Light Spot Assay: Une méthode pour étudier le comportement phototaxique Drosophila

- Commencez par choisir une troisième larve de stade, la plus grande des formes larvaires, du milieu de culture, et la lavez-la avec de l’eau pour enlever toute nourriture. Puisque les yeux larvaires, ou organes bolwig, sont situés à l’avant supérieur de la larve, placez la larve au centre d’une plaque d’agar avec la source lumineuse au-dessus de l’animal. Éteignez la lumière ambiante et laissez la larve s’acclimater à l’obscurité.

Comme la larve est à peine détectable dans un point lumineux fait par la lumière visible, allumez les leds infrarouges pour éclairer l’animal pour la caméra. Attendez que l’animal commence à ramper directement pour contrôler son chemin. Et puis faites pivoter la plaque de sorte que la larve rampe directement vers le point lumineux. Enregistrez l’animal rampant dans la lumière, puis loin de la tache lumineuse. Cette tactique d’évitement de la lumière aide les larves à éviter les prédateurs en creusant dans les aliments.

Dans l’exemple suivant, nous effectuerons l’analyse des taches lumineuses pour tester la capacité des différentes souches génétiques des larves de Drosophila à échapper à la lumière.

- Avant d’introduire la larve dans la configuration de l’imagerie, acquérir une courte vidéo de la position de la lumière, et nommer la vidéo de fond de contrôle non filtrée « lightarea1 ». Placez le filtre sur la lentille de la caméra, et allumez une lumière loin du dispositif expérimental à un réglage aussi bas que possible tout en permettant aux larves d’être clairement observées. Utilisez une cuillère pour enlever certaines larves du milieu de culture, et sélectionnez doucement une troisième larve de instar.

Lavez la larve dans de l’eau distillée et placez la larve au centre de la plaque d’agar. Retirez doucement tout excès d’eau de la larve et éteignez la lumière ambiante. Laissez la larve s’acclimater pendant deux minutes dans l’environnement sombre avant d’allumer la lumière infrarouge à LED. L’expérience suivante d’évitement de la lumière doit être réalisée dans l’obscurité. Pour plus de commodité de démonstration, nous avons filmé dans la lumière vive.

Brossez doucement la larve au centre de la plaque. Lorsque la larve commence à ramper droit, faites pivoter la plaque pour faire tourner la tête de la larve vers le point lumineux. Cliquez sur Capture, Configuration et Capture vidéo pour sélectionner le chemin d’enregistrement. Et cliquez sur Démarrer l’enregistrement pour enregistrer. Laissez la lave ramper vers, entrez et laissez le point lumineux jusqu’à ce qu’elle soit presque hors du champ de vision, puis cliquez sur Arrêter l’enregistrement.

Éloignez le filtre de la caméra et achetez une courte vidéo de la position du point lumineux. Nommez ensuite le message comme une vidéo non filtrée, « lightarea2 », et comparez cette vidéo avec la vidéo « lightarea1 » pour vous assurer que la position du point lumineux n’est pas modifiée.