UV照射:染色体外配列を統合する方法

- トランスジェニックワーム株を生成する最も簡単な方法であるマイクロインジェクションによる染色体外DNAアレイの作成は、細胞分裂中に安定に伝達されない遺伝的要素をもたらし、したがって、可変相続率と発現レベルを示す。

これを行うには、マイクロインジェクションによって以前に導入された染色体外配列を運び、彼らがgravid成人に成長することを可能にするL4トランスジェニックワームの年齢同期集団から始めます。これらの大人を新しいプレートに移し、各プレートに少なくとも30個の卵があるまで卵を産むことができます。大人を取り除き、L4段階に達するまで卵が成長することを許可します。

一晩の回復期間の後、生き残ったワームの数を数える.死んだワームのごく一部は効率的な照射を示す。その後の世代がホモ接合統合トランスジェニックラインを分離することを観察する。例のプロトコルでは、咽頭で表現された蛍光共噴射マーカーを運ぶ高伝達速度の外染色体アレイを統合する。

-統合されるトランスジェニックラインの透過率を評価する.トランスジェニックラインごとに、蛍光ステレオスコープの下で10個の別々の培養プレートに10人の蛍光グラビド成人を選ぶ。

毎日子孫を監視して、共噴射マーカーが発現し、最もよく観察できる発達段階を評価する。蛍光立体視法を用いて、蛍光性の子孫の割合を決定して子孫の透過率を評価する。

統合のためにL4幼虫期に同期したトランスジェニック動物の集団を得なさい。5つの培養プレートに30人の蛍光グラビド成人を選んでください。ワームが摂氏15度で3〜4時間卵を産んだ後、プレートで少なくとも30個の卵の存在を確認し、プレートから成人を排除します。

生後がL4幼虫段階に達するまでワームインキュベーターで動物を培養する。15~20匹の蛍光トランスジェニックL4動物を含む各プレートを蓋を取り除いたUV架橋器に入れ、ワームを照射する。

回収のために、照射したワームを摂氏15度で一晩インキュベートし、生きている動物の数を確認してください。私たちの手では、効率的な照射に適応的な生存率が80%から90%程度です。