Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

חילוץ DNA מקליפ זנב

 
Click here for the English version

חילוץ DNA מקליפ זנב: שיטה המשמשת Genotyping זברה

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- התחל את ההליך על ידי הנחת דג מבוגר מורדם על ערימה של נייר סופג. עכשיו להשתמש בסכין גילוח סטרילי לחתוך את סנפיר הזנב במהירות להעביר את הדג למיכל המכיל מים מתוקים להתאוששות. מעבירים את קליפ הזנב לצינור נקי המכיל חיץ תמוגה. מאגר התמוגה מכיל חומרי ניקוי לא-אוניים, המרגיעים את קרום הפלזמה ואת הקרום הגרעיני של התא. החיץ מכיל גם אנזים הנקרא proteinase K המפרק חלבונים ומאפשר שחרור דנ"א לתוך הליזוז. עיכול, עיכול.

עכשיו, להשאיר את הצינורות עם קליפים זנב באינקובטור לילה כדי לשבור לחלוטין את הרקמה ב 55 מעלות צלזיוס עם סיבוב מתמשך. לאחר מכן, לחמם את הצינור ב 95 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות כדי להשבית את proteinase K. צנטריפוגה הצינור כדי גלולה חומר מעוכל ולהעביר את supernatant המכיל DNA לצינור אחר.

- ביום הכנת ה- DNA, להוסיף חלבון טרי K למאגר התמוגה בריכוז של 1 מיליגרם למיליליטר.

ראשית, להרדים את הדג בתמיסת tricaine. לחכות עד תנועות הזימים איטי. לאחר מכן, לשים את הדג על ערימה של רקמות, עם סכין גילוח סטרילי, לחתוך חתיכה קטנה של סנפיר הזנב על 2 עד 3 מילימטרים ארוכים.

להרים את קליפ סנפיר עם קצה פיפטה סטרילי ולהעביר אותו לתוך צינור מלא מאה microliters של מאגר תמוגה DNA. הקפד לתייג הן את הטנק של החיה ואת הצינור. הדגירה כל הרקמות שנאספו לפחות ארבע שעות עד לילה ב 55 מעלות צלזיוס.

לאחר הדגירה, להשבית את החלבון K על ידי חימום הצינורות ב 95 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. דגימות אלה יש להשתמש עבור PCR מיד, אבל יכול גם להיות מאוחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס עד שלושה חודשים.

Tags

ערך ריק הנפקה
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter