Name: Lipid çift katmanlarında tek proteinlerin floresan mikroskopisi kullanılarak takibi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Öğrenin lipid çift katmanlarında tek protein takibi için floresan mikroskopisi kullanımını. Bu yöntem, membran proteinlerinin dinamiklerini ve gizli durumlarını incelemek için biyomimetik membranlar oluşturmayı kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1/4 Dalga Plakası</td><td>Thorlabs</td><td>WPQ05M-633</td><td>Lazerle eşleştiğinden emin olun</td></tr><tr><td>100X Petrol Hedefi</td><td>Olympus</td><td>12-563-659</td><td>1.45 N/A apokromatik</td></tr><tr><td>16:0-18:1 PC</td><td>Avanti Polar Lipidleri</td><td>850457</td><td>POPC Fosfolipidler</td></tr><tr><td>18:0 PEG2000 PE</td><td>Avanti Polar Lipidleri</td><td>880210</td><td>Amonyum Tuzu</td></tr><tr><td>300mm Lens</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-300-A-ML</td><td></td></tr><tr><td>633 nm He:Ne Lazer</td><td>Melles Griot</td><td>05-LHP-927</td><td>Başka kaynaklara ve başka dalga boylarına değiştirilebilir</td></tr><tr><td>633nm bant geçirici filtre</td><td>Chroma Tech</td><td>633/10X</td><td>Kullanılan lazerle eşleşme</td></tr><tr><td>655nm Uzun Geçişli Filtre</td><td>Chroma Tech</td><td>ET655lp</td><td>Boya/lazerin dalga boylarına göre değiştirin</td></tr><tr><td>Andor Solis I</td><td>Andor&nbsp;</td><td>Andor Solis I</td><td>Görüntü yakalama yazılımı</td></tr><tr><td>ATTO 655&nbsp;</td><td>ATTO-TEC</td><td>MS 655</td><td>NHS-Ester modifikasyonu, tek molekül çalışması için uygun modifikasyona sahip herhangi bir boya kullanılabilir. ATTO önerilir ama Cy5/7 kullanılabilir</td></tr><tr><td>Biyo-boncuklar SM-2 Reçine</td><td>BioRad</td><td>1523922</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Millipore Sigma</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Katalaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3155-50MG</td><td>sığır karaciğerinden, sulu solsiyondan, &ge; 30000 birim/mg</td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>C547-1</td><td>HPLC veya spektroskopik sınıf</td></tr><tr><td>Kolesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Kapak Slipleri</td><td>ESCO Optikleri</td><td>R525000</td><td>25mm Kuvars</td></tr><tr><td>Dikroik Işın Bölücü</td><td>Semrock</td><td>FF545/650-Di01-25x36</td><td>Boya/lazerin dalga boylarına göre değiştirin</td></tr><tr><td>EMCCD Kamera</td><td>Andor&nbsp;</td><td>iXon Ultra 888</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tüpleri 15mL&nbsp;</td><td>Greiner Bio-one</td><td>188261</td><td>Cellestar hücre kültürü tüpleri</td></tr><tr><td>Glikoz Oksidaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2133-50KU</td><td>Aspergillus niger'den, tiper VII, &ge; 100000 birim/g katı (eklenmiş oksijen olmadan)</td></tr><tr><td>Isı Tabancası</td><td>Liman Yük</td><td>56434</td><td>Parafilmin ısıtılmasında genellikle herhangi bir ısı tabancası kullanılabilir</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Biyoreagentleri</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>Düşük Otofloresans Daldırma Yağı</td><td>Thorlabs</td><td>MOIL-30</td><td></td></tr><tr><td>Metanal</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A452-1</td><td>HPLC veya spektroskopik sınıf</td></tr><tr><td>Mikro Santrifüj Tüpü</td><td>VMR</td><td>525-1126</td><td>1,5 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikro Pipetterler</td><td>Ependorf</td><td></td><td>Çeşitli; 1000 &micro; L, 100 & mikro; L ve 10 &micro; L önerilmektedir</td></tr><tr><td>&Oslash; 1.5" Lens Tüpleri</td><td>Thorlabs</td><td>SM1.5L10</td><td>Dış diş örnek hazırlığı için kısaltıldı</td></tr><tr><td>Optik Tablo</td><td>Newport</td><td>RPR Güven</td><td>Tabelin boyutu mevcut alana bağlıdır</td></tr><tr><td>Optik dokular</td><td>Thorlabs</td><td>MC-50E</td><td>Çeşitli bileşenlerin temizlenmesi</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Millipore Sigma</td><td>P7669</td><td>İşlem sırasında gazlardan floresan bir şey olmadığını doğrulamayın</td></tr><tr><td>Piezo Aktüatör</td><td>Newport</td><td>PZA12</td><td></td></tr><tr><td>Pnömatik Titreşim İzolatörleri</td><td>Newport</td><td>I-2000 Serisi</td><td>optik tabloyu herhangi bir düzensizlik için stabilize etmek için kullanılır&nbsp;</td></tr><tr><td>Soğutmalı Banyo</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Isotemp 3016</td><td></td></tr><tr><td>Deklanşör Kontrolörü</td><td>Thorlabs</td><td>SC10</td><td>Görüntüleme yazılımına bağlı</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Millipore Sigma</td><td>S988</td><td></td></tr><tr><td>Steritop Filtresi</td><td>Millipore Sigma</td><td>S2GPT05RE</td><td></td></tr><tr><td>Switchbox Sürücüsü ve Kontrolcüsü&nbsp;</td><td>Newport</td><td>PZC200</td><td>Sahne kontrolörü</td></tr><tr><td>Şırınga Filtresi</td><td>J.T. Baker</td><td>SF01-98</td><td>PES 25mm 0.2 & mikro; M</td></tr><tr><td>TEC Elemanı</td><td>Thorlabs</td><td>TEC3-2.5</td><td>Peltirer ısı pompasını örnek tutucuya ve objektif tasmaya bağlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Sıcaklık kontrolleyicisi</td><td>Meerstetter Mühendisliği</td><td>TEC-1091</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık Dedektörü</td><td>Thorlabs</td><td>TH100PT</td><td></td></tr><tr><td>Termistör</td><td>Thorlabs</td><td>TH10K</td><td></td></tr><tr><td>Tube-O-Dialyzer</td><td>G Biosciences</td><td>786-611</td><td>4K MWCO</td></tr><tr><td>UV Ozon Temizleyici</td><td>Novascan</td><td>PSDP_UV</td><td>Pro Seri - Dijital &nbsp;</td></tr><tr><td>Zoom Optikler&nbsp;</td><td>Thorlabs</td><td>SM1NR1</td><td></td></tr></tbody></table>

