Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Environmental Science

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 

組み換え食品の遺伝子検査

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

遺伝子組み換え食品は、成分や成分で dna 鑑定が具体的に変更を含む製品です。ポリメラーゼの連鎖反応と呼ばれる手法を使用して、これらの変更の有無を検出できます。

遺伝子組み換え食品の健康・環境安全上議論の懸念のために物議を醸す問題となっています。関心の食品サンプルで変更された DNA は、遺伝子組み換えの安全性と潜在的な危険性について教育を受けて意思決定遺伝子を検出する機能変更または生物、遺伝子組み換え作物、食品の供給します。

ポリメラーゼの連鎖反応、または PCR、使用食品遺伝子組み換えシーケンスの存在の有無を決定する DNA を増幅します。ゲルの電気泳動は agarose のゲルのマトリックスを通して増幅された DNA を引っ張るし、変更または非変更されたマーカーに対応するさまざまなサイズの DNA バンドを分離します。これらは、遺伝子組み換え作物を含んでいる食品からコントロールのバンドと比較してまたは変更自由に知られています。

サンプル、DNA を抽出し、遺伝子組み換えのプロセスで使用されるマーカーを増幅する方法、遺伝子組み換え作物の存在有無を食品サンプルでの確立、このビデオは食品から遺伝子組み換え DNA を検出原理を説明します。

ポリメラーゼの連鎖反応は、遺伝子組み換え食品に挿入された DNA の配列を識別します。DNA は比較的安定した分子は、実行可能な DNA 断片の増幅に適しては分離することができますからも高い加工品、チップ、トウモロコシや野菜のハンバーガーのような。規制の DNA シーケンスの数が少ない、遺伝子組み換え作物の大半にこれらのシーケンスがあるので挿入された遺伝子の発現を制御する使用されます。この手順は、2 つの最も一般的に使用される、35 s プロモーター遺伝子、nopaline 合成酵素ターミネーター遺伝子を識別します。35 秒のシーケンスは強力なプロモーター、挿入遺伝子に接続すると、ドライブ式の定数、高レベル。Nopaline 合成酵素のターミネーターが目的のエンドポイントで挿入された遺伝子の転写を停止に含まれます。

PCR は、サーマルサイクラー、PCR 反応管の温度をしっかりと制御機のサイクルを冷暖房システムに繰り返し必要があります。94 ° C にサンプルを加熱変性し別の dna が発生します。急速に冷却 45 ~ 65 °Cにより分離された dna にアニールするプライマー。最後に、72 °Cに加熱により、プライマーとターゲット領域の完全な複製を拡張するTaqポリメラーゼ酵素。

購入した工場プライマーは、各サンプルに追加され、植物 DNA を含む試料で増幅されます。35 s と NOS の遺伝子組み換え肯定的なテンプレートは遺伝子組み換え作物の肯定的な制御を提供するために使用します。認定非 GMO は、ネガティブ コントロールとして使用されます。予期しないバンドを表示これらのコントロール反応のいずれかの試験の結果は信頼できません。

増幅された DNA は、電気泳動ゲルを介して実行されます。PCR の製品は染料と混合、井戸に読み込まれます。DNA は負荷電し、商工会議所の陰極端にゲルに読み込まれるとき通電すると陽極末尾方向に移動されます。大きい DNA のフラグメントは、簡単にゲルを通って行列がいて陰極に近い小さいシーケンスが明瞭なバンドに異なるサイズの DNA の分離の結果、陽極末尾方向に移動しながら、移動できません。

電気泳動後ゲル染色視覚化することで分離された DNA バンド。

今では私たちは GMO 検出と遺伝子組み換え同定 PCR、電気泳動の使用の背後にある原則に精通している、このことができますの実行方法研究室で見てをみましょう。

関心の食品を特定したら、分析を開始できます。DNA を抽出するには、2 つのきれいなタンパーエビデント チューブを取り出して上下均等に試薬を混合する因数に調和をピペットを確かめて購入した DNA 分離試薬のこれら転送 500 μ L のそれぞれに。管「非遺伝子組み換え」、および"テスト"のいずれかラベルを付けます。

次に、認定の非遺伝子組み換え食品の 0.5 g を量り、きれいなモルタルに。2.5 mL の蒸留水を加えて、スラリーを形成する 2 分乳棒で粉をひきます。別 2.5 mL の蒸留水の水を加えて、スラリーをピペットに十分な滑らかになるまで研削を続行します。

「非遺伝子組み換え「DNA 分離試薬タンパーエビデント チューブをラベル付けする既知の非遺伝子組み換えスラリーの 50 μ l をピペット。「テスト」マークされてタンパーエビデント チューブにテスト食品サンプル スラリーの 50 μ L を追加します。渦 2 つは食品サンプルと 1 分の DNA 試薬を含むチューブします。次に、95 ° C、5 分で水浴にチューブを配置します。最後に、5 分間遠心にチューブを置きます。検査でチューブの下部に固体ペレットを形成する必要があります。場合は 5 分、再びペレット フォームまで 2 分間隔、遠心分離後は、ペレットは形成されていません。サンプルは今、PCR のためすぐに使用または 1 週間冷蔵庫で保存できます。

まず、6 番 PCR チューブ。これらの数字は、表に示す管内容に対応します。オープン キャップ付きマイクロ チューブ ホルダーにラベル付けされた PCR チューブのそれぞれを配置します。

新鮮なヒントを使用すると、追加するたびに、各 PCR チューブに表に示す 20 μ L プライマーを追加します。次に、各 PCR チューブに表に示す DNA サンプルの 20 μ L を追加します。上下のピペットをミックスします。小球形にされたサンプルは、必ず、上清からのみピペットし、チューブの下部に固体ペレットを避けるため。最後に、サーマルサイクラー PCR チューブに配置し、冷暖房の表に示す手順を順番にそれをプログラムします。

陰極端に最も近い、井戸を用いた電気泳動室に 3% の agarose のゲルを配置します。ゲル トレイの上部 2 mm をカバーする商工会議所に TAE バッファーを追加します。たちから PCR チューブを収集し、マイクロ チューブ ホルダーに配置。毎回新鮮なピペット チップを使用して、購入した DNA 各サンプルにローディングの染料の 10 μ L を加え、よく混ぜます。

この表に示されているように、1 つの井戸とその後井戸に各サンプルの 20 μ L に分子量定規の 20 μ L の agarose のゲルの井戸を読み込むたびに新鮮なヒントを使用して。100 V で 30 分間実行する電気泳動室を設定します。

ゲルが終了する実行している、慎重にゲル チャンバーを外し、トレイを取り外し、ゲルを染色トレイにスライドさせます。優しく汚れを配布するトレイを振って 5 分ゲル染色 x ご購入 100 でゲルを浸します。染色、洗浄容器にゲルを転送し、リンス水道水約 10, Destain の 3 分間温かい水道水で 3 回洗浄でそれぞれ最良の結果のための穏やかな揺れでそれぞれ。必要に応じて、目的のコントラストに到達するまで、暖かい水で染め色を続行します。

第 4 レーンで 200 bp のバンドの存在の有無は、試験食品に遺伝子組み換え作物が含まれているかどうかを示します。工場プライマーは、植物の DNA サンプルからの抽出できたかどうかを決定します。非遺伝子組み換え食品管理指標である偽肯定的な結果が発生します。非遺伝子組み換え食品管理が出てくる場合、正の値として、PCR がある時点で汚染されていたといいます。遺伝子組み換え肯定的なテンプレート コントロールは、有病誤診のインジケーターです。遺伝子組み換え肯定的なテンプレート コントロールが増幅しない場合 PCR 反応に問題があるし、検査食から GMO 負の結果は信頼できません。

DNA バンドを強調する対照的な背景を提供する白または黄色の紙に配置できるゲルまたは増加コントラストは UV ライト ボックスを使用して達成することができます。

食品や遺伝子組み換え成分の製品をテストすることは科学的なまたは規制上のアプリケーションの数に関連します。

組換え DNA 遺伝子組み換え作物から野生の穀物の人口のゲノムの交雑になることをいくつかの証拠があります。たとえば、花粉は、野生型遺伝子組み換えソースから花粉植物を肥やすことによってこの転送を促進するかもしれない。これは、問題全体として生態系にこれらの挿入された遺伝子の拡散の影響をよく理解されていません。野生の個体群の PCR テストは広がり、潜在的または遺伝的挿入の成功の封じ込めにデータを提供できます。

ラベル付け、または、遺伝子組み換え成分の不適切なラベルの欠如は、消費者の懸念をすることができます。これは、消費の消費者の嗜好や GM の過程でアレルゲンの潜在的な導入のため、後者は物議を醸すかもしれません。いくつかの国では、遺伝子組み換え成分食品包装に表示する必要があります。このような国の規制当局は、PCR の食品表示の正確性をチェックするテストを使用できます。

遺伝子組み換え作物に導入が農薬抵抗性を与えるいくつかの研究は「スーパー雑草」の生産についての懸念を調達しています。基本的に、最初異種交配などのメカニズムを介して殺虫剤への抵抗を取得変更対象植物のいずれかを指定できます。これらの植物が広がって、もっと首尾よくすることができるし、コントロールに挿入することがなくよりも難しくなります。PCR は遺伝子組み換えのテストを強調表示し、この普及が問題になるかどうかは、このような潜在的な集団を追跡する助けることができます。

ゼウスの遺伝子組み換え食品入門テストを見てきただけ。今、PCR、抽出し、食品からの DNA を増幅する方法と食品サンプルが遺伝的に変更されているかを確認する方法を使用して遺伝子組み換え食品を識別する背後にある原理を理解してください。見てくれてありがとう!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter