Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begynd med at vælge en tredje instar larve, den største af larveformerne, fra kulturmediet, og vask det med vand for at fjerne mad. Da larveøjnene eller Bolwig-organerne er placeret i larvens øverste front, skal larven placeres i midten af en agarplade med lyskilden over dyret. Sluk for rumlyset og lad larven akklimatisere sig til mørket.
Da larven næppe kan påvises i et lyspunkt lavet af synligt lys, skal du tænde infrarøde LED-lys for at belyse dyret til kameraet. Vent, indtil dyret begynder at krybe lige til kontrol for sin vej. Og drej derefter pladen, så larven kryber direkte mod lyspletten.
I følgende eksempel vil vi udføre lyspletanalysen for at teste forskellige genetiske stammer af Drosophila larvers evne til at undslippe lys.
- Før du introducerer larven til billedopsætningen, skal du anskaffe en kort video af lyspositionen og navngive den ufiltrerede kontrolbaggrundsvideo "lightarea1". Placer filteret tilbage på kameralinsen, og tænd et lys langt fra forsøgsenheden ved så lav indstilling som muligt, mens du stadig tillader, at larverne tydeligt observeres. Brug en ske til at fjerne nogle larver fra kulturmediet, og vælg forsigtigt en tredje instar larve.
Vask larven i destilleret vand, og placer larven i midten af agarpladen. Fjern forsigtigt overskydende vand fra larven, og sluk for rumlyset. Lad larven akklimatisere i to minutter i det mørke miljø, før du tænder for det infrarøde LED-lys. Følgende lysundgåelsesadfærdseksperiment skal udføres i mørke.
Børst forsigtigt larven til midten af pladen. Når larven begynder at kravle lige, skal du dreje pladen for at få larven til at gå mod lyspunktet. Klik på Capture, Setup og Video Capture for at vælge lagringsstien. Og klik på Start optagelse for at optage. Tillad lavaen at krybe mod, gå ind i og forlade lyspunktet, indtil det næsten er ude af synsfeltet, og klik derefter på Stop optagelse.
Flyt filteret væk fra kameraet, og få en kort video af placeringen af lys stedet. Derefter navngive stillingen som en ufiltreret video, "lightarea2", og sammenligne denne video med "lightarea1" video for at sikre, at lys stedet position ikke ændres.
