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维沃的德罗索菲拉 钙成像:神经元活动功能成像方法

 
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维沃的德罗索菲拉 钙成像:神经元活动功能成像方法

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- 德罗索菲拉神经系统进行体内成像基因编码的指标(GCaMP)表达感兴趣神经元神经元激发行动潜力时,的快速去极化会导致电压门通道打开,导致细胞外大量涌入细胞。

GCaMP一种融合蛋白其中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)被修改融合N-终点站肌素M13片段C终点站的钙结合蛋白——卡尔莫杜林镇定素结合,触发GCaMP顺从变化导致蛋白质荧光增加。

要将 GCaMP 荧光的变化图像化为体内神经元活动的代理通过预期活动暴露神经系统的区域然后,使用荧光显微镜,可以捕捉 GCaMP 动态,并配备刺激交付设置。 提供刺激,例如,气味同时记录GCaMP荧光响应神经元。

示例协议中,我们将看到GCaMP 功能成像用于嗅觉关联学习期间可视化大脑蘑菇中的反应

- 可视化基于GFP 的指标,请调谐装有红外激光目标多光子显微镜激光安装振动隔离兴奋波长 920 纳米,安装 GFP 带传滤波器。 使用 Z 调整旋钮,扫描通过大脑 z 轴定位大脑感兴趣区域使用作物功能扫描仅聚焦感兴趣区域最大限度地缩短扫描时间,旋转扫描视图,使头部前部下。 然后,调整框架大小512 x 512 像素,并选择扫描区域同时考虑每个计算扫描时间,以实现至少 4 赫兹速率

对于气味唤起的瞬态可视化,启动能够连接图像采集软件气味传递程序预编程封装,并在显微镜软件开始测量 6.25以建立 F0 基线值。气味输送系统通过点光 LED 指示提供 2.5 的气味刺激特定气味的打开关闭触发,然后气味偏移结束时记录 12.5然后,同样的方式重复交付第二和第个气味

在此设置执行关联调节请使用计算机控制的气味输送系统呈现条件刺激气味 60 秒, 以及1290伏的电击。 休息60在没有的情况下,仅显示条件刺激去气味60通过完成训练阶段 3 分钟后重复训练前气味刺激方案,再次测量训练后气味唤起瞬态然后,适当的格式保存成像文件,以供以后图像分析。

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空值,问题,
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