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Extracción de ADN del clip de cola

 
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Extracción de ADN del clip de cola: un método utilizado en el genotipado de pez cebra

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- Iniciar el procedimiento colocando un pez adulto anestesiado en una pila de papel absorbente. Ahora utilice una hoja de afeitar estéril para cortar la aleta de cola y transferir rápidamente el pescado a un tanque que contiene agua dulce para su recuperación. Transfiera el clip de cola a un tubo limpio que contenga un tampón de lisis. El tampón de lisis contiene detergentes no iónicos, que solubilizan la membrana plasmática y la membrana nuclear de una célula. digestión.

Ahora, deje los tubos con clips de cola en una incubadora durante la noche para descompone completamente el tejido a 55 grados Celsius con rotación continua. A continuación, calentar el tubo a 95 grados Centígrados durante 15 minutos para inactivar la proteína K. Centrifugar el tubo para extraer material no digerente y transferir el sobrenadante que contiene ADN a otro tubo.

- El día de la preparación del ADN, añadir proteína fresca K al tampón de lisis a una concentración de 1 miligramos por mililitro.

Primero, anestesia a los peces en solución de tricarina. Espera a que los movimientos branquiales se ralenticen. Luego, pon el pescado en una pila de tejidos y, con una hoja de afeitar estéril, corta un pequeño trozo de la aleta de cola de unos 2 a 3 milímetros de largo.

Coge el clip de aleta con una punta de pipeta estéril y transfiéralo a un tubo lleno de cien microlitros de amortiguador de lisis de ADN.

Después de la incubación, inactivar la proteinasa K calentando los tubos a 95 grados Celsius durante 15 minutos. Estas muestras deben utilizarse para PCR inmediatamente, pero también se pueden almacenar a menos 20 grados Celsius durante un máximo de tres meses.

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