Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Ein Y-Maze besteht aus einem Y-förmigen Verbinder mit drei Fliegenfläschchen, die durch gerade oder verjüngte Rohre mit ihm verbunden sind. Fliegen bewegen sich durch das Labyrinth zur Seite mit dem Stimulus, den sie bevorzugen. Um das Experiment zu starten, legen Sie ein Gewebepapier mit der Lösung, die die flüchtigen Chemikalien enthält, in jede Durchstechflasche. Dann verbinden Sie sie mit den verjüngten Rohren. Die verjüngten Rohre begrenzen die Fähigkeit der Fliegen, in die Mitte des Labyrinths zurückzukehren und verlangsamen die Diffusion der flüchtigen Stoffe.
Als nächstes Chill verhungerte Fliegen, um sie zu verlangsamen. Verwenden Sie keine chemische Anästhesie, da dies das Ergebnis des Assays beeinflussen kann. Verbinden Sie schnell die Durchstechflasche mit den gekühlten Fliegen auf die letzte Seite des Labyrinths. Verlassen Sie die Fliegen, um das Labyrinth zu erkunden. Um jede Präferenz durch helles Licht zu reduzieren, führen Sie diesen Schritt unter weit-rotem Licht, das Fliegen nicht sehen. Schließlich zählen Sie die Fliegen auf jeder Seite des Labyrinths.
Im Beispielprotokoll sehen wir eine Einrichtung des Y-Maze-Assays mit Wildtyp Drosophila.
- Vor der Durchführung des Testes am nächsten Morgen, am Ende des Tages, Transferkohorten von 10 bis 20 Versuchslinien auf Glasfläschchen mit Feuchtigkeit aus einem nassen Handtuch. Die Fliegen müssen in 16 bis 18 Stunden getestet werden, oder sie könnten durch Austrocknung oder Hunger sterben. Am nächsten Tag montieren Sie das Y-Maze. Beginnen Sie mit der Verbindung des Y-förmigen Verbinders mit zwei Glasfläen mit Schaumstoffanschlüssen mit getrimmten Pipettenspitzen, die die Leitungen bilden.
Der dritte Ast des "Y" ist an einem Laderohr befestigt, das aus dem großen Teil einer Pipettenspitze besteht, und ermöglicht den Durchgang von der Ladeflasche zum Wahlpunkt des Labyrinths. Hinter jedem verjüngenden Tunnel befindet sich eine Glasflasche, von der eine mit einem Geruchsstoff beladen werden muss.
Um den Test durchzuführen, kühlen Sie zunächst die Fliegen auf Eis kurz, so dass die Fliegen verlangsamt werden. Dies sollte unter weit-rotem Licht von LED-Lampen und bei 25 Grad Celsius sein. Lassen Sie die Flugkohorte vorsichtig in die Ladefläschchen fallen und laden Sie das Y-Labyrinth mit den Testfliegen. Verwenden Sie keine Gasanästhesie.
- Es ist wirklich wichtig, die Fliegen schnell und schonend auf die Ladefläschchen zu übertragen. Es ist eigentlich der schwierigste Schritt dieses Experiments, da Fliegen schnell vor der Diffusion von Gerüchen im Y-Labyrinth aufwachen müssen.
- Die Fliegen sollten das Labyrinth für 24 Stunden erkunden dürfen, so dass sich eine maximale Anzahl von Fliegen zu der einen oder anderen Glasflasche bewegt. Die Anzahl der Fliegen, die in den verschiedenen Röhren vorhanden sind, dient der Berechnung des Geruchsindex. Auf diesen Wert sollten statistische Standardmethoden angewendet werden, die aus dem Verhalten von bis zu 10 Fliegen gewonnen werden.
Wenn 10-Fliegen-Kohorten nicht konsistente Ergebnisse liefern, können die Versuche mit 20-Fliegen-Kohorten durchgeführt werden. Um die Labyrinthkomponenten zu reinigen, einweichen, demontiert, in RBS 35 MD über Nacht. Folgen Sie dies mit Spülungen in Leitungswasser und einer endgültigen Spülung in DI-Wasser vor der Lufttrocknung.
