </td><td> Sigma </td><td> A4718 </td><td></td></tr><tr><td> büyük kapak kayma </td><td> birkaç </td><td></td><td> 24 x 50 mm </td></tr><tr><td> istenirse, membran boya, örneğin FM 5-95 </td><td> Invitrogen </td><td> T23360 </td><td> diğer membran boyalar da mevcuttur: <a href="http://probes.invitrogen.com/media/pis/mp34653.pdf">http://probes.invitrogen.com/media/pis/mp34653.pdf</a> </td></tr><tr><td> Zaman atlamalı mikroskop çevre odasına </td><td> birkaç </td><td></td><td> bizim cihaz için ilgili bölümlerde ayrıntıları görmek </td></tr></tbody></table>

canlı hücre görüntüleme bacillus subtilis ve streptococcus pneumoniae otomatik zaman atlamalı mikroskopi

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Son birkaç yılda bilim adamları mikrobiyal nüfusa dayalı deneylerden elde edilen ortalama veriler tek hücrelerinin davranış, durum veya fenotip temsilcisi olmadığı giderek daha duyarlı hale geldi. Bu yeni anlayış, tek bir hücre çalışmaları sayısı (son değerlendirmeleri için 1,2,3 bakın) sürekli artıyor . Ancak, birçok uygulanan tek bir hücre teknikleri, belirli bir zaman içinde tek bir hücrenin (örneğin, flow sitometri veya standart mikroskopi) gelişimini ve davranışlarını izlemek izin vermez. Burada, biz, takip eden ve kayıt (floresan), Bacillus subtilis ve Streptococcus pneumoniae birçok nesiller için büyüme ve bölünme yoluyla bireysel bakteri hücrelerinin sağlayan birkaç son çalışmalar 4, 5, 6, 7, kullanılan mikroskop yöntemi ayrıntılı bir açıklama sağlar. Ortaya çıkan film, tek bir ortak atadan kökenli bir nüfus içinde tek bir hücrenin geçmişi geri izleme filogenetik soy ağaçları oluşturmak için kullanılabilir. Bu zaman atlamalı floresan mikroskopi yöntemi sadece tek tek hücrelerin büyüme, bölünme ve farklılaşma araştırmak için değil, aynı zamanda hücre geçmişi ve soy spesifik hücresel davranışı üzerinde etkisini analiz etmek için kullanılabilir. Ayrıca, ideal zaman atlamalı mikroskopi, bakteri hücre döngüsü sırasında, gen ekspresyonu dinamikleri ve protein lokalizasyonu incelemek için uygundur. Bu yöntem, bakteri hücrelerinin hazırlamak ve bir microcolony tek hücre akıbet etkinleştirmek için mikroskop lamı inşa nasıl açıklar. Kısacası, tek hücre, büyür ve bir sıcaklık kontrollü çevre oda içinde bir floresan mikroskop altında bölmek agaroz ile desteklenmiş büyüme orta oluşan bir yarı-katı yüzey fark vardır. Görüntüler belirli aralıklarla yakalanır ve daha sonra, açık kaynak yazılımı ImageJ kullanılarak analiz edilmektedir.

Bu protokol, otomatik floresan zaman atlamalı mikroskopi kullanılarak zaman farklı bakteriler tek hücre davranışlarını izlemek için bir adım-adım yordam sağlar. Ayrıca, biz nasıl mikroskobu görüntüleri analiz etmek için yönergeler sağlar.

Canlı Hücre Görüntüleme Bacillus subtilis Ve Streptococcus pneumoniae Otomatik Zaman atlamalı Mikroskopi

Son birkaç yıl içinde bilim insanları, mikrobiyal popülasyon tabanlı deneylerden elde edilen ortalama verilerin ... olmadığının giderek daha fazla farkına varmışlardır.

Bu prosedürün genel amacı, hücre geçmişinin ve soy ağacının bakterilerin hücresel gelişimi üzerindeki etkisini inceleyebilmek için, canlı hücrelerin büyüme ve bölünme süreçlerini floresan mikroskobu ile görüntülemektir. Bu işlem, öncelikle hücrelerin nispeten yüksek besin konsantrasyonuna sahip sıvı besiyerinden sıvı açlık besiyerine aktarılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, bakteriyel hücrelerin bir mikro koloni oluşturarak büyüyeceği bir mikroskop lamı hazırlanır.Monotabaka hazırlanır. Ardından, zaman ayarlı (time-lapse) floresan mikroskopi videosu kaydedilir. Son olarak, video işlenir ve veriler analiz edilir.Nihayetinde, zaman ayarlı floresan mikroskopi aracılığıyla tek bir bakteriyel hücrenin gelişimi gösteren sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniğin, akış sitometrisi ve standart mikroskopi gibi mevcut tekniklere göre temel avantajı; protein dinamiklerinin, hücresel davranışın ve tekil hücrelerin gelişimin zaman içinde izlenmesine olanak tanımasıdır. Prosedür, laboratuvarımdan doktora öğrencisi Cone tarafından gösterilecektir. B. subtilis hazırlamak için, -80 °C'deki stoklardan hücreleri, gerekirse antibiyotiklerle desteklenmiş 10 mL zaman ayarlı mikroskopi veya TLM besiyerine, steril çalkalama balonları içerisinde inoküle edin. Hücreleri bir gece boyunca 30 °C'de ve 225 RPM'de steril bir çalkalama balonunda büyütün. Ertesi sabah, hücreleri önceden ısıtılmış, antibiyotiksiz, kimyasal olarak tanımlanmış besiyerine veya CDM'ye 1:10 oranında aşılayın. B. subtilis hücrelerini, yaklaşık dört saat süren orta eksponansiyel faza kadar büyütün. Kültürün absorbansını 600 nm'de ölçün ve hücreleri yaklaşık 0,035 A$_{600}$ değerine seyreltin.CDM kullanılarak. Bu OD, hücrelerin aralarında uygun boşluklar olacak şekilde tek tek mikroskop lamına damlatılmasını ve böylece zaman ayarlı (time-lapse) mikroskobinin gerçekleştirilmesini sağlar. Hücreler mid-eksponansiyel büyüme evresine ulaşmadan bir saat önce.İki cam lamı %70 ethanol ve su ile temizleyerek mikroskop lamını hazırlayın. Gen çerçevesinin plastik kapaklarından birini, çerçevenin diğer tarafındaki plastik kapağın yerinden çıkmamasına dikkat ederek çıkarın. Gen çerçevesini, önce bir kenarını yapıştırıp ardından geri kalan kısmını bir tırnak yardımıyla yönlendirerek cam lamlardan birinin ortasına sabitleyin.150 miligram yüksek çözünürlüklü düşük erime noktalı agarozun çözünmesi için mikrodalga fırın kullanın. Arka plan floresanını önlemek için agarozun 10 mililitre CDM içerisinde tamamen çözündüğünden emin olun. Isıtılmış agaroz CDM'den 500 mikrolitreyi, kenarlar da dahil olmak üzere tüm alanın tamamen kaplandığından emin olarak gen çerçevesinin ortasına pipetleyin.Agarozun aşırı kurumasını önlemek için hızlı çalışın. Hava kabarcıklarını önlemeye çalışarak, ikinci lamı agaroz CDM ile doldurulmuş gen çerçevesinin üzerine yerleştirin. Agarozun yeterince katılaşması için sandviçi 45 dakika boyunca 4 °C'de yatay konumda bekletin.Agar donduktan sonra, üstteki camı dikkatlice kaydırarak çıkarın. Bakterilerin büyüyeceği yaklaşık beş milimetre genişliğinde agar şeritleri kesmek için bir jilet kullanın. Her lamda, her iki yanından yaklaşık dört milimetrelik boşluklarla ayrılmış en fazla üç şerit kullanılabilir.Bu boşluklar, Blu büyümesi için temel olan havayı sağlayacaktır. Yapışkan yüzeyi açığa çıkarmak için plastik örtülerin ikincisini ve sonuncusunu gen çerçevesinden dikkatlice kaldırın. Agros pedin üst kısmından başlayarak, pede dokunmadan, yaklaşık 2.5 µL sıvı içindeki tek hücreleri katı ortama yükleyin.Pipet ucuyla, lamı yukarı ve aşağı eğerek besiyerinin eşit şekilde yayılmasını sağlayın. Lamelini tamamen yapıştırmak için gen çerçevesinin üzerine temiz bir mikroskop kapatıcı yerleştirin. Hücreler yüklendikten sonra basınç uygulamak için bir tırnak kullanın.Hücrelerin yüzeyde kaymasını ve çok katmanlı büyümesini önlemek için sıvının yeterince kurumasını beklemek kritik önem taşır. Ancak, hücreler çok uzun süre kurutulursa, mikro kolon tek tabakası oluşturma aşamasında büyüme sorunları yaşayacaklardır. Bu nedenle, lamların kurutulması için gereken süre deneye bağlıdır ve sabit bir ölçüyle belirlenemez.Ve sonuç olarak, kişi elbette buna karşı bir aşinalık kazanmalıdır. Zaman atlamalı (time-lapse) deneyin ilk saatlerinde otomatik odaklama sorunlarını önlemek için, zaman atlamalı mikroskobiye hazırlık amacıyla lamı 30 °C'de bir saat boyunca ön ısıtmaya tabi tutun. Çevresel odağı en az iki saat ön ısıtın. Deneye başlamadan önce, deneysel düzeneğinize uygun objektif filtrelerini ve dikroik aynayı seçin.Uzun süreli deneyler için, ışık kaynağı ile numune arasına bir UV filtresi yerleştirildiğinden emin olun. Ayrıca, maruziyeti en aza indirmek için mümkünse nötr yoğunluk filtreleri kullanarak uyarım ışığının bir kısmını engelleyin. Deneyi, spesifik deneysel düzeneğe göre programlayın.Asıl deneyden önce, belirli konstrüktler için gereken ışık miktarının yanı sıra diğer time-lapse mikroskoplar veya bakteriler için otomatik odaklama ayarlarının belirlenmesi faydalıdır. Daha kısa pozlama süreleri ve daha düşük eksitasyon ışığı seviyeleri, ağarmayı ve fototoksisiteyi en aza indirecektir. Otomatik odaklama fonksiyonu için mikroskobik ışık kullanın. Son olarak, hazırlanan lamı mikroskobun önceden ısıtılmış çevresel haznesine yerleştirin ve tek hücrelerin 30 °C'de bir mikro koloni tek tabakasına dönüşümünü izleyin.Başarılı bir zaman ayarlı floresan deneyi, görüş alanı içerisinde tamamen yer alan bir mikro koloni monotabakası oluşturacaktır. Bu videodaki deneyin sonunda, solda parlak alan ve sağda floresans görülebilmektedir.Burada, bazı hücrelerin birbirinin üzerine büyüdüğü ve bu durumun hem geçmişlerini doğru bir şekilde takip etmeyi hem de floresan seviyelerini doğru ölçmeyi zorlaştırdığı bir B Subtles mikro kolonisi örneği görülmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, zaman ayarlı (time-lapse) mikroskopi için mikroskobik bir örneğin nasıl başarıyla hazırlanacağı ve zaman ayarlı floresan mikroskopinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. BACE hücreleri ile deney yapınız.

