Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

Larval лимфы Гланд вскрытие

 
Click here for the English version

Larval лимфы Гланд вскрытие: Изоляция Drosophila гемоцитов производства органа

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Drosophila меланогастер личиночной лимфатической железы отвечает за производство гемоцитов, или клеток крови, которые циркулируют в личиночной гемолимфы. Для выявления лимфатической железы, сначала найти спинной сосуд, или сердце, которое насосы гемолимф по всему телу. Следуйте спинной сосуд к голове, пока вы не найдете мозг.

Чтобы найти первичную долей, определите самую большую долей железы. Эта доля содержит три зоны, определяемые различными стадиями развития гемоцитов. Медуллярная зона ближе всего к спинному сосуду содержит незрелые гемоциты, в то время как корковая зона содержит зрелые гемоциты.

Чтобы вскрыть лимфатическую железу, вам понадобится рассекающий микроскоп, два типса для манипулирования личинками и буферный солевой раствор.

В этом примере мы будем вскрывать лимфатические железы для использования в иммуногистохимии.

- Для начала вскрытия лимфатических желез, добавить 1 миллилитр 1x PBS до 1 хорошо 24-хорошо пластины для каждого экспериментального параметра, которые будут вскрыты. Затем, используя одноразовые передачи пипетки, добавить 1 капли 0,1% PBST к каждому колодец. Поместите пластину плашмя на лед. Место чистой вскрытой площадке на освещенной базе стереомикроскопа.

Передача личинки на падение PBST для вскрытия. Держите лаву с одной парой типсов, спинной стороной вверх, примерно 1/4 длины от заднего конца. Со второй парой типсов, возьмите кутикулу непосредственно перед первой парой и аккуратно потяните кутикулу личинки к передней, пока крючки рта не будут выставлены.

Отпустите кутикулу и использовать оба типса, чтобы разделить личинку. Удалить задний конец от падения PBST и отбрасывать. Pin вниз кутикулу для стабильности, а затем использовать вторую пару типсов, чтобы захватить открытые крючки рот и осторожно вытащить их. Это отделит кутикулу от внутренних структур.

Держась за крючки для рта, тщательно удаляйте нежелательные структуры, такие как слюнные железы, жировое тело и кишечник. Аккуратно подберите вскрытый тканевой комплекс за ротовые крючки и перенесите его в колодец пластины на льду. Повторите вскрытие с таким количеством личинок, сколько пожелает, но не превышать 30-минутного времени вскрытия, прежде чем перейти к этапу фиксации.

Чтобы начать монтаж тканей, поместите каплю монтажного буфера на стеклянную горку. Использование крючков для рта в качестве ручки, перенесите лимфатическую железу в буферную каплю.

Аккуратно сдвиньте один щипец щипцов под спинной сосуд, аккуратно потянув к периферии монтажного буфера, чтобы вытянуть и сгладить лимфатическую железу. При распиловке движения, вырежьте спинной сосуд между лимфатической железой и мозгом.

Возьмите чистый крышку скольжения и тщательно опустите его на монтаж буфера. Слайды теперь готовы для визуализации или могут храниться при 4 градусах по Цельсию до необходимости.

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter