Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Un corazón de pez cebra consta de cuatro cámaras, senos paranasales, Atrio, ventrículo y arteriosis bulbosa. Se encuentra anteriormente en el lado ventral entre el operculum y la faja pectoral, una parte del sistema esquelético que apoya la aleta pectoral. Para diseccionar el corazón, colocar un pez fijo eutanasiado en una placa de Petri que contiene solución salina tamponada de fosfato para mantener un pH constante de los tejidos de los peces y orientarlo lado ventral hacia arriba.
Sostenga la cabeza del pez con fórceps entre los ojos y las branquias. Usando un microscisor, cortado a través de las branquias, a través del vientre anterior, y luego verticalmente, conectando las dos primeras incisiones. Con una pinza afilada, retire la aleta pectoral y la faja pectoral subyacente para revelar el pericardio plateado, la membrana que cubre el corazón. Retire el pericardio con fórceps para hacer visible el corazón.
A continuación, coloque fórceps debajo del atrio y saque el corazón de la cavidad corporal. sostenga el corazón con los fórceps, y use otros fórceps para eliminar el tejido no deseado presente fuera del corazón.
- Asignar a cada pez una combinación de letras numérias para permitir que un pez individual y el corazón diseccionado resultante sean rastreados para su análisis posterior. Introduzca todos los datos, incluidas todas las mediciones, en una hoja de cálculo y organícelos en función de estas etiquetas. Antes de la disección, etiquete las tiras de tubo PCR con el número de seguimiento asignado y llene los tubos con PBT u otra solución adecuada para su posterior análisis. Orientar el lado ventral del pescado hacia arriba en una placa De Petri mientras estabiliza el cuerpo con fórceps, sosteniendo la cabeza entre los ojos y las branquias. un pinholder, eliminar los músculos pectorales y aletas del cuerpo para revelar el corazón.
- El movimiento constante de los fórceps durante la disección puede causar corrientes en el PBT que mueven el pez. Esto es particularmente problemático para los peces más pequeños.
- Utilice los fórceps para sacar suavemente el corazón de la cavidad de debajo del atrio. Si el pez contiene un marcador cardíaco fluorescente, utilice un alcance fluorescente para la disección y verifique la extracción del corazón por fluorescencia. Una vez que el corazón se extraiga de la cavidad, utilice las fórceps para sostener el corazón y una microneedle para eliminar el tejido nocardiaco adicional y el revestimiento epicardial del exterior del corazón.
Para peces de más de 12 milímetros de longitud estándar, usando microscisores manejados por resorte, hacer tres incisiones. Primero, hacer un corte transversal a través de las branquias. Segundo, hacer otro corte transversal en el vientre anterior. Y tercero, hacer un corte sagital en el lado ventral conectando ambos cortes transversales. Usando fórceps afilados, eliminar los músculos pectorales y aletas del cuerpo para abrir la cavidad corporal y revelar el tejido plateado del pericardio.
Retire este tejido pericárdico. Y el corazón se hará visible. Una vez cortada esta arteria, coloque las puntas de los fórceps debajo del atrio y utilice los fórceps para sacar el corazón de la cavidad. Si hay tejido adicional que viene con el corazón, está bien, ya que se puede extraer más tarde.
- Tenga cuidado con la ubicación del atrio si utiliza la técnica alternativa, ya que se puede dañar fácilmente. Si hay tejido adicional que viene con el corazón, esto está bien y se puede limpiar después.
- Una vez que se extraiga el corazón de la cavidad, utilice las dos fórceps para sujetar el corazón y extraer el tejido adicional o un par de fórceps para sostener el corazón y un microneedle para extraer tejido nocardiaco adicional.
