Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begynn med å velge en tredje instar larve, den største av larveformene, fra kulturmediet, og vask den med vann for å fjerne mat. Siden larveøyne, eller Bolwig-organer, ligger i øvre front av larven, plasser larven i midten av en agarplate med lyskilden over dyret. Slå av romlyset og la larven akklimatisere seg til mørket.
Siden larven knapt kan påvises på et lyspunkt laget av synlig lys, slå på infrarøde LED-lys for å belyse dyret for kameraet. Vent til dyret begynner å krype rett for å kontrollere for sin vei. Og roter deretter platen slik at larven kryper direkte mot lyspunktet. Registrer dyret som kryper inn i lyset og deretter bort fra lyspunktet. Denne lysunngåelsestaktikken hjelper larver å unngå rovdyr ved å grave inn i mat.
I det følgende eksemplet vil vi utføre lyspunktanalysen for å teste evnen til forskjellige genetiske stammer av Drosophila larver for å unnslippe lys.
- Før du introduserer larven til bildeoppsettet, må du skaffe deg en kort video av lysposisjonen og navngi den ufiltrerte kontrollbakgrunnsvideoen "lightarea1". Plasser filteret tilbake på kameralinsen, og slå på et lys langt fra den eksperimentelle enheten med så lav innstilling som mulig, samtidig som larvene kan observeres tydelig. Bruk en skje for å fjerne noen larver fra kulturmediet, og velg forsiktig en tredjedel instar larve.
Vask larven i destillert vann, og legg larven i midten av agarplaten. Fjern forsiktig overflødig vann fra larven, og slå av romlyset. La larven akklimatisere seg i to minutter i det mørke miljøet før du slår på det infrarøde LED-lyset. Følgende lysunngåelsesadferdseksperiment må utføres i mørket. For å gjøre det lettere å demonstrere, filmet vi i det sterke lyset.
Pensle forsiktig larven til midten av platen. Når larven begynner å krype rett, roterer du platen for å få larven til å bevege seg mot lyspunktet. Klikk Capture, Setup og Video Capture for å velge lagringsbanen. Og klikk Start opptak for å spille inn. La lavaen krype mot, skriv inn og la lyspunktet være til det er nesten ute av synefeltet, og klikk deretter Stopp opptak.
Flytt filteret bort fra kameraet, og skaff deg en kort video av lysets posisjon. Gi deretter innlegget et ufiltrert video, "lightarea2", og sammenlign denne videoen med "lightarea1" -videoen for å sikre at lyspunktposisjonen ikke endres.