lipid çift katmanlarında tek proteinlerin floresan mikroskopisi kullanılarak takibi

Tracking Single Proteins in Lipid Bilayers Using Fluorescence Microscopy

Lipid çift katmanlarında tek proteinlerin floresan mikroskopisi kullanılarak takibi

Direct observation is a fundamental method for scientific discovery and understanding. Time-lapse single-molecule fluorescence imaging allows the ...

tracking-single-proteins-lipid-bilayers-using-fluorescence

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu protokol, canlı hücrelerin yüzeyindeki tek reseptörleri görselleştirmek ve izlemek ve böylece reseptör yanal hareketliliğini, reseptör komplekslerinin boyutunu analiz etmek ve ayrıca geçici reseptör-reseptör etkileşimlerini görselleştirmek için toplam iç yansıma floresan mikroskobunun nasıl kullanılacağını açıklar. Bu protokol diğer zar proteinlerine genişletilebilir.

Tek molekül Floresan Mikroskopi Reseptör Dinamiği Yüksek çözünürlüklü Spatiotemporal Analizi

Plazma zarı proteinlerinin ve lipitlerinin mekansal dağılımı ve zamansal dinamikleri biyolojide sıcak bir konudur. Burada bu sorun, kavramsal olarak tek parçacık izlemenin aynı fiziksel miktarlarını sağlayan bir uzaysal-zamansal görüntü dalgalanma analizi ile ele alınmaktadır, ancak küçük moleküler etiketler ve standart mikroskopi kurulumları kullanır.

Ticari Mikroskop Canlı Hücre Zarları Moleküler Difüzyon Kanunu Hızlı Floresans Görüntüleme Gönderen

Biz yüksek çözünürlüklü mikroskopi için mika desteklenen lipit katmanlarını hazırlamanın bir yöntem mevcut. Mica bir atomik ölçekte şeffaf ve düz, ancak nadiren nedeniyle zorluklar ele görüntülenmesinde kullanılan; bizim hazırlık mika tabakanın da birikimi ile sonuçlanır, ve iki katmanlı hazırlanmasında kullanılan malzemeyi azaltır.

Mika hazırlanması Yüksek Çözünürlüklü Optik Mikroskopi Görüntüleme için lipit tabakalarının Desteklenen

Protein fonksiyonelleştirilmiş düzlemsel cam destekli lipid çift katmanlarının hazırlanması, içindeki protein hareketliliğinin belirlenmesi ve protein yoğunluklarının ölçülmesi burada gösterilmiştir. Yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe sahip tek çift katmanlı yerleşik florokromların görselleştirilmesine olanak tanıyan, gürültüsü azaltılmış bir Toplam İç Yansıma mikroskobu oluşturmak için bir yol haritası özetlenmiştir.

