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Analytical Chemistry

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Interne Standards

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Probenverlust auftreten kann, jedes Mal, wenn eine Probe ist verarbeitet oder übertragen werden, wodurch genaue Berechnungen der Konzentration schwierig.

Um Genauigkeit zu gewährleisten, müssen die Auswirkungen der Probenverlust mit sorgfältigen Probenvorbereitung minimiert werden und durch beschränken der Anzahl der Beispielschritte Handling und Transfer. Probenverlust kann jedoch auch durch systematische Fehler, wie z. B. unvollständige Probe Manipulation, Matrix-Effekte und Variationen in analytischen Verfahren auftreten.

Diese Quellen des Verlustes können berücksichtigt werden durch Zugabe von ein bekannter Konzentration einer Art ähnlich aber nicht identisch, auf die Verbindung von Interesse. Dies nennt man einen internen Standard. Jede Probe Verluste an den internen Standard sollte ähnliche für den Analyten, zulassend die Konzentration genau berechnet werden.

Dieses Video wird die Verwendung einer internen standard und richtigen Labor Technik Probenverlust berücksichtigen bei der Festlegung der Konzentration eines unbekannten zu veranschaulichen.

Interner Standard ist eine Substanz, die in einer bekannten Menge Normen, Proben und Rohlinge während einer Analyse hinzugefügt.

Chromatographie und Spektroskopie ist das Verhältnis des Signals für den internen Standard und den Analyten berechnet. Dieses Verhältnis, genannt der Responsefaktor ist proportional zum Verhältnis des Analyten und standard-Konzentrationen.

Responsefaktor, R, kann durch die folgende Gleichung, wo ein stellt die analytische Signale der Probe und internen Standards und C stellt die Konzentrationen der Probe und internem Standard ausgedrückt werden.

Interner Standard kann systematische und zufällige Fehler ausgleichen. Z. B. zufällige Fehler – wie Inkonsistenzen bei der Messung einer Probe—das gleiche für den internen Standard und den Analyten. Daher wird das Verhältnis ihrer Signale nicht ändern.

Für systematische Fehler, wie Matrix-Effekte in Lösung wird das Verhältnis nicht betroffen sein, solange die Matrix-Effekt für den Standard und den Analyten entspricht.

Während interne Standards großen Nutzen bieten, kann es schwierig sein, eine wählen, die geeignet ist. Ein internes Standards muss ein Signal sein, ähnlich aber nicht identisch mit den Analyten ist. Es kann nicht auch die Messung des Analyten in keiner Weise beeinflussen.

Schließlich muss die Konzentration bekannt sein. Dies wird dadurch erreicht, dass der interne Standard nicht nativ in der Probe vorhanden ist; so ist die einzige Einnahmequelle in Lösung die bekannte Konzentration hinzugefügt.

In das folgende Experiment wird die Konzentration von Koffein in einer unbekannten Probe durch Gaschromatographie ermittelt werden.

Dies wird erreicht durch die Schaffung einer Kalibrationskurve mit bekannten Koffein Lösungen mit Adenin als interner Standard. Die Steigung der Kalibrierungskurve entspricht der Responsefaktor.

Sobald der Responsefaktor bekannt ist, kann die Konzentration des unbekannten aus der gemessenen Chromatogramm Flächenverhältnis berechnet werden.

Nun, da Sie die Grundlagen des internen Standards zu verstehen, werfen wir einen Blick auf das Verfahren.

Um den Vorgang zu starten, wiegen Sie genau 100 mg von den internen standard, Adenin, in ein sauberes Becherglas.

Als nächstes in etwa 20 mL Dimethyl Sulfoxid lösen Sie auf, und mischen Sie die Lösung.

Sobald das Adenin aufgelöst hat, füllen Sie die Lösung in eine volumetrische 50-mL-Flasche.

Spülen Sie die Becher und Stir Bar mit 10 mL DMSO und gießen Sie die Spülung in die Flasche. Wiederholen Sie diese spülen zweimal, um die richtige Lösung zu gewährleisten. Zur Kalibrierung Marke, was zu einem internen Standard mit einer Konzentration von 2 mg/mL auffüllen.

Als nächstes wiegen Sie 100 mg Koffein in ein Becherglas eine Stammlösung vorbereiten. Das Koffein mit einer kleinen Menge von Methanol auflösen. Verwenden Sie dann 3 Spülungen, diese Lösung auf einem frischen 25 mL volumetrischen Kolben übertragen. Dies ist der 4 mg/mL Stammlösung. Verwenden Sie es, um 3 Koffein-Standards zu schaffen.

