Beutefang-Assay: Eine Methode, um das Beutefangverhalten von Zebrafischlarven zu untersuchen

- Um zu beginnen, legen Sie eine Zebrafischlarve in eine Aufnahmekammer, wie ein Glasbodenbrunnen, in dem eine Larve schwimmen kann. Sammeln Sie Paramecia, die Beute, mit Hilfe einer Mikropipette, und legen Sie sie in die Aufnahmekammer. Als nächstes legen Sie einen kleinen Tropfen Wasser in der Mitte der Abdeckung rutschen und legen Sie es über die Kammer, um eine Luftblase zu vermeiden.

Platzieren Sie nun die Kammer auf dem Beleuchtungssystem, das mit einem weißen LED-Ringlicht ausgestattet ist, um Schatten zu eliminieren und die Organismen deutlich sichtbar zu machen. Beobachten Sie das Beuteerfassungsverhalten mit einem Verhaltensaufzeichnungssystem. Sobald die Beute in Sicht weitet, konvergiert die Larve ihre Augen und nimmt eine J-Drehung, um ihren Körper an der Beute auszurichten und sie einzufangen. Wir können das Beutefangverhalten quantifizieren, indem wir die Anzahl der Paramezien, die über einen längeren Zeitraum in der Kammer verbleiben, aufzeichnen. Im folgenden Protokoll werden wir das Beutefangverhalten der Zebrafischlarve nach dem Laser bewerten. Ablation bestimmter Neuronen.

- Nachdem Sie das Verhaltensaufzeichnungssystem eingerichtet und eine Larve gemäß dem Textprotokoll in eine Aufnahmekammer gelegt haben, verwenden Sie eine Mikropipette, um 50 Paramezien zu sammeln und in die Aufnahmekammer zu legen. Um einen Abdeckzettel auf die Aufnahmekammer zu legen, legen Sie einen kleinen Tropfen Wasser auf den Deckelschlupf, bevor Sie ihn auf die Wasseroberfläche der Aufnahmekammer legen, um Luft in die Kammer zu vermeiden.

Legen Sie die Aufnahmekammer in das Beleuchtungssystem. Starten Sie dann die Zeitrafferaufzeichnung mit 10 Bildern pro Sekunde für 11 Minuten. Führen Sie schließlich eine Analyse nach dem Textprotokoll durch.