Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

DNA-extraktion från svansklämma

 
Click here for the English version

DNA-extraktion från svansklämma: En metod som används vid zebrafisk genotypning

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Börja proceduren med att placera en bedövad vuxen fisk på en hög med absorberande papper. Använd nu ett sterilt rakblad för att skära svansfenan och överför snabbt fisken till en tank som innehåller färskt vatten för återhämtning. Överför stjärtklämman till ett rent rör som innehåller en lysbuffert. Lysbufferten innehåller ickeioniska rengöringsmedel, som lösligar plasmamembranet och atommembranet i en cell. Bufferten innehåller också ett enzym som kallas proteinas K som bryter ner proteiner och möjliggör frisättning av DNA i lysatet. matsmältningen.

Lämna nu rören med svansklämmor i en inkubator över natten för att helt bryta ner vävnaden vid 55 grader Celsius med kontinuerlig rotation. Värm sedan röret vid 95 grader Celsius i 15 minuter för att inaktivera proteinas K. Centrifuge röret till pellets osmält material och överför supernatanten som innehåller DNA till ett annat rör. Tillsätt alkohol för att fälla ut DNA och centrifugera igen för att samla DNA i en pellet. I följande protokoll isolerar vi DNA från svansklämman på en vuxen zebrafisk och från ett helt embryo.

- dagen för DNA-preparatet tillsätt färskt proteinas K till lysbufferten vid en koncentration av 1 milligram per milliliter.

Först bedöva fisken i trikainlösning. Vänta tills gillrörelserna saktar ner. Lägg sedan fiskenen hög med vävnader och skär med ett sterilt rakblad av en liten bit av svansfenan ca 2 till 3 millimeter lång.

Plocka upp fenklämman med en steril pipettspets och överför den till ett rör fyllt med hundra mikroliter DNA-lysbuffert.

Efter inkubationen inaktiverar du proteinaset K genom att värma rören vid 95 grader Celsius i 15 minuter. Dessa prover bör användas för PCR omedelbart, men kan också lagras vid minus 20 grader Celsius i upp till tre månader.

Tags

Tomt värde ärende
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter