Name: Bir Çekçek tabanlı Meclisi Yöntemi ile Biomembrane Mikroarrayler oluşumu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-08T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Öğrenin, silika boncukları lipid çift katmanı ile kaplayarak biyomembran mikrodizileri oluşturmayı. Bu yöntem, toksin-lipid etkileşimlerinin bağlanma sabitlerini belirlemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01 GM092993) den SHO hibe tarafından desteklenen, Ulusal Bilim Vakfı (NSF KARİYER Ödülü ve DBI 0.964.216), Donanma Araştırma Bürosu (ONR) Genç Araştırmacı Programı ve Biyoteknoloji Minnesota Ortaklık Ödülü ve Tıbbi Genomik. Cihaz fabrikasyon Ulusal Nanoteknoloji Altyapı Ağı aracılığıyla NSF destek alan Minnesota Üniversitesi NANO Merkezi (NFC), gerçekleştirildi. Bu çalışma aynı zamanda Sağlık (NS048357, R21 NS073684), Ulusal Multipl Skleroz Derneği (CA1060A11), Applebaum, Hilton, Peterson ve Sanford Vakıflar ve McNeilus ailenin National Institutes MR için hibe tarafından desteklenmiştir. Yazarlar taramalı elektron mikroskobu ile yardım için illüstrasyonlar ve Shailabh Kaya ile yardım için Hyungsoon Im teşekkür etmek istiyorum.

Microwell Dizi Yüzey 1. Mikro ve <ol><li> Termal olarak yetiştirilen oksit 100 nm olan bir 4 inç silikon gofret ile başlayın. </li><li> 30 saniye boyunca 4,000 rpm&#39;de gofret SPR-955 0.7 photoresist&#39;i Spin. </li><li> 90 saniye boyunca 115 ° C&#39;de bir sıcak plaka üzerinde pişirilir. </li><li> Photoresist&#39;i Açığa. <ol><li> Dizi, bir 2 mm x 2 mm alanı kapsayan bir 3 um süresi ile bir altıgen dizide düzenlenmiş 1 um delikler yaratacak bir maske kullanın. </li><li> 6 mm adım büyüklüğü ve 200 mJ / cm 2 &#39;lik bir pozlama kullanan bir i-hat step in gofret Açığa. </li></ol></li><li> 90 saniye boyunca 115 ° C&#39;de bir sıcak plaka üzerinde pişirilir. </li><li> 90 saniyelik bir geliştirme toplam süresi için gofret CD-26 2 birikintileri yatırmak için bir spin geliştirici kullanarak geliştirin. </li><li> N 2 ile ultra saf DI su ve kuru ile iyice durulayın. </li><li> Ar 50 sccm&#39;lik, CF 4 25 sccm&#39;lik ve CHF 3 flo 50 sccm&#39;lik ile 6 dakika boyunca bir reaktif iyon etcher in oksit etch75 mTorr basıncında kanat. </li><li> C4 F 8 63 sccm&#39;lik, SF 6 27 sccm&#39;lik, Ar 40 sccm&#39;lik ve O 2 14 mTorr basıncında akan 10 sccm&#39;lik ile 2 dakika boyunca bir ICP derin açması reaktif iyon etcher olarak silikon etch. </li><li> Karşı kaldırmak için aseton, metanol ve izopropanol içinde durulayın. </li><li> H 2 SO 4 banyosu içinde yer: H 2 O 2 01:01 yüzeyi temizlemek için 10 dakika karıştırıldı. </li><li> N 2 ile ultra saf DI su ve kuru ile iyice durulayın. </li><li> 250 ° C&#39;de atomik tabaka birikimi ile Al 2 1.080 Å O 3 yatırınız </li></ol> Poli 2.. Hazırlama (dimetilsiloksan) Çekçek <ol><li> Mümkünse, bir temiz oda çalışır. Aksi mümkün temiz ortamda çalışmak. </li><li> ≥ 13 mm saplı bir plastik Petri çanak (veya başka temiz tek bir kap) edinin. </li><li> Bu yemeğin içinde, 50 g PDMS bas ardından, 5 gr PDMS sertleştirme ajanı dökmeke maddesi (ya da çoğunlukla Petri kabı dolduracak 1:10 şey). Bir kullanılıp atılabilir plastik bir pipet ya da çubuk ile iyice karıştırın. </li><li> Kabarcıkları karışımı (yaklaşık 30 dakika) üzerinden gelinceye kadar vakum uygulanarak, bir vakum hattı olan bir bölme içerisinde karışık PDMS yerleştirerek kabarcıklarını çıkarın. </li><li> Zaten Petri kabındaki, hava kabarcıklarının oluşturulmasını önlemek Petri kabındaki PDMS, dökmek değilse. </li><li> 50 ° C (daha az bir süre için yüksek ısı de çalışıyor)&gt; bir ocak gecede Cure. </li><li> Temiz / yeni jilet ile, dikkatle mümkün olduğunca temiz üst yüzeyi tutarak, bir dikdörtgen parça, yaklaşık 2.5 x 2.5 cm kesti. Temiz bir forseps ile soyunuz. (Bu silecek sürecinde kullanılan kenar olacak) mümkün olduğunca keskin üst kenarına yapmak için, bir hareket jilet bastırarak bir kenarını (1.5 cm aşağı) keserek. </li><li> Daha sonra aseton, metanol, izopropil alkol, ve ultra saf DI su ile yıkayınız ve temiz, kuru bir nitrojen gazı ile darbe. Temiz bir Petri kabındaki saklayın. </li></ol> Veziküller 3. Hazırlanması <ol><li> Lipid stok 25 mg / ml yumurta fosfatidilkolin (PC) solüsyonları ve 1 mg / ml 1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-N toplayın - kloroform (lisamin rodamin B sülfonil) amonyum tuzu (Rho-DPPE) ve kloroform / metanol içinde monosialoganglioside GM1 bir 0.5 mg / ml stok çözeltisi (2:1 v / v). </li><li> Küçük bir cam şişe içinde 25 mg / ml PC 18.9 ul, 0.5 mg, 39.6 ul / ml GM1 ve 7.9 ul eklenmesi ile 97 mol% PC,% 2 mol GM1 ve 1 mol% Rho-DPPE sonuçlanan bir karışım yapmak 1 mg / cam şırıngalar kullanılarak ml Rho-DPPE. </li><li> Not:. Nair ve diğerleri, 25 için ek malzeme istenen herhangi bir bileşimin vezikülleri oluşturmak için gerekli lipitlerin miktarlarını hesaplamak için mükemmel bir özelleştirilebilir Excel içerir. </li><li> Bir vakumlu desikatör içinde şişe yerleştirin ve 6 saat için vakum altında şişeyi bırakarak çözücü çıkarın. </li><li> 0.1 &#39;lik bir sulu çözelti yapınM NaCl. Kurutulmuş lipid filmi içeren şişeye 0.1 M NaCl çözeltisinin 0.5 ml ilave edilir. </li><li> Sulu lipid karışım gece boyunca dinlenmeye bırakın. </li><li> Bir vezikül süspansiyonu oluşturmak için Kısaca girdap karışımı, daha sonra oda sıcaklığında bir banyo sonikatörü içinde 20 dakika boyunca ultrasonik titremeye maruz bırakılır. </li><li> 100 nm gözenek boyutu olan bir polikarbonat membran ile vezikül süspansiyonunun Ekstrüze. Filtre 17X ile vezikül süspansiyonunun geçirin. </li><li> 4 ° C&#39;de bir cam şişe içinde çekilmiş veziküllerin saklayın </li></ol> Küresel Desteklenen lipit tabakalarının 4. Oluşumu <ol><li> 700 nm çaplı SiO 2 boncuk toplayın. Taneler, 1.4 x 10 11 boncuk / ml &#39;lik bir stok konsantrasyonu ile damıtılmış su içinde temin edilmektedir. </li><li> Bir 1.5 ml Eppendorf tüpü içinde 0.1 M NaCI 893 ul boncuk stok çözeltisinin 107 ul ekleyerek 1.5 x 10 10 boncuk / ml &#39;lik bir konsantrasyon ile bir 1 ml boncuk süspansiyonu hazırlamak. </li><li> Iyi mi sağlamak için süspansiyon vorteksxed. </li><li> 20 dk sonra süpernatant atın için 1.700 x g&#39;de süspansiyon santrifüj. 0.1 M NaCI, 1 ml olarak boncuk yeniden süspanse edin. Iyice boncuk yıkamak için iki kez daha bu adımı tekrarlayın. </li><li> , SSLBs oluşturan bir 1.5 ml Eppendorf tüpü içinde 1 mg / ml vezikül süspansiyonunun 200 ul SiO 2 boncuk süspansiyonu 25 ul ekleyin. Vortex karışım, oda sıcaklığında 1 saat boyunca bekletilir. Bu aşamada SSLB konsantrasyonu 1.7 x 10 9 SSLBs / ml olmalıdır. </li><li> SSLBs pellet haline getirmek için 20 dakika boyunca 1700 x g&#39;de santrifüjleyin. Pelet nedeniyle boncuklar üzerinde Rho-DPPE ile veziküllerin rüptürü pembe görünmelidir. </li><li> 225 | il fosfat tamponlu tuz (PBS), pH = 7.4 &#39;de tekrar süspansiyon süpernatan ve atın. Tekrar SSLB süspansiyon herhangi yırtılmamış veziküllerini kaldırmak için 4.6-4.7 adımları iki kez daha. </li></ol> SSLB Array 5. Meclisi <ol><li> 4-6 mikrofon ile dikdörtgen parçalar sonuçlanan mikro diziler Cleave gofretbirim başına Rowell diziler. </li><li> Vortex SSLB süspansiyonu karıştırmak, sonra her mikrowell dizideki SSLB süspansiyonu 10 ul yerleştirin. 1 saat dinlenme SSLBs yüzeyine yerleşmek için izin diye. </li><li> Sonra yavaşça sığ bir tabak içinde hazırlanmış bir PBS banyosunda daldırın, bir yıkama şişesinden PBS ile mikro dizi çip yıkayın. </li><li> Batık ise, yavaşça mikro dizi çip üzerinde PDMS silecek floş yerleştirin ve yavaşça mikro oyuk hareketsiz değil SSLBs kaldırmak için yüzeyi 5x boyunca kaydırın. </li><li> Kavrama hafifçe mikro dizi cımbız ile çip ve herhangi bir aşırı SSLBs kaldırmak için PBS banyosunda sallayın. </li><li> Çabuk silecek banyosundan çipi çıkarın ve daha sonra kullanmak kadar taze PBS banyosunda yerleştirin. Çipin üst yüzeyi SSLBs korumak için ıslak olduğundan emin olun. </li></ol> Not: Yukarıda tarif edilen montaj yöntemi fare beyin veya pho izole myelin parçacıkların gibi doğal zar parçacıklarının diziler yaratmak için kullanılabilirSiO 2 kordon destek olmadan spholipid veziküller. Bu çalışma Wittenberg et de ayrıntılı olarak tarif edilmiştir al. 21 ve temsili sonuçlar aşağıda gösterilmiştir. 6.. Kolera Toksin Bağlanma Deneyi <ol><li> PBS içinde sığır serum albümini (BSA) içinde bir 2 mg / ml çözeltisi hazırlayın. </li><li> 2 mg / ml BSA ile PBS içinde Alexa 488 ile konjuge edilmiş kolera toksini B-alt-biriminin istenen konsantrasyonuna sahip bir çözelti hazırlayın. </li><li> PBS banyosundan SSLB dizi çipini çıkarın ve silin bir laboratuvar ile PBS solüsyonu en uzak fitil. SSLB dizi sulu tutmak için çip üzerinde yeterli PBS bırakın. </li><li> Özel olmayan bağlanmasını önlemek için, 2 mg / ml SSLB dizi çip BSA çözeltisi 200 ul ekleyin. Nemlendirilmiş kutu içinde 1 saat bekletin. </li><li> Bir mikropipet ile, SSLB dizi çip üstünden çözeltisi 200 ul çıkarın. </li><li> SSLB dizi çip kolera toksin çözeltisi 200 ul ilave edin ve bir nemlendirilmiş kutu içinde 1 saat boyunca geri kalanı sağlar. </li><li> Yavaşça herhangi bağlanmamış kolera toksini kaldırmak için bir yıkama şişesinden PBS ile SSLB dizi çip yıkayın. </li><li> Bir laboratuvar kullanarak fitil uzak aşırı PBS silin. 24 mm x 40 mm kapak kayma ile kapak çip görüntüleme önce. </li><li> Filtre kullanarak dik bir mikroskop ile görüntü diziler ilgi floroforlar için uygun ayarlar. </li><li> ImageJ yazılım otomatik parçacık analiz fonksiyonunu kullanarak bir dizi bireysel SSLBs arasında floresan yoğunluğu analiz edin. </li><li> Belirli bir dizi üzerinde bulunan SSLBs yoğunluklarını özetlemek histogramlar içine bireysel SSLBs itibaren ortalama floresan yoğunlukları derlemek. </li></ol>

<ol><li>Drews, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+discovery%3A+A+Historical+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drug discovery: A Historical Perspective.</a> Science. 287 (5460), 1960-1964 (1126).</li>
<li>Cooper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Membrane+Receptor+Screening+and+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Recognit%22%5BJournal%5D)">Advances in Membrane Receptor Screening and Analysis.</a> J. Mol. Recognit. 17 (4), 286-315 (2004).</li>
<li>Voskuhl, J., Ravoo, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Recognition+of+Bilayer+Besicles%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular Recognition of Bilayer Besicles.</a> Chem. Soc. Rev. 38 (2), 495-505 (2009).</li>
<li>Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+Vesicles%3A+Preparations+and+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chembiochem%22%5BJournal%5D)">Giant Vesicles: Preparations and Applications.</a> Chembiochem. 11 (7), 848-865 (1002).</li>
<li>Castellana, E. T., Cremer, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+Supported+Lipid+Bilayers%3A+From+Biophysical+Studies+to+Sensor+Design%5BTitle%5D)+AND+%22Surf.+Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Solid Supported Lipid Bilayers: From Biophysical Studies to Sensor Design.</a> Surf. Sci. Rep. 61 (10), 429-444 (2006).</li>
<li>Johnson, J. M., Ha, T., Chu, S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Steps+of+Supported+Bilayer+Formation+Probed+by+Single+Vesicle+Fluorescence+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Early Steps of Supported Bilayer Formation Probed by Single Vesicle Fluorescence Assays.</a> Biophys. J. 83 (6), 3371-3379 (2002).</li>
<li>Krysinski, P., Zebrowska, A., Michota, A., Bukowska, J., Becucci, L., Moncelli, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tethered+Mono-+and+Bilayer+Lipid+Membranes+on+Au+and+Hg%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Tethered Mono- and Bilayer Lipid Membranes on Au and Hg.</a> Langmuir. 17 (13), 3852-3857 (2001).</li>
<li>Li, L., Wang, H. F., Cheng, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Coherent+anti-Stokes+Raman+Scattering+Imaging+of+Lipid+Distribution+in+Coexisting+Domains%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Quantitative Coherent anti-Stokes Raman Scattering Imaging of Lipid Distribution in Coexisting Domains.</a> Biophys. J. 89 (5), 3480-3490 (2005).</li>
<li>Richter, R. P., Brisson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Following+the+Formation+of+Supported+Lipid+Bilayers+on+Mica%3A+A+Study+Combining+AFM%2C+QCM-D%2C+and+Ellipsometry%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Following the Formation of Supported Lipid Bilayers on Mica: A Study Combining AFM, QCM-D, and Ellipsometry.</a> Biophys. J. 88 (5), 3422-3433 (2005).</li>
<li>Dahlin, A., Zäch, M., Rindzevicius, T., Käll, M., Sutherland, D. S., Höök, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+Surface+Plasmon+Resonance+Sensing+of+Lipid-Membrane-Mediated+Biorecognition+Events%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Localized Surface Plasmon Resonance Sensing of Lipid-Membrane-Mediated Biorecognition Events.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (14), 5043-5048 (2005).</li>
<li>Kraft, M. L., Weber, P. K., Longo, M. L., Hutcheon, I. D., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+Separation+of+Lipid+Membranes+Analyzed+with+High-Resolution+Secondary+Ion+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Phase Separation of Lipid Membranes Analyzed with High-Resolution Secondary Ion Mass Spectrometry.</a> Science. 313 (5795), 1948-1951 (2006).</li>
<li>Groves, J. T., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropattern+Formation+in+Supported+Lipid+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Micropattern Formation in Supported Lipid Membranes.</a> Acc. Chem. Res. 35 (3), 149-157 (2002).</li>
<li>Bally, M., Bailey, K., Sugihara, K., Grieshaber, D., Vörös, J., Stadler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+and+Lipid+Bilayer+Arrays+Towards+Biosensing+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Liposome and Lipid Bilayer Arrays Towards Biosensing Applications.</a> Small. 6 (22), 2481-2497 (2010).</li>
<li>Groves, J. T., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supported+Planar+Bilayers+in+Studies+on+Immune+Cell+Adhesion+and+Communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Supported Planar Bilayers in Studies on Immune Cell Adhesion and Communication.</a> J. Immunol. Methods. 278 (1-2), 19-32 Forthcoming.</li>
<li>Yang, T. L., Jung, S. Y., Mao, H. B., Cremer, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+Phospholipid+Bilayer-Coated+Microchannels+for+On-Chip+Immunoassays%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Fabrication of Phospholipid Bilayer-Coated Microchannels for On-Chip Immunoassays.</a> Anal. Chem. 73 (2), 165-169 (2001).</li>
<li>Groves, J. T., Ulman, N., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+Fluid+Lipid+Bilayers+on+Solid+Supports%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Micropatterning Fluid Lipid Bilayers on Solid Supports.</a> Science. 275 (5300), 651-653 (1997).</li>
<li>Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+and+Composition+Arrays+of+Supported+Lipid+Bilayers+by+Microcontact+Printing%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Patterning and Composition Arrays of Supported Lipid Bilayers by Microcontact Printing.</a> Langmuir. 17 (11), 3400-3405 (2001).</li>
<li>Yee, C. K., Amweg, M. L., Parikh, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+Photochemical+Patterning+and+Refunctionalization+of+Supported+Phospholipid+Bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Direct Photochemical Patterning and Refunctionalization of Supported Phospholipid Bilayers.</a> J. Am. Chem. Soc. 126 (43), 13962-13972 (2004).</li>
<li>Kelly, C. V., Craighead, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanofabrication+for+the+Analysis+and+Manipulation+of+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Nanofabrication for the Analysis and Manipulation of Membranes.</a> Ann. Biomed. Eng. 40 (6), 1356-1366 (2012).</li>
<li>Wittenberg, N. J., Johnson, T. W., Oh, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Density+Arrays+of+Submicron+Spherical+Supported+Lipid+Bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">High-Density Arrays of Submicron Spherical Supported Lipid Bilayers.</a> Anal. Chem. 84 (19), 8207-8213 (2012).</li>
<li>Wittenberg, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facile+Assembly+of+Micro-+and+Nanoarrays+for+Sensing+with+Natural+Cell+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Facile Assembly of Micro- and Nanoarrays for Sensing with Natural Cell Membranes.</a> ACS Nano. 5 (9), 7555-7564 (2011).</li>
<li>Stamou, D., Duschl, C., Delamarche, E., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-Assembled+Microarrays+of+Attoliter+Molecular+Vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Self-Assembled Microarrays of Attoliter Molecular Vessels.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 42 (45), 5580-5583 (2003).</li>
<li>Kalyankar, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arraying+of+Intact+Liposomes+into+Chemically+Functionalized+Microwells%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Arraying of Intact Liposomes into Chemically Functionalized Microwells.</a> Langmuir. 22 (12), 5403-5411 (2006).</li>
<li>Dahlin, A. B., Jonsson, M. P., Höök, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+Self-Assembly+of+Single+Lipid+Vesicles+in+Nanoplasmonic+Apertures+in+Gold%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Specific Self-Assembly of Single Lipid Vesicles in Nanoplasmonic Apertures in Gold.</a> Adv. Mater. 20 (8), 1436-1442 (2008).</li>
<li>Nair, P. M., Salaita, K., Petit, R. S., Groves, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Patterned+Supported+Lipid+Membranes+to+Investigate+the+Role+of+Receptor+Organization+in+Intercellular+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Using Patterned Supported Lipid Membranes to Investigate the Role of Receptor Organization in Intercellular Signaling.</a> Nat. Protoc. 6 (4), 523-539 (2011).</li>
<li>Kuziemko, G. M., Stroh, M., Stevens, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholera+Toxin+Binding+Affinity+and+Specificity+for+Gangliosides+Determined+by+Surface+Plasmon+Resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Cholera Toxin Binding Affinity and Specificity for Gangliosides Determined by Surface Plasmon Resonance.</a> Biochemistry. 35 (20), 6375-6384 (1996).</li>
<li>Moran-Mirabal, J. M., Edel, J. B., Meyer, G. D., Throckmorton, D., Singh, A. K., Craighead, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrometer-Sized+Supported+Lipid+Bilayer+Arrays+for+Bacterial+Toxin+Binding+Studies+Through+Total+Internal+Reflection+Fluorescence+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Micrometer-Sized Supported Lipid Bilayer Arrays for Bacterial Toxin Binding Studies Through Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy.</a> Biophys. J. 89 (1), 296-305 (2005).</li>
<li>Shi, J. J., Yang, T. L., Kataoka, S., Zhang, Y. J., Diaz, A. J., Cremer, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GM1+Clustering+Inhibits+Cholera+Toxin+Binding+in+Supported+Phospholipid+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">GM1 Clustering Inhibits Cholera Toxin Binding in Supported Phospholipid Membranes.</a> J. Am. Chem. Soc. 129 (18), 5954-5961 (2007).</li>
<li>Gill, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arrangement+of+Subunits+in+Cholera+Toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">The Arrangement of Subunits in Cholera Toxin.</a> Biochemistry. 15 (6), 1242-1248 (1021).</li>
<li>Weng, K. C., Kanter, J. L., Robinson, W. H., Frank, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+Supported+Lipid+Bilayers+Containing+Monosialoganglioside+GM1%3A+A+QCM-D+and+FRAP+study%5BTitle%5D)+AND+%22Colloid+Surface+B%22%5BJournal%5D)">Fluid Supported Lipid Bilayers Containing Monosialoganglioside GM1: A QCM-D and FRAP study.</a> Colloid Surface B. 50 (1), 76-84 (1016).</li>
<li>Walt, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+Optic+Microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Fibre Optic Microarrays.</a> Chem. Soc. Rev. 39 (1), 38-50 (2010).</li>
<li>Bake, K. D., Walt, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+Spectroscopic+Detections%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Multiplexed Spectroscopic Detections.</a> Annu. Rev. Anal. Chem. 1 (1), 515-547 (2008).</li>
<li>Kundu, J., Levin, C. S., Halas, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-Time+Monitoring+of+Lipid+Transfer+Between+Vesicles+and+Hybrid+Bilayers+on+Au+Nanoshells+Using+Surface+Enhanced+Raman+Scattering+%28SERS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Real-Time Monitoring of Lipid Transfer Between Vesicles and Hybrid Bilayers on Au Nanoshells Using Surface Enhanced Raman Scattering (SERS).</a> Nanoscale. 1 (1), 114-117 (2009).</li>
<li>Junesch, J., Sannomiya, T., Dahlin, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Properties+of+Nanohole+Arrays+in+Metal-Dielectric+Double+Films+Prepared+by+Mask-on-Metal+Colloidal+Lithography%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Optical Properties of Nanohole Arrays in Metal-Dielectric Double Films Prepared by Mask-on-Metal Colloidal Lithography.</a> ACS Nano. 6 (11), 10405-10415 (2012).</li>
<li>Wu, M., Holowka, D., Craighead, H. G., Baird, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+Plasma+Membrane+Compartmentalization+with+Patterned+Lipid+Bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Visualization of Plasma Membrane Compartmentalization with Patterned Lipid Bilayers.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (38), 13798-13803 (2004).</li>
<li>Hatzakis, N. S., Bhatia, V. K., Larsen, J., Madsen, K. L., Bolinger, P. Y., Kunding, A. H., Castillo, J., Gether, U., Hedegard, P., Stamou, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+Curved+Membranes+Recruit+Amphipathic+Helices+and+Protein+Anchoring+Motifs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">How Curved Membranes Recruit Amphipathic Helices and Protein Anchoring Motifs.</a> Nat. Chem. Biol. 5 (11), 835-841 (2009).</li>
<li>Roizard, S., Danelon, C., Hassaine, G., Piguett, J., Schulze, K., Hovius, R., Tampe, R., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+G-Protein-Coupled+Receptors+in+Cell-Derived+Plasma+Membranes+Supported+on+Porous+Beads%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Activation of G-Protein-Coupled Receptors in Cell-Derived Plasma Membranes Supported on Porous Beads.</a> J. Am. Chem. Soc. 133 (42), 16868-16874 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek hiçbir rakip mali çıkarları var.

Bu çalışmada, biz destekli lipid çift tabakaları ile kaplanmış tek dağılımlı SiO 2 boncuk lipid iki katmanlı ya da alt-tabaka yüzeyi üzerinde ligandların hedef için gerek kalmadan mikro diziler halinde dizilmiş olabilir ve diziler toksin lipid etkileşimleri belirlemek için kullanılabileceğini göstermektedir. CTx/GM1 bağlanması için hesaplanan ayrışma sabiti biz önceki bir raporla, literatürde değerlerin geniş bir eşitsizlik göz önüne alındığında, uygun bir şekilde kıyaslanabilir Winter ve ark., Lipid...

Lipid iki katmanlı membranlar doğada temel yapılardır. Hücresel zarlar, plazma ve organel membranlar yaşam için gerekli olan moleküller, bir dizi dahil lipid ikili katmandan oluşmaktadır. Birçok yaşamı sürdürme işlemleri hücrelerinin yüzeyinde meydana veya lipit iki katmanlı membran ile ilişkili moleküller aracılık eder. Aslında, birçok ilaç hedef işlemler veya moleküller 1,2 veya zarlarında bulunmaktadır. Bu tür zar analitik yüzeylerinde meydana gelen kimyasal reaksiyonlar veya kovalent olmayan bağlanma olaylar gibi süreçleri araştırılması gereklidir. Doğal membranlar sensörleri ile izole ve / veya arayüz zor olabilir çünkü, birçok araştırmacı, analitik çalışmaları yürütmek için basitleştirilmiş bir model zarları kullanır. Model membran sistemleri bir dizi nano boyutta 3,4 ile lipozomlara çapı mikron On ila yüzlerce olabilir dev veziküllerden kadar, literatürde tarif edilmiştir. Alternrin, katı destekler üzerinde biriken düzlemsel lipid çift, yani ikili lipid tabakalarıdır (SLBS), farklı yüzeylerin bir dizi oluşturulabilir ve yaygın olarak, biyo-fiziksel biyokimyasal ve analitik uygulamalarda 5 kullanılmaktadır desteklenir. Elektrik ya da optik malzeme ile birleştirilmesi SLBS farklı analitik tekniklerin kullanılması ile membran biyokimya ve biyofiziğin soruşturma sağlar. Floresan mikroskopi 6, elektrokimya 7, optik spektroskopi 8, taramalı prob mikroskopisi 9, yüzey plazmon rezonans 10 ve kütle spektrometresi 11 tüm SLBS yapısını ve özelliklerini incelemek için istihdam edilmiştir. SLB diziler multipleks 12,13 deneyleri için sensörler tasarımında ek bir esneklik sunar. Diğer uygulamalar bağışıklık hücrelerinin 14 arasında oluşan kavşak taklit etmek SLB diziler kullanın. SLB diziler için hazırlama yöntemleri microflu arasında değişmesineidic bitişik SLB yamalar arasındaki fiziksel engelleri istihdam olanlar için 15 yaklaşır. 16. Diğer gruplar baskı yöntemleri 17 kullandım, fotokimyasal desenlendirme 18 ve çeşitli nanoengineering SLB diziler oluşturmak için 19 yaklaşır. Bu kağıt ve ekteki videoda mikro oyuk 20&#39;nin sıralı diziler halinde SLB-kaplanmış boncuklar SiO 2 biriktirilmesiyle SLB dizileri oluşturmak için bir yöntem ortaya koymaktadır. Biz küresel desteklenen lipit tabakalarının (SSLBs) olarak SLB kaplı SiO 2 boncuklar bakın. Bu teknik, aynı zamanda, örneğin sonuçları göstermektedir başka doğal kaynaklardan 21, elde edilen fosfolipid vezikülleri ve biyomembranlarda dizileri oluşturulan önceki işin bir uzantısıdır. Biyomembran tanecikleri veya veziküller arraying için diğer yöntemler vesikül yüzeyi üzerinde bulunan tamamlayıcı bir ligand ile ortak yüzeyleri üzerinde belirli hedefleme ligandlarının kalıpları yararlanmıştır. Örnekleri arasında biyotin-içeriravidin dernek 22,23 ve DNA hibridizasyon şemaları 24. Bizim yaklaşım sadece gerekli hiçbir hedefleme veya tanıma kısımları ile bir mikro dizi gerektirir. SSLBs büyüklüğü düşük poli-disperitesineM sahip SiO 2 boncuk desteklerin, çapı ile tanımlanır. SSLB çapından biraz daha büyük için mikro çapını ayarlayarak, tek bir SSLB her kuyucuktan yerleşir. Bir poli (dimetilsiloksan) (PDMS) silecek sonra yüzeyinden mikro oyuk hareketsiz olmayan tüm SSLBs kaldırır. Mikro-ve elde edilen diziler SSLB 3 um merkez-merkez aralığında ve altıgen periyodik yüksek yoğunluklu (~ 10 5 SSLBs / mm 2) sahiptir. Seri olarak, farklı lipid bileşimlerle SSLBs biriktirilmesi ile, rasgele konumlandırılmış olan çok-bileşenli SSLBs diziler oluşturmak mümkündür. SSLB Dizilerin algılama yeteneğini göstermek için, SSLBs dahil bir Gangliozidleri (GM1) ile kolera toksini (CTx) etkileşimini kullanılır. Iledoğal zar partiküller, iki farklı hücre tiplerinden membran malzemesi ihtiva eden, çok-bileşenli dizilerde hücreye özel lipidler tespit etmek mümkün oldu.

<table><tbody><tr><td>4 inç silikon gofret</td><td>Üniversite Gofret</td><td>425</td><td></td></tr><tr><td>Shipley MEGAPOSIT SPR955-CM 0.7 fotorezist</td><td>MicroChem</td><td>SPR955-CM</td><td></td></tr><tr><td>Shipley MICROPOSIT CD-26 geliştirici</td><td>MicroChem</td><td>CD-26</td><td></td></tr><tr><td>i-line step</td><td>Canon</td><td>2500 i3 step</td><td></td></tr><tr><td>Vision 320 reaktif iyon aşındırıcı</td><td>Gelişmiş Vakum Vizyonu</td><td>320 RIE</td><td></td></tr><tr><td>Derin hendek reaktif iyon aşındırıcı</td><td>Plasma Therm</td><td>SLR-770</td><td></td></tr><tr><td>Atomik katman depolama sistemi</td><td>Cambridge NanoTech</td><td>Savannah</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning Sylgard 184 poli (dimetilsiloksan) kiti</td><td>Ellsworth Yapıştırıcılar</td><td>184 SIL ELAST KİTİ 0.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Yumurta fosfatidilkolin</td><td>Avanti Polar Lipidler</td><td>840051C</td><td></td></tr><tr><td>1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-<>N-(lissamine rodamin B sülfonil) amonyum tuzu</td><td>Avanti Polar Lipidler</td><td>810158C</td><td></td></tr><tr><td>Monosialoganglioside GM1</td><td>Avanti Polar Lipidler</td><td>860065P</td><td></td></tr><tr><td>Silika boncuk</td><td>Bangs Laboratuvarları</td><td>SS03N/4666</td><td>Boncuk kabı üzerindeki ambalaj, boncukların çapının 900 nm olduğunu belirtir. Bununla birlikte, ışık saçılımı ve elektron mikroskobundan sonra, boncukların kabaca 700 nm çapında olduğunu belirledik.</td></tr><tr><td>Kolera toksini B-alt birimi, Alexa 488-konjuge</td><td>Moleküler Problar</td><td>C-34775</td><td></td></tr><tr><td>Anti-oligodentrosit antikoru IgM O4, NorthernLights 557 konjuge</td><td>R& D Sistemleri</td><td>NL1326R</td><td></td></tr><tr><td>FM1-43</td><td>Moleküler Problar</td><td>T-3136</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf MiniSpin santrifüj</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-401-09</td><td></td></tr></tbody></table>

bir Çekçek tabanlı meclisi yöntemi ile biomembrane mikroarray&#39;ler oluşumu

Formation of Biomembrane Microarrays with a Squeegee-based Assembly Method

Lipid iki katmanlı membranlar hücrelerin plazma membranları formu ve hücre içi organellerin sınırlarını tanımlar. Doğada bu membranlar, lipidler, çok çeşitli heterojen karışımlarıdır zara bağlı proteinleri içeren ve karbonhidrat ile süslenmiştir. Bazı deneylerde, doğal membran olanlardan iki lipid tabakasının biyo-fiziksel ya da biyokimyasal özellikleri ayrılması için tercih edilir. Bu gibi durumlarda, dev vesiküller, lipozom ya da taşıyıcı lipid iki katmanlı (SLBS) gibi model sistemlerinin kullanımı gerektirir. SLBS Diziler uygulamaları algılamak ve hücre-hücre etkileşimleri taklit için özellikle çekicidir. Burada SLB dizileri oluşturmak için yeni bir yöntem tarif eder. Mikrondan daha küçük çaplı SiO 2 boncuk birinci küresel SLBS (SSLBs) oluşturmak için, lipid çift tabakaları ile kaplanmıştır. Boncuklar daha sonra mikro-fabrikasyon submikron çaplı mikro oyuk bir diziye yatırılır. Ayrılmayı ise hazırlama tekniği, alt-tabaka yüzeyini temizlemek için bir &quot;sileceği&quot; kullanmaktadırmikro oyuk içine yerleşmiş SSLBs arkasında g. Bu yöntem, mikro alt-tabakanın herhangi bir kimyasal modifikasyonu, ne de SSLB üzerinde herhangi bir hedefleme ligandı gerektirir. Kuyu çap tane çapı biraz daha büyük olmak için ayarlanmıştır çünkü Mikrodelikler tek boncuk tarafından işgal edilmiştir. Geri kalan boş kalır Tipik olarak, kuyuların daha fazla% 75, işgal edilmiştir. Tamponda SSLB diziler daha büyük bir haftadan uzun süreli stabilite gösterir. Biz gangliosid GM1 ile kolera toksini etkileşimlerini karakterize ile göstermek ki, SSLBs çok tip seri biriktirme ile tek bir dizi yerleştirilebilir ve bu diziler tespiti için de kullanılabilir. Ayrıca, hücresel kaynaklardan elde edilen boncuk destek ve biyomembranlarda olmayan fosfolipid vesiküller aynı yöntemle dizilmiş olabilir ve hücreye özel membran lipidleri tespit edilebileceğini göstermektedir.

SiO 2 boncuk fosfolipidler, floresan lipitler ve örneğin gangliosidler gibi diğer lipidler oluşan veziküllerin bir çözeltisi ile karıştırılmaktadır, Şekil 1a&#39;da şematik olarak gösterildiği gibi, veziküller, SSLBs oluşturmak üzere SiO 2 kordon yüzeyleri üzerinde kopma. SSLBs yıkandıktan sonra, SSLB çözeltisinin bir damlası bir mikro dizi yerleştirilir ve boncuklar yüzeyine yerleşmek için izin verilir. (Şekil 1B1), Şekil 1B2 gösterilmiştir fosfolipid vezikülleri ...

Desteklenen ikili lipid tabakalarıdır ve doğal zar parçacıkları hücre zarlarının özelliklerini yaklaşık ve analitik çeşitli stratejiler dahil edilmesi uygun sistemlerdir. Burada destekli lipid iki katmanlı kaplı SiO 2 boncuklar, fosfolipid vezikülleri ya da doğal zar parçacıklarının oluşan mikrodizileri hazırlanması için bir yöntemi göstermektedir.

Bir Çekçek tabanlı Meclisi Yöntemi ile Biomembrane Mikroarray&#39;ler oluşumu

Lipid bilayer membranes form the plasma membranes of cells and define the boundaries of subcellular organelles. In nature, these membranes are ...

Bu prosedürün genel amacı, basit bir hazırlama yöntemi kullanarak biyomembran mikro dizileri oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle silika boncukların lipid çift katmanlı membranlarla kaplanmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, lipid kaplı boncukların silikon mikro kuyu altlığına yerleştirilmesidir.Üçüncü adım, mikro kuyucukların dışında kalan boncukların polimetil siloksan bir sıyırıcı kullanılarak temizlenmesidir. Son adım ise, lipid kaplı boncuk dizilerinin floresan mikroskobu ile görüntülenmesidir. Nihayetinde bu yöntem, bir dizi görüntüleme yaklaşımı kullanılarak toksin-lipid etkileşimleri için bağlanma sabitlerini belirlemek amacıyla kullanılabilir.Bu yöntem, küresel destekli lipid çift tabaka dizileri ve hücrelerden türetilen doğal membran partikülleri oluşturmak için kullanılabilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, mikrokuyucukların fabrikasyonu dışında, mekânsal olarak tanımlanmış biyomembran dizileri oluşturmak için ne substratın ne de lipid membranların kimyasal modifikasyon gerektirmemesidir. Bu tekniğin uygulamaları, nanometrik metal delik dizilerine dayalı yüzey plazmon rezonansı kullanılarak lipid-protein etkileşimlerinin etiketsiz tespitine kadar genişletilebilir.Bu yöntem lipid protein etkileşimleri hakkında bilgi sağlayabilse de, hücresel fokal adezyon çalışmaları gibi diğer sistemlere de uygulanabilir; mikro kuyu dizileri ve sıyırıcı (squeegee) hazırlıkları metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bu video, vezikül hazırlama aşamasıyla başlamaktadır. İlk olarak, küçük bir cam şişe içerisinde veziküller için gerekli bileşen lipidleri karıştırın.Bu çözeltide toplam yarım miligram lipid bulunmaktadır; karışımı vakumlu desikatörde altı saat boyunca kurutun. Ardından, 0,1 molar sodyum klorür çözeltisi hazırlayın ve kurutulmuş lipidlere yarım mililitre ekleyin. Karışımın oda sıcaklığında gece boyunca inkübe edilmesini sağlayın.Ertesi gün, vezikülleri süspande etmek için karışımı vorteksleyin. Ardından karışımı bir banyoda, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca sonike edin. Sonikasyon sonrası, süspansiyonu 100 nanometre polikarbonat membran filtreden geçirin.Süspansiyonu ekstrüzyon filtresinden toplam 17 kez geçirin. Ardından, ekstrüde edilen vezikülleri cam bir şişede 4 °C'de saklayın. İlk olarak 700 nanometre çapında silikon dioksit boncuklar kullanın.0,1 molar sodyum klorür içinde 15 milyar boncuktan oluşan bir süspansiyon hazırlayın. Süspansiyonu vorteksleyin ve ardından 1700 Gs'de 20 dakika boyunca santrifüjleyip süpernatantı atın. Boncukları bir mililitre daha tuz çözeltisi içinde yeniden süspanse ederek ve tekrar 20 dakika boyunca çöktürerek yıkama işlemini tekrarlayın.Ardından, küresel destekli lipid çift tabakalarını veya SSB'leri oluşturmak için işlemi üçüncü kez tekrarlayın. 25 µL silikon dioksit boncuk süspansiyonunu, önceki bölümden elde edilen 200 µL vezikül süspansiyonu ile karıştırın. Karışımı vorteksleyin ve oda sıcaklığında bir saat inkübe edin; daha sonra karışımı 1700 Gs'de 20 dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatantı atın. Pelet, boncuklar üzerindeki ham DPPE ile parçalanmış veziküller nedeniyle pembe renktedir. Peleti pH 7.4'te 225 microliters PBS içerisinde yeniden süspande edin.Rüptüre olmamış vezikülleri uzaklaştırmak ve SSB'lerin oluşturulmasını tamamlamak için santrifüj ve Resus süspansiyon adımlarını iki kez tekrarlayın. Mikro kuyu dizileri içeren gofretleri, her birinde dört ila altı dizi olacak şekilde dikdörtgen parçalara bölün. Ardından, önceki bölümdeki SSLB süspansiyonunu vorteksleyin ve her bir mikro kuyu dizisine 10 µL aktarın.SSB'lerin çökelmesi için bir saat bekleyin. Dizi çiplerini PBS ile nazikçe yıkayın ve diziyi PBS'ye daldırın; ardından çekpasla daldırılmış çiplerin yüzeyi üzerinden beş kez geçin. Bu işlem, mikro kuyucukların içinde olmayan SLP'leri uzaklaştırır.Ardından, her bir dizi çipini cımbızla kavrayın ve PBS'yi nazikçe silkeleyerek uzaklaştırın. Daha sonra çipi taze bir PBS banyosuna aktarın. Çiplerin üst yüzeyleri ıslak kalmalıdır.Çipi banyodan çıkarın ve bir laboratuvar mendiliyle PBS'nin çoğunu silerek uzaklaştırın. Diziyi nemli tutacak kadar PBS bırakın.Şimdi, spesifik olmayan bağlanmayı engellemek için diziye 200 µL BSA çözeltisi ekleyin. Diziyi bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra, nemlendirilmiş bir kutu içerisinde, BSA'yı bir mikropipet ile uzaklaştırın ve 200 µL kolera toksini çözeltisi ekleyin.Ardından diziyi nemlendirilmiş hazneye geri yerleştirin. Bir saat daha bekleyin, ardından diziyi PBS ile yıkayın ve fazla PBS'yi bir temizleme beziyle çekerek alın. Sonra dizi çipini standart bir mikroskopi lamı üzerine yerleştirin, diziye 24 by 40 milimetre boyutunda kare bir lamel tutturun ve görüntülemeye geçin.Görüntü analizi, Image J'nin otomatik partikül analizi fonksiyonları ile gerçekleştirilebilir. Ardından her dizi için, bireysel SSB'lerin ortalama yoğunluklarını histogramlar halinde özetleyin. Belirtilen yöntemler uygulandıktan sonra, bir dizideki 100 mikron karelik bir alan 936 SSB göstermektedir.Saklama süresinin birinci haftasından sonra doluluk verileri hesaplanmış ve SSLB floresan yoğunluklarının bir histogramı oluşturulmuştur. Aynı dizi benzer şekilde yeniden analiz edilmiş ve floresan yoğunluklarında veya dizi doluluğunda herhangi bir değişiklik saptanmamıştır. Belirtilen yöntemlerle, farklı tanımlayıcı işaretleyicilere sahip farklı SSB'lerin ardışık bir şekilde biriktirilmesi de mümkün olmuştur.İkinci SSB'ler, birincilerin çöktüğü konsantrasyonun 10'da biri oranında çöktürülmüştür. Bir deney için her iki işaretleyicinin üst üste binmiş görüntüsü gösterilmektedir.Diziler, çeşitli konsantrasyonlarda GM one içeren SSB'lerle hazırlanmış ve sabit bir kolera toksini konsantrasyonuna maruz bırakılmıştır. Denge ayrışma sabitini belirlemek amacıyla işlemin tersi de uygulanmıştır. GM one için.Kolera toksini bağlanma dizileri, miyelin partiküllerinden yapılmış bu dizi gibi doğal biyomembranlardan da oluşturulabilir. Bu dizi, lipofilik flurofor FM 1 43 ile işaretlenmiştir. Lipid salları, kolesterol ve GM 1 gibi gangliozitler açısından zengindir.Böylece Alexa 4 88 konjuge kolera toksini lipid raft mikro dizilerine güçlü bir şekilde bağlanırken, buna karşın floresan işaretli şerit Aden bu dizilere bağlanmaz. Bir dizi, miyelin ve lipid raftlar 250 mikronluk kanallara sahip bir mikroakışkan çip aracılığıyla mikro kuyucuklara ileterek oluşturulmuştur. Anti oligodendrosit IgM ile işaretlenmiş ve miyelin içinde bulunan S sülfür işaretlenmiştir, ancak lipid raftlar işaretlenmemiştir.Lipid bilayer kaplı boncuklar hazırlandıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulandığında doğal membran partikül dizileri oluşturmak için bir saat içinde kullanılabilir. Biyomoleküler etkileşimlerin etiketsiz algılanması için nano delikli yüzey plazmon rezonansı gibi diğer yöntemler de kullanılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, lipid çift tabakası kaplı boncuklar ve doğal membran partikülleri kullanarak biyomembran dizileri oluşturmanın nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

