Encyclopedia of Experiments: Biology
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- La glándula linfática larvaria Drosophila melanogaster es responsable de la producción de hemocitos, o células sanguíneas, que circulan en la hemolífafa larvaria. Para identificar la glándula linfática, primero encontrar el vaso dorsal, o corazón, que bombea hemolymph por todo el cuerpo.
Para encontrar el lóbulo primario, Identificar el lóbulo más grande de la glándula. Este lóbulo contiene tres zonas, definidas por diferentes etapas del desarrollo de hemocitos. La zona medular más cercana al vaso dorsal contiene hemocitos inmaduros, mientras que la zona cortical contiene hemocitos maduros.
Para diseccionar la glándula linfática, necesitarás un microscopio diseccionador, dos fórceps para manipular las larvas y una solución salina tamponada.
En este ejemplo, diseccionaremos las glándulas linfáticas para su uso en inmunohistoquímica.
- Para comenzar la disección de la glándula linfática, agregue 1 mililitro de 1x PBS a 1 pozo de una placa de 24 pozos para cada ajuste experimental que se disecciona. Luego, usando una pipeta de transferencia desechable, agregue 1 gota de 0.1% PBST a cada pozo. Coloque la placa plana sobre hielo. Coloque una almohadilla de disección limpia en una base de estereomicroscopio iluminada.
Transfiera una larva a la gota pbst para su disección. Sostenga la lava con un par de fórceps, lado dorsal hacia arriba, aproximadamente 1/4 de longitud desde el extremo posterior.
Suelte la cutícula y utilice ambas fórceps para bisectar la larva. Retire el extremo posterior de la caída y deseche PBST. Ancle la cutícula para la estabilidad y luego use el segundo par de fórceps para agarrar los ganchos de boca expuestos y sacarlos suavemente.
Mantener el control de los ganchos bucales, eliminar cuidadosamente las estructuras no deseadas, como las glándulas salivales, el cuerpo de grasa y el intestino. Recoger suavemente el complejo de tejido diseccionado por los ganchos de la boca y transferirlo a un pozo de la placa sobre hielo.
Para comenzar el montaje del tejido, coloque una gota de amortiguador de montaje en una corredera de vidrio. Usando los ganchos de la boca como mango, transfiera la glándula linfática a la gota del amortiguador.
Deslice cuidadosamente una pinza de los fórceps debajo del vaso dorsal, tirando suavemente hacia la periferia del amortiguador de montaje para extraer y aplanar la glándula linfática. Con un movimiento de aserrado, corte el vaso dorsal entre la glándula linfática y el cerebro.
Tome un resbalón de cubierta limpio y baje cuidadosamente sobre el búfer de montaje.
