環境ソースから細菌のグラム染色

細菌の形態と環境試料の広い範囲から広範な細胞区別が視覚化グラム染色が可能です。細菌を染色するには、制服の汚れがガラス面に適用し、乾燥します。塗抹標本を熱固定後クリスタル ・ バイオレットが適用されます。

脱色剤はグラム陰性の細胞がないグラム陽性細胞からクリスタル バイオレットでリンスです。第 2 の色素は、通常サフラニンは、グラム陰性菌の細胞を可視化する背景の汚れとして使用されます。ステンド グラス、したら、チェーンやクラスターなどの配置、サイズ、細胞の形態のセルを評価できます。

このビデオは、環境試料、分離菌種そこに発見、隔離されたコロニーをグラム染色を実行を準備する方法を実演します

2 つの広い構造クラスにほとんどの細菌の分類では、グラム染色: グラム陽性およびグラム陰性。両方のクラスは、基になるリン脂質の膜を持っているが、細胞壁の構造が大きく異なります。グラム陽性菌の細胞壁は主に糖とアミノ酸で構成されるポリマーであるペプチドグリカンの厚い層で構成されます。グラム陰性菌の細胞壁は、ペプチドグリカン、2 番目の脂質膜に挟まれた薄い層を持っています。通常、この外膜には、リポ多糖が含まれています。

荷電クリスタル バイオレットは負荷電の細菌の細胞壁に弱くバインドします。グラムのヨウ素は、不溶性錯体により細胞壁の固定、クリスタル バイオレット色素を形成します。

脱色の段階では、契約し、クリスタル バイオレット-ヨウ素複合体をトラップにそれを引き起こしているグラム陽性細胞におけるペプチドグリカンは脱水です。グラム陰性菌細胞は、脱色剤、多孔性を増やす外膜が損なわれます。これは洗い流されるためクリスタル バイオレット-ヨウ素複合体ことができます。

グラム染色土壌細菌の背後にある原理を理解すると、処理を行う研究室では、土壌細菌をみましょう。

フィールドに土のサンプルを収集した後解析の研究室にそれをもたらします。サンプルを絞り込む、ふるい、ふるわれた土壌分析用天秤を使用しての 10 グラムの重量を量る。

リン酸緩衝生理食塩水とミックスする渦 95 mL にサンプルを希釈します。希釈液 1 に 10 追加、各希釈間ボルテックスを実行します。複製の低栄養 agarose のプレートの上に、少なくとも 3 の連続希釈の因数を転送します。

エタノール火炎滅菌でメディアに叩くことによって曲げガラス棒の冷却、板の表面にサンプルを広がってください。板室温で孵化させなさい。3 〜 5 日をインキュベート後 30 に 300 離散植民地で最も高い希釈を選択します。滅菌接種ループの分離のための興味のコロニーを選択します。

新鮮な板の 1 つのセクションの上にコロニーを連勝します。縞の間のループを殺菌、離散シングル コロニーのそれに続く分離のためにプレートの各セクションの上にジグザグ パターンの連続した縞を作る。プレートを 1 〜 2 日間室温でインキュベートします。

細菌塗抹標本の作製を開始するには、取り扱いの容易さのためあらかじめ洗浄し、ガラスのスライドにクリップをつけてください。各細菌塗抹標本をきれいおよび接種ループを火炎滅菌します。滅菌蒸留水の 2 loopfuls をスライドの中央に配置します。

ループを殺菌後、隔離されたコロニーから少量の文化をもう一度、削除、スライド上の水と混ぜます。寒天の接種部分数回タップすることで、文化に触れる前にループを冷却することが重要です。塗抹標本には、薄められた牛乳がようになります。室温で乾燥するためにスライドを許可します。乾燥後、熱はすぐに炎を通すことで塗抹標本を修正します。

一度乾燥し、ピペット、塗抹標本上にクリスタル ・ バイオレットと放置の 2-3 分は慎重に優しく流れる水をできるように、スライドの上部に向かって直接の流れを目指すことで蒸留水を使用してスライドをすすいでください。塗抹標本に直接水流を目指していません。

グラムのヨウ素を使用してスライドをカバーします。2 分後蒸留水で優しくすすいでください。汚れはもはや洗い流すまで 95% のエタノールを含むスライドを脱色します。すぐに水で洗い流してください。これは、過剰に塗抹標本を脱色が制限されます。

カウンターの汚れとして 30 の塗抹標本にサフラニンを追加 s。これは、グラム陰性菌の細胞の存在を汚します。慎重に蒸留水ですすぎ、吸水紙で乾燥しみ。結果スライドを顕微鏡で観察します。粗調整を行いより高い倍率の小さいビューのフィールド移動する前に汚れの理想的な部分を見つけるに最初低消費電力目的を使用します。

さらにイメージングおよび媒体力目的の塗抹標本を調整後、塗抹標本に直接浸漬オイルを追加します。オイルは、最高の顕微鏡写真を提供する高出力目的に必要です。グラム陽性菌は、グラム陰性菌の細胞は赤色になります間、青や紫の色で表示されますまたはピンク。細胞壁の構造に加え形状と配置を生じる顕微鏡写真から明らかです。

細菌を質的研究する染色グラムの機能は、科学分野の広い範囲にとって重要です。

土壌は細菌の分離し、分析から環境のソースのひとつです。飲料水、サンプル準備を変更しなければなりません。水道水のサンプルを蛇口から引き出される、多様な従属栄養細菌のコロニーの成長を促進する成長メディアにメッキできます。R2A など媒体にめっき、時にプロセスは土壌手順とほぼ同じです。

特定の細菌同定手法のパラメーターが興味の細菌の細胞壁の種類に依存します。この例では、敗血症患者の血液はテストされ、グラム陽性菌をかくまっているように発見されました。

この情報により、細胞の rRNA は連結を種特異的ペプチド核酸プローブを選ばれました。これらのプローブは、現在の種を識別するために使用された蛍光染料にバインドされていた。

グラム陽性および否定的な細胞構造の根本的な違いのため細菌クリスタル バイオレット以外にも他の化合物にユニークな応答があります。この実験は、クロストリジウム ・ ディフィシル、糞便検体からのグラム陽性菌を孤立させようとします。グラム陰性菌の細胞の成長を阻害する、サイクロセリンは寒天プレートに追加されました。プレートに成長したグラム陽性の細胞がさらに他の方法で分離しました。

ゼウスのグラム染色環境研究入門を見てきただけ。今、プロセスと手法を実行し、結果を利用する方法の利点を理解する必要があります。見てくれてありがとう!