Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Um labirinto Y consiste em um conector em forma de Y com três frascos de mosca conectados a ele por tubos retos ou afilados. As moscas se movem através do labirinto em direção ao lado com o estímulo que preferem. Para iniciar o experimento, coloque um papel de tecido com a solução contendo os produtos químicos voláteis em cada frasco.
Em seguida, frio moscas famintas para retardá-las. Não use anestesia química, pois isso pode afetar o resultado do ensaio. Conecte rapidamente o frasco com as moscas geladas até o lado final do labirinto. Deixe as moscas explorarem o labirinto.
No protocolo de exemplo, veremos uma configuração do ensaio Y-maze com drosophila tipo selvagem.
- Antes de realizar o ensaio na manhã seguinte, no final do dia, transfira coortes de 10 a 20 linhas experimentais para frascos de vidro com umidade fornecida a partir de uma toalha molhada. As moscas devem ser testadas em 16 a 18 horas, ou podem morrer devido à dessecação ou fome. No dia seguinte, monte o labirinto Y. Comece unindo o conector em forma de Y a dois frascos de vidro usando conectores de espuma com pontas de pipeta aparadas que fazem os conduítes.
O terceiro ramo do "Y" está ligado a um tubo de carga, feito a partir da grande porção de uma ponta de pipeta, e permite a passagem do frasco de carga para o ponto de escolha do labirinto. Além de cada túnel afunilado há um frasco de vidro, um dos quais deve ser carregado com um odorante. Carregue-os como boluses de 40 microliter encharcados em quadrados de 28 milímetros de papel de tecido.
Para realizar o teste, primeiro esfrie as moscas no gelo brevemente, para que as moscas sejam abrandadas. Esta deve estar sob luz vermelha das lâmpadas LED e a 25 graus Celsius. Levemente solte a coorte de moscas no frasco de carga e carregue o labirinto Y com as moscas de teste.
- É realmente fundamental transferir as moscas para o frasco de carga de forma rápida e suave. É na verdade o passo mais difícil deste experimento porque as moscas têm que acordar rapidamente antes da difusão de odores no labirinto Y.
- As moscas devem ser autorizadas a explorar o labirinto por 24 horas, de modo que um número máximo de moscas se movem para um ou outro frasco de vidro. O número de moscas presentes nos diferentes tubos serve para calcular o índice olfativo. Métodos estatísticos padrão devem ser aplicados a esse valor, coletados a partir do comportamento de até 10 moscas.
Se as coortes de 10 moscas não estiverem fornecendo resultados consistentes, os ensaios podem ser executados com coortes de 20 moscas. Para limpar os componentes do labirinto, mergulhe-os, desmontados, em RBS 35 MD durante a noite. Siga isso com enxaguas na água da torneira e uma lavagem final em água DI antes da secagem do ar.