formation-biomembrane-microarrays-with-squeegee-based-assembly

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz, üç-boyutlu hücre kültürü için gözenekli polimer cips mikroimalat için iki süreç sunuyoruz. Bunlardan birincisi, solvent buhar kaynak işlemi ile birlikte sıcak kabartma. Ikincisi ise, kısa bir süre önce geliştirilen iyon izleme teknolojisi ile üretim önemli bir basitleştirme giden kombine microthermoforming süreci kullanır.

Üç boyutlu Hücre ekimi için Chip-ölçekli Yapı iskeleleri mikroimalat

Bu yazıda, nasıl bir otomatik tarama konfokal mikroskop kullanılarak bir yüzeye immobilize bireysel DNA molekülleri izleri FRET elde açıklar.

Yüzey immobilize Biyomoleküller Tek Molekül Floresans Ölçümler için Otomatik Sistem

Bir çip üzerinde fotopolimerizasyon tekniği kullanılarak bir polimer mikro oluşumu açıklaması. Atomik kuvvet mikroskobu, temas açısı ölçümleri, X-ışını fotoelektron spektroskopisi ve uçuş ikincil iyon kütle spektrometresi ve hücre bağlanma testinin zaman kullanarak yüksek aktarım yüzey karakterizasyonu da açıklanmıştır.

Biyomalzemelerin Yüksek Verimli Discovery için Polimer Mikroarray&#39;ler

Bu videoda, toplam iç yansıma floresan mikroskobu kullanarak in vitro olarak cam destekli bir lipid çift tabakası üzerinde septin organizasyonunu araştırmak için bir prosedür gösteriyoruz.

Düzlemsel Destekli Lipid Bilayer Deneyi: Biyolojik Membran Mimiklerinde Septin Montajını Araştırmak İçin Mikroskopi Tabanlı İn Vitro Teknik

Üretim gelişmekte olan bir pin-baskı yöntemi kullanılarak sol-jel türevli protein katkılı mikroarrayler geliştirmek için bir güdümlü malzeme tarama yaklaşımı açıklanmıştır. Bu metodoloji maliyet-etkin küçük moleküllü tarama için kullanılan asetilkolinesteraz ve multikinaz microarrays, geliştirilmesi yoluyla gösterilmiştir.

Kantitatif Sol-jel Türetilmiş Protein Mikroarray&#39;ler geliştirilmesi için Rehberli Malzeme Tarama Yaklaşım

Burada, tek bir molekül duyarlılık ve ~ 15 msn zaman çözünürlüğü ile polarize TIRFM kullanılarak lipozomlar ve mikroakışkan kanallarda desteklenen iki katmanlı arasındaki tek tuzak aracılı füzyon olayları tespit etmek için bir protokol mevcut. Lipid ve çözünür kargo sürümü aynı anda tespit edilebilir. Lipozom boyutu, lipit yayınım ve füzyon gözenek özellikleri ölçülmüştür.

Polarize TIRF Mikroskopi tarafından İzlenen mikroakışkan Akış Hücredeki Gergin Desteklenen Bilayers Tek Proteoliposomes ve tuzak aracılı Fusion

Mikrobiyal toplulukların gelişimi, çevresel mimari, üye bolluğu, özellikleri ve etkileşimleri de içeren faktörlerin bir kombinasyonuna bağlıdır. Bu protokol, femtolitör kuyularda bulunan binlerce topluluğun eşzamanlı olarak izlenebilmesi için sentetik, mikrofabrik bir ortam tanımlamakta olup niş boyut ve sınırlama gibi anahtar faktörler yaklaşık olarak belirlenebilmektedir.

Bir Mikro Kuyruklu Dizi Platformunda Mikrobik Topluluk Geliştirmenin Montajı ve Takibi

Burada, açıklar gerilebilir, Çift Kanal imalatı, organ çip mikrosıvısal hücre kültür cihazlar organ düzeyi işlevlerine içinde in vitrorecapitulating için bir iletişim kuralı mevcut.

Ölçeklenebilir gerilebilir, Çift kanal, mikrosıvısal Organ cips imalatı

Bakteri ve kolloidler gibi bir sıvıda asılı mikro boyutlu nesneleri polidimetilsiloksisan substratında öngörülen dizilere desenleştirmek için mikroakışkan bir platformda kapilarite destekli montaj kullanan bir teknoloji sunuyoruz.

Sıralı Capillarity destekli Montaj yoluyla Mikroorganizmaların ve Mikropartiküllerin Deseni

Burada, tek moleküllü toplam iç yansıma floresan (smTIRF) mikroskobu kullanılarak yapay kalabalık lipit membranları üzerindeki tek moleküllerin bağlanma, hareketlilik ve montajını gerçekleştirmek ve analiz etmek için bir protokol sunulmaktadır.

Tek Moleküllü Difüzyon ve Polimer Kalabalık Lipid Membranlara Montaj

Mevcut protokol, biyouyumlu lipozomlar üretmek için mikroakışkan bir teknik olan oktanol yardımlı lipozom montajını (OLA) tanımlamaktadır. OLA, verimli kapsülleme ile monodispersed, mikron boyutunda lipozomlar üretir ve anında çip üzerinde deneylere izin verir. Bu protokolün sentetik biyoloji ve sentetik hücre araştırmaları için özellikle uygun olması beklenmektedir.

Biyomühendislik için On-Chip Oktanol Destekli Lipozom Montajı

Öğrenin, silika boncukları lipid çift katmanı ile kaplayarak biyomembran mikrodizileri oluşturmayı. Bu yöntem, toksin-lipid etkileşimlerinin bağlanma sabitlerini belirlemek için kullanılır.

Bir Çekçek tabanlı Meclisi Yöntemi ile Biomembrane Mikroarray'ler oluşumu

Daha fazla video keşfet