Light-Dark Preference Test: Eine Methode, um Angst-bezogenes Verhalten bei Zebrafischen zu studieren

- Erstellen Sie zunächst ein dreiseitiges Gehäuse um den Testbereich, um äußere Reize zu minimieren, die das Fischverhalten beeinflussen können. Richten Sie diffuse Overhead-Beleuchtung ein, um Wasseroberflächenreflexionen zu vermeiden. Als nächstes füllen Sie die Arena, die in dunkle und helle Zonen unterteilt ist, mit Lebensraumwasser bei 28 Grad Celsius.

Platzieren Sie die Arena im Gehege. Bewahren Sie den Lebensraumtank , der Fische enthält, außerhalb des Geheges. Lassen Sie die Fische sich akklimatisieren, um ihren Stress zu reduzieren.

Nun, netzen Sie vorsichtig einen Fisch aus dem Lebensraum Tank und legen Sie es in den Testtank. Positionieren Sie die Fische senkrecht zu den langen Seiten der Arena, um Voreingenommenheit in Richtung einer der beiden Zonen zu vermeiden. Beobachten Sie das Verhalten der Fische mit Aufnahmesoftware und wiederholen Sie den Test für den Rest der Fische. Messen Sie die durchschnittliche Zeit, die jeder Fisch in den hellen und dunklen Zonen verbracht.

Zebrafische neigen dazu, mehr Zeit in der dunklen Zone zu verbringen, wenn sie ängstlich sind. Im Beispielprotokoll werden wir einen hell-dunklen Test durchführen, um die Auswirkungen der Ethanol-Exposition auf das Verhalten von Zebrafischen zu beobachten.

- Erhalten Sie eine hell-dunkle Arena 9 und 1/2 Zentimeter breit von 55 Zentimetern lang und 9 und 1/2 Zentimeter tief mit einem weißen wasserdichten Boden. Befestigen Sie weißes und schwarzes wasserdichtes, nicht reflektierendes Papier an den Innenwänden der Arena mit Velcro, wobei die Hälfte der Arena weiß und halb schwarz bedeckt ist. Füllen Sie die Arena bis zu einer Tiefe von 5 Zentimetern mit Lebensraumwasser bei einer Temperatur von 25 bis 28 Grad Celsius. Bewahren Sie diese Temperatur während der gesamten Prüfung.

Minimieren Sie externe visuelle Reize durch den Bau eines weißen dreiseitigen Gehäuses für die zu installierende Arena. Stellen Sie sicher, dass der Testbereich über eine diffuse Overhead-Beleuchtung verfügt, die keine Reflexionen auf der Wasseroberfläche verursacht, aber dennoch ausreichend hell für die Bewegungsverfolgungssoftware oder die manuelle Quantifizierung nach dem Hoc aus Videobildern ist. Legen Sie dann die Aufzeichnungs- und Bewegungsanalyseparameter der Verhaltensverfolgungssoftware mit einer Testdauer von 5 bis 15 Minuten fest, je nach Forschungsfrage.

Transportieren Sie die Gruppe der Fische, die getestet werden sollen, in das Forschungsgebiet im Habitatbecken und legen Sie sie außerhalb des Arena-Geheges. Lassen Sie die Fische 10 Minuten lang sich akklimatisieren. Netzen Sie sanft einen Fisch aus der entsprechenden Gruppe und platzieren Sie ihn in der Mitte der helldunklen Arena, wobei jeder Fisch freigesetzt wird, wenn er parallel zur langen Achse der Arena positioniert ist, um zu vermeiden, dass die Fische in die helle oder dunkle Zone verzerrt werden.

Beginnen Sie die Aufzeichnung Verhalten unmittelbar nach der Veröffentlichung des Tieres. Achten Sie auf alle Software-Probleme mit der Verfolgung der Fische oder für Fisch springen oder einfrieren. Nachdem der Versuch beendet ist, sanft netzn und entfernen Sie die Fische aus der Arena zu einem haltenden Tank oder Lebensraum Tank. Drehen Sie die Arena 180 Grad nach der Hälfte der Probanden wurden getestet, um jegliche Verweichungen aufgrund von Verzerrungen, die daraus resultieren, aus denen Ende der Arena ist auf das offene Ende des Gehäuses ausgerichtet zu verhindern.

Beginnen Sie mit der Analyse, indem Sie die Zeit untersuchen, die in hellen und dunklen Zonen verbracht wird. Für jede Gruppe und für jeden Fisch, erhalten Sie die relative Zeit in den hellen und dunklen Zonen verbracht und analysieren mit einem Beispiel t-Test, um zu bestimmen, ob Gruppen signifikant bevorzugen eine Fläche gegenüber der anderen. Um Präferenzen zu vergleichen, berechnen Sie einen Präferenzindex, indem Sie die Zeit in der Lichtzone von der Zeit in der dunklen Zone verbracht und vergleichen Sie Unterschiede zwischen Gruppen mit t-Tests. Vergleichen Sie mehrere Gruppen mit einer einseitigen Analyse der Varianz, unter Verwendung von Tukey s.