Planar on Tek Molekül Floresans Mikroskopi bilayers Desteklenen

Burada, tek bir molekül duyarlılık ve ~ 15 msn zaman çözünürlüğü ile polarize TIRFM kullanılarak lipozomlar ve mikroakışkan kanallarda desteklenen iki katmanlı arasındaki tek tuzak aracılı füzyon olayları tespit etmek için bir protokol mevcut. Lipid ve çözünür kargo sürümü aynı anda tespit edilebilir. Lipozom boyutu, lipit yayınım ve füzyon gözenek özellikleri ölçülmüştür.

Polarize TIRF Mikroskopi tarafından İzlenen mikroakışkan Akış Hücredeki Gergin Desteklenen Bilayers Tek Proteoliposomes ve tuzak aracılı Fusion

Burada, tek parçacık kantitatif değerlendirilmesi Difüzyon katsayıları, Floresans mikroskobu tarafından algılanan tek parçacıkların hareket ve küme boyutları türleri sağlar görüntü analizi izleme için bir iletişim kuralı mevcut.

Görüntü membran reseptörleri Floresans mikroskobu tarafından küme boyutunu ve Difüzyon analizi için protokol işleme

3D tek moleküllü lokalizasyon mikroskopisi, yaşayan bakteri hücrelerinde floresan olarak etiketlenmiş proteinlerin mekansal konumlarını ve hareket yörüngelerini araştırmak için kullanılır. Burada açıklanan deneysel ve veri analizi protokolü, sitosolik proteinlerin havuzhalinde ki tek moleküllü yörüngelere dayalı yaygın diffüzif davranışlarını belirler.

Tek Moleküllü İzleme Mikroskobu - Sitosolik Moleküllerin Diffüz Durumlarını Belirlemede Bir Araç

Bu protokol, moleküler kütlenin ve lipit membranlarla etkileşime giren makromoleküllerin difüzyon davranışının eşzamanlı olarak araştırılmasını sağlayan iSCAT tabanlı bir görüntü işleme ve tek parçacık izleme yaklaşımını açıklar. Numune hazırlama, kütleden kontrasta dönüştürme, film edinme ve son işleme için adım adım talimatlar, olası tuzakları önlemek için talimatlarla birlikte sağlanır.

Membranla İlişkili Makromolekül Dinamiğini Karakterize Etmek için Kütleye Duyarlı Partikül İzleme

Hücresiz resusyon, sitoiskelet düzeneğini anlamak için önemli bir araç olmuştur ve son on yıldaki çalışmalar, septin dinamiklerini minimal sistemlerde incelemek için yaklaşımlar oluşturmuştur. Burada septin montajını farklı membran bağlamlarında gözlemlemek için üç tamamlayıcı yöntem sunulmaktadır: düzlemsel çift katmanlılar, küresel destekler ve çubuk destekleri.

Biyofiziksel Özellikleri ve İşlevleri İncelemek için Membranlarda Septin Düzeneğinin Yeniden Sulandırılması

Burada, tek moleküllü toplam iç yansıma floresan (smTIRF) mikroskobu kullanılarak yapay kalabalık lipit membranları üzerindeki tek moleküllerin bağlanma, hareketlilik ve montajını gerçekleştirmek ve analiz etmek için bir protokol sunulmaktadır.

Tek Moleküllü Difüzyon ve Polimer Kalabalık Lipid Membranlara Montaj

Bu protokol, bireysel iyon kanallarını izlemek ve desteklenen lipit membranlarındaki aktivitelerini belirlemek için TIRF mikroskopisinin nasıl kullanılacağını açıklar, böylece yanal membran hareketi ile kanal fonksiyonu arasındaki etkileşimi tanımlar. Membranların nasıl hazırlanacağını, verilerin nasıl kaydedileceğini ve sonuçların nasıl analiz edileceğini açıklar.

Toplam İç Yansıma Floresan (TIRF) Mikroskobu Kullanılarak Lipid Çift Katmanlarında Yanal Mobilite ve İyon Kanalı Aktivitesinin Tek Moleküllü Görüntülenmesi

Öğrenin lipid çift katmanlarında tek protein takibi için floresan mikroskopisi kullanımını. Bu yöntem, membran proteinlerinin dinamiklerini ve gizli durumlarını incelemek için biyomimetik membranlar oluşturmayı kolaylaştırır.

Lipid çift katmanlarında tek proteinlerin floresan mikroskopisi kullanılarak takibi

Daha fazla video keşfet