live-cell-imaging-bacillus-subtilis-streptococcus-pneumoniae-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Hücreli Davranış kaydetme Myxococcus xanthus</emZaman atlamalı Microcinematography kullanarak> Biyofilmler

Bu makale bakteriyofaj lambda, enfeksiyon bir floresan etiketli versiyonu hazırlamak için prosedürü...

Hücre-kaderi ardından<em&gt; E. coli</em&gt; Faj Lambda tarafından Enfeksiyon Sonrası

Kaynak: Schlimpert, S. ve ark. Mikroakışkan Bir Cihaz Kullanılarak Tüm S. venezuelae Yaşam Döngüsünün Floresan Hızlandırılmış Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, çimlenmeyi, hif büyümesini ve sporlanmayı gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için mikroakışkan bir cihaz kullanarak Streptomyces venezuelae bakterisinin tüm yaşam döngüsünün floresan hızlandırılmış görüntülemesini göstermektedir.

Streptomyces venezuelae Yaşam Döngüsünün Floresan Hızlandırılmış Görüntülemesi

Kaynak: Makowski, Ł. ve diğerleri. Bakteriyel Avcı Bdellovibrio bacteriovorus'un yaşam döngüsünün Zaman Geçişli Flüoresans Mikroskopisi kullanılarak canlı hücre görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, Bdellovibrio bacteriovorus'un immobilize edilmiş E. coli'yi agaroz pedinin altında avladığı zaman geçişli floresan görüntülemeyi göstererek, bakteriyel predasyon ve konak-patojen etkileşimlerini incelemek için hücre içi çoğaltma ve soyut salınımının gerçek zamanlı görselleştirilmesini sağlıyor.

E. coli üzerinde Bdellovibrio bacteriovorus avlanmasının Canlı Hücre Zaman Geçişli Görüntülemesi

Biz bakteriyel FtsZ-ring yapısal organizasyonu, hücre bölünmesi için gerekli bir aparat soruşturma için görüntüleme yöntemi bir süper-çözünürlük tarif. Bu yöntem, fotoaktive yerelleştirme mikroskobu (PALM) kantitatif görüntü analizi dayanır ve diğer bakteri sitoskeletal proteinleri ile uygulanabilir.

Bakteriyel Bölümü Makine Super çözünürlüklü Görüntüleme

Alphaherpes virüs enfeksiyonlarının Canlı hücre görüntüleme yönelik ulaşım ve hücreler arası yayılma dinamik olayların analizi sağlar. Burada, birincil nöronların enfeksiyon sırasında viral meclislerinin görselleştirme kolaylaştırmak için floresan füzyon proteinleri ifade rekombinant viral suşlar kullanmak yöntemleri sunuyoruz.

Alphaherpes Virüs İleriye Taşıma ve Değişken Canlı Hücre Görüntüleme

Bakterilerde temel süreçleri işlevini anlamak zordur. Floresans mikroskobu hedef özel boyalar ile mikrobiyal hücre büyüme ve hücre döngüsü ilerleme içine anahtar anlayışlar sağlayabilir. Burada, Agrobacterium tumefaciens yöntemleri canlı hücre görüntüleme için gerekli işlemleri karakterizasyonu için vurgulamak için bir model bakteri kullanılmaktadır.

Temel işlemler sırasında mikrobiyal hücre büyümesini gözlemlemek için hücre Floresans mikroskobu canlı

Bu makalede, protein subselliyerizasyon dinamiklerini araştırmak ve Bacillus subtilis ve Staphylococcus aureus'ta yüksek çözünürlüklü floresan mikroskobu kullanarak morfolojik değişiklikleri izlemek için adım adım kılavuz verilmektedir.

Bakterilerde Hücre Altı Protein Lokalizasyonu ve Hücre Morfolojisi Değişikliklerini Araştırmak Için Canlı Hücre Floresan Mikroskobu

Bakteri hücrelerinin görüntülenmesi, büyük makromoleküler makinelerin işlevini belirleyen statik ve dinamik süreçleri tanımlamaya odaklanmış yeni ortaya çıkan bir sistem biyolojisi yaklaşımıdır. Burada Lejyonella pnömophila tip IV salgı sistemi mimarisi ve fonksiyonlarını incelemek için kantitatif canlı hücre görüntüleme ve kriyo-elektron tomografisi entegrasyonu kullanılmaktadır.

Legionella pnömophila Dot/Icm Salgı Sisteminin Spatiotemporal Özelliklerini Çözmek İçin Canlı Hücre Görüntüleme ve Kriyo-Elektron Tomografisi Uygulama

Burada sunulan bir agarose ped ve hücre görüntüleme yemekleri ile birlikte zaman atlamalı floresan mikroskobu kullanarak yırtıcı bakteri Bdellovibrio bakteriovorus tam yaşam döngüsünün izlenmesi açıklayan bir protokoldür.

Zaman Atlamalı Floresan Mikroskopi kullanarak Bakteriyel Predator Bdellovibrio bakteriovorus Yaşam Döngüsünün Canlı Hücre Görüntüleme

Bu yazıda, Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus için antibiyotik sağkalımını değerlendirmek için kapsamlı bir protokol sunuyoruz, plazmitleri P. aeruginosa ve S. aureus'a dönüştürerek raportör suşlar oluşturmak ve persistanlar gibi fenotipik varyantları hızlandırılmış epifloresan mikroskobu ile görselleştirmek için.

Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus Heterojen Fenotiplerinin Hızlandırılmış Epifloresan Mikroskobu Görüntülemesi

Öğrenin, Bacillus subtilis ve Streptococcus pneumoniae hücrelerinde otomatik zaman atlamalı floresan mikroskopi ile canlı bakteri davranışlarını ve protein dinamiklerini nasıl görüntüleyebilirsiniz.

Canlı Hücre Görüntüleme Bacillus subtilis Ve Streptococcus pneumoniae Otomatik Zaman atlamalı Mikroskopi

Daha fazla video keşfet