Fügen Sie 0,2 mL der internen standard, Adenin, jedem Kolben. Füllen Sie jeweils auf das Endvolumen mit Methanol. Jede Lösung zu einem Probenfläschchen zu übertragen.

Laufen Sie jeder Koffein-Standard durch einen Gaschromatographen. Berechnen Sie das Verhältnis der Peakflächen für das Koffein im Vergleich zu standard Adenin.

Zunächst wiegen Sie 2 g Kaffee in einen 100-mL-Becherglas, und nehmen Sie das Gewicht.

Als nächstes fügen Sie 20 mL Methanol, das Koffein aus dem Kaffee zu extrahieren. Lassen Sie die Lösung für 20 min rühren.

Über einen Büchner-Trichter, Filtern Sie aus dem Kaffeesatz. Spülen Sie den Becher mit einer kleinen Menge von Methanol und gießen Sie diesem Spülen in den Trichter. Wiederholen Sie die Spülung zweimal.

Der letzte Band der das Filtrat zu messen; Es sollte etwa 35 mL.

Um die Probe für die Analyse vorzubereiten, fügen Sie 1 mL Kaffee-Extrakt zu einem Probenfläschchen. Dann fügen Sie 0,2 mL des internen Standards Adenin, und legen Sie das Fläschchen in das Instrument Auto-Sampler Rack.

Führen Sie eine Gaschromatographie-Analyse der Probe, um sicherzustellen, dass die Bedingungen sind, so dass das Koffein und Adenin getrennt sind.

Berechnen Sie nach Abschluss der Analyse die Peakfläche des internen Standards und der Analyt.

Sobald alle Proben analysiert haben, kann die standard Eichkurve für Koffein/Adenin-Lösungen durch Plotten die Verhältnisse der Peakflächen gegen die Verhältnisse der Konzentrationen bestimmt werden. Die Steigung dieser Linie, die der Responsefaktor darstellt, war 1,8.

Als nächstes werden die GC-Daten aus der extrahierten Kaffee-Probe analysiert. Das Verhältnis von der Peakflächen errechnete 1,78 sein. Mit der Responsefaktor und bekannter Konzentration von den internen standard, Adenin, wurde die Konzentration von Koffein in der unbekannten Probe berechnet 0,33 mg/mL.

Viele verschiedene Arten von Reaktionen in verschiedenen wissenschaftlichen Schüler nutzen interne Standards, um die Auswirkungen von Fehlern und Probenverlust zu minimieren.

Die Auswirkungen der Probenverlust begegnet während der Probenvorbereitung können minimiert werden, mit internen Standards, ihre Konzentration-Verhältnis nahezu konstant zu halten.

In diesem Beispiel wurden bioaktiver Lipide aus lysierten Zellen mit einem flüssig-flüssig-Extraktionsverfahren extrahiert. Stabiler Isotope interne Standards wurden zu Beginn der Extraktion, um Fehler während der Probenvorbereitung berücksichtigen hinzugefügt.

Interne Standards waren nicht nur kritisch für die Vorbereitung der bioaktive Lipide, sondern auch für die Analyse. Die Lipide wurden getrennt, mittels Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie und per Massenspektrometrie analysiert.

Spektroskopie hilfst internen Standards korrekt für zufällige Fehler aufgrund von Änderungen in der Intensität der Lichtquelle. Wenn eine Lampe oder andere Lichtquelle Variablen Leistung hat, wirkt sich die Absorption und infolgedessen Emission einer Probe. Jedoch wird das Verhältnis von internem Standard, Analyt bleiben konstant, auch wenn die Lichtquelle nicht der Fall ist.

Chromatographie ist eines der größten Fehlerquellen der Injektion. Auto-Samplern minimieren kann, aber Fehler immer noch 1 – 2 % relative Standardabweichung.

In diesem Beispiel wurden Dampf-Normen mit einem internen Standard mit Gaschromatographie herstellen eine Kalibrationskurve analysiert. Sobald dies abgeschlossen war, konnte dann der unbekannte Probe gemessen werden und die Verluste aufgrund der Volatilität der Probe entfielen.

Sie sah nur Jupiters Einführung in internen Standards. Sie sollten jetzt best Practices für die Minimierung Probenverlust, interne Standards und Antwort Faktoren verstehen.

Danke fürs Zuschauen!

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