Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Pour commencer, fixez une pupe de mouche des fruits dorsale, ou dos, côté vers le haut. Retirez l’operculum ou l’extrémité antérieure de la pupe pour exposer la tête de l’animal. Continuez à ouvrir la pupe en coupant et en éplucher le boîtier. Une fois libérée, couvrez la pupe disséquée avec PBS pour éviter la dessiccation. Faites une coupe propre et transversale à travers le thorax et retirez la partie postérieure de la carcasse.
Pour exposer le complexe œil-cerveau, qui comprend les deux rétines attachées aux lobes optiques, commencer à déchirer l’épithélium du bord ouvert du thorax et continuer à ouvrir la capsule de la tête progressivement. Puis, guider soigneusement le complexe œil-cerveau loin des restes de la capsule de la tête.
Dans le protocole d’exemple, nous verrons une démonstration d’une dissection pupal oeil-cerveau utilisée pour isoler le tissu pour diverses analyses en aval.
- Après avoir placé la pupe Drosophila sur un plat de dissecting noir, déposer un morceau frais de ruban adhésif à double face sur le plat disséquant loin des nymphes et utiliser une paire de forceps pour placer soigneusement le côté dorsale des nymphes sur la bande.
Placez le plat sous un microscope stéréo et utilisez des forceps pour enlever l’operculum de chaque pupe. Utilisez des ciseaux de microdissection pour trancher chaque cas de pupal, ce qui lui permet d’être ouvert pour révéler la tête, le thorax et le segment abdominal antérieur, et fixer les bords du boîtier pupal au ruban adhésif à double face.
Percer l’abdomen de chaque pupe avec des forceps tranchants et retirer la pupe de son cas pupal. Placez la pupe sur le plat de dissection loin de la bande, et couvrez la pupe de 400 microlitres de PBS glacé. Utilisez des forceps pour saisir chacun par l’abdomen, et utilisez les ciseaux de microdissection pour faire une incision transversale propre à travers le thorax, coupant la pupe en deux.
À l’aide de deux paires de forceps fins, saisir les bords coupés de chaque épithélium du thorax et ouvrir graduellement le thorax et la capsule de la tête, exposant le complexe œil-cerveau dans le tissu adipeux environnant. Puis, sans saisir le tissu, utiliser des forceps pour guider chaque translucide, blanc éteint, complexe oculaire-cerveau en forme d’haltère loin des restes de la capsule de tête.
