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Environmental Microbiology

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通过过滤水样粪便细菌的分离

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膜过滤和后续培养细菌收集是一个有用的技术评估的质量和清洁的水源。

注定要在农业、 娱乐,或国内的设置中使用的水的质量具有重要的意义,因势而为水性疾病的爆发。如果水与粪便污染问题从动物或人类,然后致病性寄生虫、 细菌或病毒可能传播到新主机上它们的摄入。监测这种引起疾病的生物体的水源因此关键是要确保公共卫生。

数量和种类的水源中可能存在的粪-口病原体是不切实际测定每个独立和定期的基础上。相反,常见微生物化验水质利用细菌大肠菌群指标。有关此过程的详细信息,请参阅上指示生物的此集合的视频。

此视频将说明过程中膜过滤对环境水样,演示如何培养几种类型的细菌粪便指标包括总大肠菌群、 粪大肠菌群和粪 entercocci,并描述如何核实存在的粪便污染。

膜过滤技术利用负压若要绘制水样横过筛选器和陷阱的细菌。筛选器是专门的膜最小平均孔隙大小为 0.45 μ m,可以将捕获的细菌,通常是约 1 微米的大小。后过滤,膜应用于琼脂培养基,并孵化条件下适当培养目标微生物。

这种技术是最理想的低浊源,如饮用水、 游泳池、 或湖泊、 水库。水中颗粒物含量高会导致污染或堵塞的过滤器,可以处理的成交额有所限制。此外,膜过滤是不实用的水源含大量的背景或非大肠菌群细菌,像未经处理的污水,因为这可以增加难度的枚举目标大肠菌群对文化和孵化。

一旦细菌样品被困在筛选器中,他们可以转移到生长板来确定类型的细菌指标目前水样品中。镀上不同的媒体类型选择不同的细菌类型,并可以允许快速鉴定。

后文化具体板上的增长,进一步的指标细菌身份确认可以进行使用摘殖民地成液体介质和使用达勒姆管来捕获气体,只应在粪大肠菌群或总大肠菌群存在生产等技术。此外,怀疑粪肠球菌可以证实的革兰氏染色阳性,以及负面的过氧化氢过氧化氢酶试验的组合。

现在,我们都熟悉膜过滤的水样背后的原则,让我们看看如何进行此过程。

开始执行程序,首先感兴趣的测试水来源收集水样本。确保样品采集在无菌 1 升瓶。一旦收集完成后,把样品放在冰上,运到微生物分析实验室。

要开始分析,第一次消毒膜过滤流形。接下来,连接到真空泵和过滤废物瓶含漂白剂的流形。

乙醇火焰消毒钳,从袋中取出不育的网格膜。将筛选器放置的流形,膜过滤面积中心并将无菌过滤漏斗应用到单位,然后安全到位。

测量出测试水入漏斗所需体积。应用局部的真空装置,使试验样品通过过滤器。悬浮固体物质,包括细菌和其他有机物质,大于 0.45 μ m 将被困或内的筛选器,而更小的颗粒,病毒,和溶解性固体将进入虽然含漂白剂的废瓶。

样品已通过筛选器后,冲洗漏斗的内部用无菌水 25 毫升 3 次,允许这通过筛选。完成最后一次漂洗时,断开真空和删除流形的漏斗。

接下来,乙醇火焰消毒钳,并立即从设备上卸下滤膜。把它放到适当增长板为目标微生物利用滚动运动,确保完整接触的表面,避免捕获气泡。

为每个进一步的样品处理、 消毒不锈钢流形,并使用一个无菌的漏斗,防止交叉污染。最后,在适当的潜伏期进入孵化器放置钢板。

后潜伏期,从孵化器枚举删除板。如果可能的话,执行在低功率放大使用一个很酷的白色光源下菌落计数。若要确定总大肠菌群,识别和计数菌落出现粉红色到呈暗红色,并有完全或部分覆盖殖民地金属表面的光泽。非典型的大肠细菌总数可能出现暗红色,粘液,或有核无光泽。

出现蓝色、 白色、 无色,或粉红色无光泽的殖民地被视为非大肠菌和不应列入总大肠菌群计数。

粪大肠菌群菌落将显示为深浅不一的蓝色,并且这些应算作一个单独的类别。非粪大肠菌群菌落典型灰色到奶油色,而且还应记录在一个单独的类别。最后,粪肠球菌殖民地将范围从粉红到深红的颜色,并应分开计算。

若要验证大肠细菌总数,不适用于灭菌和冷却的接种环感兴趣一单菌落。将所选的殖民地转移到含月桂 tryptose 肉汤和达勒姆管玻璃容器。接下来,放入孵化器的文化。随着天然气产量达勒姆管被俘虏的浊度的存在作为总大肠菌群验证殖民地。

为粪大肠菌群的核查,无菌转入殖民地蓝色的玻璃容器灭菌 EC 培养基和达勒姆管。将接种的管放入孵化器。孵化后混浊的接种与气体一起生产确认的殖民地是粪大肠菌群。

若要确认粪肠球菌,无菌转移疑似的殖民地与脑心浸液琼脂板上正确的形态和孵化。接下来,转移对应用两个无菌玻璃幻灯片从孤立的群体生长。

将 2-3 滴的 3%的双氧水添加到一个玻璃载玻片。气体快速生产指示如柠檬酸的过氧化氢酶阳性细菌。粪肠球菌细菌是过氧化氢酶阴性;因此,观察到不冒泡。对于不显示冒泡的过氧化氢酶阴性殖民地,执行一种革兰氏染色。粪肠球菌,这些应该出现克积极,卵形,以及被分组大多成对或短链。

在水源中找到任何这些细菌指标指示存在的污染。如果超过 5%的样本被发现在一个月内污染,源可能会被视为适宜供人食用。

膜过滤常用的在生物学上的应用,数目和粪便指示生物也可以通过其他实验程序检测。这些应用程序的一些探讨在这里。

膜过滤法也可以用于病毒捕获从水样。由于病毒将通常会出席非常低的水平,水样必须集中以捕获它们以供分析。捕获的病毒然后可以免除了筛选器,并确定使用单元格文化感染力化验或 PCR 等技术。

膜过滤也利用在工业或实验室用高纯水的生产。很多行业的业务过程,需要高度纯净的水和膜过滤可去除污染物,包括有害的溶解态的重金属和水中的盐。它也可以在咸水淡化用来生产饮用水。

你刚看了朱庇特的简介滤膜法确定指标生物在水中。你现在应该明白如何膜滤膜水样品、 如何培养几种类型的粪便指标细菌从膜,以及如何确认这些作为指示生物。谢谢观赏 !

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